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       【摘要】 
       目的控制工艺条件制备了有效成分含量不同的复方丹参片，观察其对麻醉犬冠脉结扎所致心肌缺血的影响。方法结扎麻醉犬冠脉复制心肌缺血模型。观察给药后ST段偏移总和（Σ-ST）、ST段抬高≥2mV以上的个数（N-ST）和乳酸脱氢酶（LDH）、磷酸肌酸激酶(CK)的变化。通过TTC染色，观察心脏梗塞范围。结果工艺A、B、C组均可显著减少冠脉结扎所致的Σ-ST抬高和N-ST增加，工艺A组和工艺B组可减少血清中LDH和CK的释放，缩小心肌梗塞范围。结论 复方丹参片能明显减轻心肌缺血程度。工艺参数的调整影响复方丹参片有效成分的含量，有效成分含量越高持续作用时间越长。
       【关键词】  复方丹参片； 麻醉犬； 心肌缺血
       复方丹参方是《中国药典》方, 主要由丹参、三七、冰片3味药组成。其中丹参为君,三七为臣,冰片为佐使药,具有活血化瘀、理气止痛的功能,用于气滞血瘀所致的胸痹，症见胸闷、心前区刺痛；冠心病心绞痛见上述证候者。本文采用麻醉犬冠脉结扎所致心肌缺血的动物模型，研究工艺相同，调整工艺参数进行制备的复方丹参片（有效成分含量有差异）抗心肌缺血的作用效果。
       1  材料与仪器
       1.1  药物与试剂工艺A：浅褐色粉末，实验时用蒸馏水配制成所需浓度。工艺B：棕褐色粉末，实验时用蒸馏水配制成所需浓度。工艺C：浅褐色粉末，实验时用蒸馏水配制成所需浓度。工艺A组复方丹参片：80～90℃下提取、浓缩、干燥，加热时间总计65 h（72 h以内），含丹参酮ⅡA 1.08 mg/g，丹酚酸B 21.25 mg/g；工艺B组复方丹参片：70～80℃下提取、浓缩、干燥，加热时间总计30 h（36 h以内），含丹参酮ⅡA 1.76 mg/g，丹酚酸B 34.83 mg/g；工艺C组复方丹参片：80～90℃下提取、浓缩、干燥，加热时间总计80 h，含丹参酮ⅡA 0.84 mg/g，丹酚酸B 13.34 mg/g。所有供试品药粉，每克相当于丹参原生药0.95 g，三七生药0.3 g。为实验统一给药剂量，稀释为人用量4.25 g/d，相当于原生药5.32 g/d，由广州白云山和记黄埔中药有限公司提供，丹参批号0601002、三七粉批号C6C001、冰片批号0604007。
       1.2   动物杂种犬，体质量7～10 kg，雌雄兼用，均由南京中医药大学动物中心收购自市郊的杂种犬，试验前在该中心驯养，经检疫及驱虫后，用于该项实验。
       1.3   仪器RM-6000八道生理记录仪及其附件，日本NIHON KOHDEN公司产品；DH140人工呼吸器，浙江医科大学医学仪器实验厂产品；BT01-100型恒流泵，保定兰格恒流泵有限公司产品；日立7020全自动生化分析仪，苏州日立电器有限公司产品。
       2  方法［1］
       2.1  实验分组与剂量取杂种犬25只，随机分为5组，每组5只动物, 雌雄兼用。分别为：假手术组（给予等容积蒸馏水）；蒸馏水组（给予等容积蒸馏水）；工艺A组（0.12 g生药/kg）；工艺B组（0.12 g生药/kg）；工艺C组（0.12 g生药/kg）。将各组动物所用药物溶于蒸馏水中，给药容积为1 ml/ kg。采用组间t检验法与蒸馏水组进行统计学比较。
       2.2  实验过程试验犬由前肢小隐静脉用3％戊巴比妥钠(30 mg/kg)麻醉后，背位固定于手术台上。将针状电极插入犬四肢皮下，记录心电图(ECG)。分离气管并插入气管插管。分离左侧股静脉插入静脉插管，缓慢恒速输入蒸馏水(约1 ml/min)；于左侧第四、五肋间开胸，暴露心脏，并接人工呼吸机。打开心包膜，缝于胸壁，做成荷包摇篮。用0号丝线结扎左冠状动脉前降支中下1/3处，假手术组只穿线不结扎。于梗塞区附近12个标测点缝置心外膜电图电极，并在远离梗塞区选1对照点，手持绝缘金属点状电极按标测点顺序进行标测，经传感器（JB-642G）、放大器（AB-621G），用八道生理记录仪记录心外膜电图（EECG）（定标：1 mm=1 mV）。结扎15 min后经十二指肠给药，记录结扎前、结扎后15 min和给药后30，45，60，90，120，150，180 min的EECG。统计各标测点EECG的ST段偏移Σ-ST，以及ST段抬高≥2mV以上的个数N-ST。各组分别于结扎前，结扎15 min，给药60 min后股静脉取血，用试剂盒测定血清CK、LDH值。实验结束后，立即取出心脏，用蒸馏水洗去血液后，称取全心重和心室重量，并把心室横切成5片，置于37℃ 1％TTC溶液中染色15 min，剪去各心肌片被染色的非梗塞区，把未染色的梗塞区心肌称重，除以全心重或心室重分别得到梗塞范围占全心重或占心室重的百分率。
       2.3  统计学处理数据以±s表示。所有数据采用student-t检验。
       3  结果
       3.1  对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞Σ-ST的影响复方丹参片工艺A、工艺B、工艺C组可降低冠脉结扎所致心肌梗塞麻醉犬Σ-ST，部分时间点与蒸馏水组比较差异显著(P<0.05或P<0.01)，其中工艺B组能持续至给药后120 min。结果见表1。表1  复方丹参片对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞Σ-ST的影响（略）
       3.2  对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞N-ST的影响复方丹参片工艺A、工艺B、工艺C组可降低冠脉结扎所致心肌梗塞麻醉犬N-ST，部分时间点与蒸馏水组比较差异显著(P<0.05或P<0.01)。结果见表2。表2  复方丹参片对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞N-ST的影响（略）
       3.3  对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞的血清CK、LDH的影响复方丹参片工艺A、工艺B组可减少麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞后血清中CK,LDH的释放，与蒸馏水组比较差异显著(P<0.05或P<0.01)。结果见表3。表3  复方丹参片对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞血清CK、LDH的影响（略）
       3.4  对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞范围的影响复方丹参片工艺A、工艺B组可减少麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞范围，与蒸馏水组比较差异显著（P<0.05或P<0.01）。结果见表4。表4  复方丹参片对麻醉犬冠脉结扎所致心肌梗塞范围的影响（略）
       4  讨论
          
