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       【关键词】  熊果酸； 含量测定方法
       熊果酸（ursolie acid，UA）又名乌索酸、乌苏酸，属于三萜类化合物，广泛存在于熊果、白花蛇舌草、女贞子、乌梅等天然植物和草药中，具有抗炎、护肝、降血脂等多种生物学活性［1～4］。目前许多中药材及其制剂常选用熊果酸的含量作为其质量控制指标。本文对熊果酸含量测定方法的研究进展综述如下。
       1  分光光度法
          
       李国章等［5］建立了湘产3种苦丁茶中熊果酸含量测定的分光光度法，具体操作是取苦丁茶经索氏提取器提取后，加入5%香草醛－冰醋酸、高氯酸显色，在波长548 nm处测定吸光度，结果熊果酸在4～20 μg·ml-1浓度范围内线性关系良好，加样回收率为98.96%。罗启剑等［6］采用同样方法测定了连钱草中熊果酸含量，结果熊果酸在0～18 μg·ml-1浓度范围内线性关系良好，加样回收率为100.64%。
       2  薄层扫描法
          
       白洁等［7］采用双波长薄层扫描法测定了夏枯草中熊果酸的含量，具体操作为取夏枯草药材粗粉经95％乙醇超声提取两次，滤液用70℃水浴蒸干，残渣用石油醚浸泡两次，挥干溶剂，用95％乙醇溶解后测定。采用硅胶G板，以环己烷－氯仿－醋酸乙酯（20∶5∶8）为展开剂，用10％硫酸乙醇溶液显色，选用λS=540 nm，λR=700 nm进行双波长反射式锯齿扫描，结果熊果酸在0.314～1.570 μg范围内线性关系良好，加样回收率为99.3％。张军等［8］建立了狼疮静颗粒中熊果酸的薄层扫描法测定方法，具体操作为取狼疮静颗粒用乙醚萃取3次，合并乙醚萃取液水浴蒸干乙醚，残留物加无水乙醇－氯仿（3∶2）混合液溶解后测定，以环己烷－氯仿－醋酸乙酯－甲酸（20∶5∶8）为展开剂，用10％的硫酸乙醇液显色，以λS=520 nm，λR=700 nm进行双波长薄层扫描，结果熊果酸在0.498～3.084 μg范围内线性关系良好，加样回收率为97.91％。
       3  高效液相色谱法
       3.1  HPLC－UV法戚志华等［9］采用HPLC法测定了陕西女贞子中熊果酸的含量，其方法为取女贞子粉末经超声提取后采用HPLC法，选用Lichrospher C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，流动相为乙腈－甲醇－水－磷酸－三乙胺（50∶30∶20∶0.02∶0．04），流速1 ml·min-1，测定波长为205 nm，结果熊果酸在20.48～102.4 μg范围内线性关系良好，加样回收率为100.6％。梁洁等［10］采用HPLC法测定了广西产美味猕猴桃根中熊果酸的含量，具体操作为取美味猕猴桃根粗粉经超声提取后测定，选用Thermo Hypersil BDS C18柱（4.6 mm×250 mm，5 μm），流动相为乙腈－0.1％ 磷酸水溶液（85∶15），流速1.0 ml·min-1，检测波长210 nm，结果该方法熊果酸线性范围为12.5～150 μg·ml-1，平均回收率为99.35％。
       3.2  HPLC－ELSD法赵永席等［11］建立了高效液相色谱－蒸发光散射检测法（HPLC－ELSD）测定山茱萸中熊果酸的含量，具体操作为取山茱萸经索氏提取后采用Phenomenex C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，流动相为甲醇－0.5％冰醋酸水溶液（87:13），流速0.8 ml·min-1，蒸发光散射检测器漂移管温度65℃，载气（N2）流速2.0L·min-1，结果熊果酸在1.16～3.48 μg范围内时线性关系良好，平均回收率为97.5％。赵宇新等［12］建立了HPLC－ELSD法测定中药饮片木瓜及中成药制剂知柏地黄丸中熊果酸的含量，其操作为去样品经提取后采用Kromasil C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）色谱柱，柱温40℃，甲醇－水－冰醋酸（260∶40∶0.15）为流动相，流速0.6 ml·min-1，漂移管温度85℃，气体流速2.60 L·min-1，结果熊果酸在0.380～1.90 μg范围内线性关系良好，熊果酸的回收率分别为99.8％。
       3.3  HPLC－MS法杨宜华等［13］采用液质连用法测定了白花蛇舌草中熊果酸含量，其操作为取样品经超声提取后选用Hypersil ODS C18（150 mm×4.6 mm，5 μm）色谱柱，流动相甲醇－0.05％冰醋酸（75∶25），二极管阵列检测器，流速0.2 ml·min-1，柱温45℃，质谱采用大气压化学离子化探头，选择性离子流模式（正离子），APCI400℃，CDL250℃，BLOCK 250℃，结果熊果酸在20.4～163.2 μg·ml-1范围内线性关系良好，加样回收率为100.78％。
       4  气相色谱法
          
