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       【摘要】 
       目的采用超声波法研究清热达郁颗粒中挥发油的β-环糊精包合物制备工艺。方法用正交设计实验考察最佳包合工艺。结果最佳包合工艺为β-环糊精与混合挥发油比例为9∶1，包合温度20℃，包合时间20 min，超声波频率为30kHz。结论此包合工艺合理，可行。
       【关键词】  β－环糊精； 挥发油； 包合物； 清热达郁颗粒
       清热达郁颗粒由清热达郁汤改制而成。清热达郁汤收载于《现代名中医内科绝技》(修订版)［1］，由生地，知母、丁香、桂枝等10味药材组成，具有平调阴阳、清热达郁之功效，用于治疗各种血液病、肝硬化、腹水、水肿、水毒证、妇女月经不调、不孕等症。方中丁香和桂枝所含挥发油，易挥发，对光和热不稳定，用量不易控制。为此，本实验研究β－CD包合工艺。
       1  仪器与材料
          
       AS3120A超声波清洗器（天津奥特赛恩斯仪器有限公司），挥发油提取器（上海玻璃仪器厂），丁香、桂枝购至吉林省延吉市成大药材公司（经鉴定为樟科植物桂枝和桃金娘科植物丁香），β－CD（国药集团化学试剂有限公司），其它试剂均为分析纯。
       2  方法与结果
       2.1  清热达郁颗粒挥发油溶液的制备按处方称取丁香和桂枝药材适量，加8倍量水，安装挥发油装置，提取6 h，收集挥发油，配制成挥发油无水乙醇(1∶1)的溶液备用。
       2.2  挥发油包合工艺的研究
       2.2.1  包合物制备称取干燥后的β-CD适量置具塞三角瓶中，加适量蒸馏水，加热溶解，自然放置至规定温度。精密量取“2.1”项的备用液适量，充分振摇后，超声处理，冷藏（4℃）24 h以上，抽滤，滤饼用少量水和石油醚清洗，40℃恒温干燥4 h，得白色粉末状β－CD包合物。
       2.2.2  包合物中挥发油量的测定将所得包合物按2005年版《中国药典》［2］附录“挥发油测定法”项下甲法进行提取，至油量不再增加时停止加热，放置1 h后读取挥发油量。
       2.2.3  挥发油空白回收率的测定精密量取2 ml挥发油置圆底烧瓶中，加水250 ml，连接挥发油提取器，加热，至油量不再增加时停止加热，放置1 h后读取所收集挥发油毫升数，按下式计算，得空白回收率为90％（n=3）。
       
       空白回收率（%）=收集挥发油的量加入挥发油的量×100%
       2.2.4  包合物工艺因素及水平的选择根据预试验选择β-CD与油比例（A）、包合时间（B）、包合温度（C）、频率（D）为考察因素，每个因素设3个水平，以挥发油的包合率、包合物收率为评价指标［3，4］（权重系数分别为0.7，0.3），进行L9（34）正交实验。其包合率、收率、综合评分计算方法如下，各因素水平见表1。表1  L9（34）正交实验因素水平（略）
       
       包合物收率（%）=挥发油包合物重量β-环糊精重量+挥发油重量×100%
       
       挥发油包封率（%）=包合物中挥发油回收量加入挥发油量×空白回收率×100%
       
       综合评分=0.7×(包合率/包合率max)+0.3×(包合物收率/包合物收率max)
       2.2.5  正交实验结果与方差分析结果见表2～3。由表2、3直观分析和方差分析可知，影响挥发油包合率的各因素作用主次为A＞D＞B＞C；A因素具有显著影响（P＜0.05），B、C、D因素无显著影响﹙P＞0.05）；最佳包合工艺为A3B1C1D2，即β－CD∶挥发油的比例为9∶1，包合温度20℃，包合时间20 min，频率为30 kHz。表2  正交实验及结果，表3  方差分析表（略）。
       2.2.6  验证试验精密吸取挥发油，按最佳包合工艺制备包合物，得包合率和收率分别为95.15％，76.67％（n=3）。
       2.3  包合物鉴别
       2.3.1  薄层色谱法分别取丁香、桂枝药材适量，提取挥发油，加醋酸乙酯1.0 ml，混匀，作为丁香、桂枝对照药材溶液；取混合挥发油β－CD包合物约1 g，加醋酸乙酯1.0 ml，浸渍30 min，取上清液作为包合物溶液；取混合挥发油β－CD包合物，按前述挥发油提取方法提取挥发油，取回收的挥发油0.01 ml，加醋酸乙酯1.0 ml，混匀，作为回收挥发油溶液； 取未包合的混合挥发油0.01 ml，加醋酸乙酯1.0 ml，混匀，作为混合挥发油溶液；照薄层色谱法［2］试验，分别吸取上述5种溶液点于同一硅胶G板上，以石油醚（60～90℃）－醋酸乙酯（9∶1）展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸溶液，105℃加热至斑点清晰。见图1。结果表明，混合挥发油、回收挥发油薄层色谱在与丁香、桂枝药材薄层色谱相应位置处均显相同颜色斑点，而包合物无此斑点，说明已形成一种新的物相，外部基本无游离挥发油。
       2.3.2   显微成像法取含挥发油的包合物，及按最佳工艺制备的不含挥发油的空白包合物各少许，用水装片，置显微镜下观察。见图2。结果表明空白包合物为结晶性粉末，规则的半透明板状结晶。含油的包合物为无定型的粉末或含有黑色物质的不透明的块状物。说明挥发油已包裹在β-CD的分子空穴中形成了新的物相。
       3  讨论
          
       本实验中曾采用单因素实验法考察挥发油提取工艺中的药材粉碎度（饮片与＜10目筛）、加水量（8倍，10倍）、浸泡时间（0，4，12 h）、提取时间对挥发油提取率的影响，结果显示只有提取时间对挥发油量有影响，且提取6 h后挥发油量不再增加，因此确定挥发油提取工艺为加水8倍量，提取6 h。
       
       本实验采用超声波法制备的清热达郁颗粒中挥发油的β-CD包合物，具有包封率高、包合时间短、操作方便等优点。用包合技术将挥发油包合于β-CD内，使挥发油由液态变为固体粉末，便于进一步制剂；避免了挥发油与外界分子接触、发生分解或氧化等反应，减少了挥发油在制剂存储过程中的耗散，提高了挥发油的稳定性、溶解性，有效地保证了制剂的质量和疗效。
       TLC结果显示，挥发油包合前后斑点的位置和颜色基本相同，说明包合前后挥发油的主要成分基本一致，说明挥发油经β－CD包合后，液体变成了固体，保持了原挥发油的质量，从而保持了疗效。
       【参考文献】
         　　［1］吴大真，刘学春，王光涛，等.现代名中医内科绝技，修订版［M］.北京：科学技术文献出版社，2004：308.
       
       ［2］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：附录57，附录VIB.
       
       ［3］兰燕宇，何 迅，王永林，等.一枝黄花抗感颗粒中挥发油β-环糊精包合物制备工艺研究［J］．中国中药杂志，2004，29（5）：469.
       
       ［4］曹庆忱，李功妍. 正交设计优选多囊灵胶囊挥发油β-环糊精的包合工艺［J］. 辽宁中医学院学报，2006，8（3）：115.