       复方丹参片的有效成分主要分为水溶性和脂溶性两部分，分别以丹酚酸B、丹参酮ⅡA为代表，均为对热敏感的化合物。工艺A、B、C组所用复方丹参片为不同工艺参数下制备，主要是控制提取、浓缩、干燥等加热步骤的时间。加热时间短、温度低，所得丹参酮ⅡA、丹酚酸B为代表的有效成分含量较高。其中工艺A组复方丹参片含丹参酮ⅡA 1.08 mg/g；丹酚酸B 21.25 mg/g，工艺B组含丹参酮ⅡA 1.76 mg/g、丹酚酸B 34.83 mg/g；工艺C组含丹参酮ⅡA 0.84 mg/g、丹酚酸B 13.34 mg/g。
       
       心外膜电图ST段电压变化幅度的改变（Σ-ST和N-ST）是反映心肌缺血损伤程度的可靠指标，缩小心电图心肌缺血程度和范围是评价抗心肌缺血药物的主要治疗指标。较多临床及基础研究发现，LDH、CK既是评价心肌缺血损害程度较客观的指标，也是判断细胞从可逆到不可逆的损伤的一个重要标志。在定量组织学方法测定心肌梗塞范围的研究中，多采用梗塞区占心室或全心百分比来反映梗塞范围的大小。TTC染色法能较明显地区分心肌梗塞区域［2］。复方丹参片对EECG(Σ-ST、 N-ST)、LDH、CK、心肌梗塞范围等指标的改善作用表明其对麻醉犬冠状动脉左前降支结扎所致急性心肌缺血具有保护作用，且有效成分含量越高持续作用时间越长。
       
       对比3种工艺的复方丹参片，均有较好的抗心肌缺血作用，其效应与剂量有关，即复方丹参片水溶性和脂溶性有效成分含量越高，抗心肌缺血的作用越好。经测定考察，市售各厂家的复方丹参片有效成分含量波动较大，对药效作用必然存在影响。大部分市售复方丹参片，其丹酚酸B、丹参酮ⅡA为代表的水溶性成分和脂溶性成分含量接近工艺C，少数接近工艺A，更少数接近工艺B。因此，在处方固定的情况下，有必要通过优化工艺，细化参数，提高有效成分的转移率和终产品的有效成分含量，制造优质药品，保证临床疗效。
       【参考文献】
         　　［1］徐叔云，卞如濂，陈 修.药理试验方法学，第2版［M］.北京：人民卫生出版社，1991：854.
       
       ［2］张 松，沈祥春，徐 立，等. 注射用灯盏花素对麻醉犬急性心肌缺血的影响［J］.中药药理与临床，2004，20（2）：13.