       黄建林等［14］建立了测定番石榴叶中熊果酸的气相色谱－质谱（GC－MS）方法，具体操作为取样品经微波萃取后以双（三甲硅烷）三氟乙酰胺（BSTFA）为衍生化试剂，将熊果酸制成三甲基硅烷衍生物后，在DB－5 MS毛细管柱上进行分离，柱升温程序为：柱初温100℃，恒温保持2 min，以每分钟10℃的速度升温至300℃，保持14 min，通过与标准样品对照比较保留时间和质谱确认样品中熊果酸的色谱峰，以峰面积进行定量测定，结果熊果酸在4.7～114 μg·ml-1范围内线性关系良好，回收率为89.4%。
       5  高效毛细管电泳法
       
       迟道兵等［15］建立了高效毛细管电泳（HPCE）法测定山茱萸中熊果酸含量的方法，其操作为取样品经索氏提取后以15 mmol·L-1磷酸氢二钠（Na2HPO4）－15 mmol·L-1硼砂（Na2B4O7）（pH9.22）、含10%甲醇（V/V）的缓冲体系作为运行电解质溶液，检测波长214 nm，分离电压20.0 kV进行分离检测，结果熊果酸在0.57～0.95 mg·ml-1范围内线性关系良好，平均加样回收率为97.43%。张锋等［16］采用毛细管电泳高频电导法测定了夏枯草中熊果酸的含量，其方法为取样品经索氏提取后以布洛芬为内标，采用毛细管区带电泳，高频电导检测，未涂层弹性融硅石英毛细管柱（55 cm×75 μm ID，有效长度46cm），1.2 mmol·L-1三乙胺－HCl（pH=10.60），β-环糊精（0.08 mmol·L-1）为运行缓冲液，分离电压12.5 kV，重力进样10 s（高度20 cm），结果熊果酸在4.3～120.4 μg·ml-1范围内线性关系良好，加样回收率分别为98.2％。
       6  其他
          
       熊果酸的含量测定除以上几种方法外，文献报道的还有β-环糊精增敏荧光法［17］、近红外光谱法［18］和毛细管胶束电动色谱法［19］等，但这些方法往往因为条件限制或准确度不够高等原因而使用率较低。
       【参考文献】
         　［1］Subbaramaish k．Ursolic acid ingibits cyclooxygenase-2 transcroption in human mammary epithelial cells［J］．Cancer Res，2000，60（9）：2399.
       
       ［2］王鹏，张忠义，吴忠．熊果酸在药用植物中的分布及药理作用［J］．中药材，2000，23（11）：717.
       
       ［3］Liu Jie．Pharmacology of oleanolic and ursolic acid［J］．Journal of Ethnophannacology，1995，49：57.
       
       ［4］肖坤福，郑云法，刘成左，等．熊果酸的研究进展［J］．时珍国医国药，2005，16（12）：1298.
       
       ［5］李国章，于华忠，卜晓英，等．分光光度法测定湘产苦丁茶中熊果酸含量［J］．光谱实验室，2006，23（2）：401.
       
       ［6］罗启剑，祝德秋，崔岚．分光光度法测定车钱草中熊果酸含量［J］．药学服务与研究，2003，3（4）：268.
       
       ［7］白洁，陈翔飞，孙海峰．双波长薄层扫描法测定夏枯草中熊果酸的含量［J］．时珍国医国药，2007，18（5）：1150.
       
       ［8］张军，刘志辉．陈晓斌．薄层扫描法测定狼疮静颗粒中熊果酸的含量［J］．时珍国医国药，2002，13（1）：16.
       
       ［9］戚志华，王四旺．HPLC法测定陕西女贞子中齐墩果酸与熊果酸的含量［J］．中国中医药信息杂志，2007，14（5）：40.
       
       ［10］梁洁，甄汉深，李生茂，等．高效液相色谱法测定广西产美味猕猴桃根中熊果酸的含量［J］．时珍国医国药，2009，20（5）：1025.
       
       ［11］赵永席，马国营，梁恒．RP-HPLC-ELSD测定山茱萸中齐墩果酸与熊果酸的含量［J］．中成药，2005，27（11）：1314.
       
       ［12］赵宇新，李曼玲．高效液相色谱-蒸发光散射检测法测定中药及制剂中齐墩果酸和熊果酸的含量［J］．药物分析杂志，2004，24（2）：167.
       
       ［13］杨宜华，陈玉祥．液质联用法测定白花蛇舌草齐墩果酸与熊果酸含量［J］．医药导报，2008，27（5）：589.
       
       ［14］黄建林，张展霞．GC-MS同时测定番石榴叶中的齐墩果酸和熊果酸［J］．分析测试技术与仪器，2005，11（3）：178.
       
       ［15］迟道兵，陈红红，李助乐，等．高效毛细管电泳测定山茱萸中熊果酸含量的方法探讨［J］．食品科技，2008，33（5）：222.
       
       ［16］张锋，朱培仪，宋粉云．毛细管电泳高频电导法测定夏枯草中齐墩果酸和熊果酸的含量［J］．广东药学院学报，2008，24（2）：108.
       
       ［17］赵二劳，李满秀，刘芳．β-环糊精增敏荧光法测定山楂中熊果酸的研究［J］．分析科学学报，2008，24（3）：350.
       
       ［18］宋丽丽，范丙义，徐晓杰，等．近红外光谱法用于六味地黄丸模拟样品中熊果酸的含量测定［J］．中国中药杂志，2006，31（19）：1590.
       
       ［19］刘海兴，杨更亮．毛细管胶束电动色谱法测定夏枯草中两种有效成分［J］．分析化学，2000，28（10）：1275.