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       【关键词】  中草药
       摘要：从体外实验、动物实验、临床研究等诸方面对中草药活性成分如枇杷提取物、银杏叶提取物、丹参提取物、槲皮素、苦杏仁苷、汉防己碱、川芎嗪、葫芦素Ｂ、姜黄素在治疗肝纤维化方面的国内外研究与应用新进展作了分析总结与展望。
       关键词：中草药；活性成分；肝纤维化
       肝纤维化是大多数慢性肝病所共有的病理特征，是慢性肝病发展到肝硬化的必经阶段。肝纤维化在进入肝硬变之前尚有逆转的可能,而中药治疗肝纤维化有着悠久的历史,积累了丰富的经验，逐步成为了国内外研究的热点。近年来,有关学者运用中药有效成分进行抗肝纤维化研究,效果较为满意,为探索临床抗肝纤维化药物提供了新的途径。本文就此方面研究进展作一综述。
       　1 中草药活性提取物
       1.1 枇杷提取物枇杷提取物富含亚麻酸、亚油酸及α-谷甾醇等不饱和脂肪酸，具有显著的肝细胞保护作用。动物实验发现枇杷提取物可使二甲基亚硝胺(DMN)大鼠肝纤维模型中血清转氨酶水平明显下降，肝组织内转化生长因子β1(TGFβ1)水平下降、羟脯氨酸、胶原纤维含量显著减少，肝内类维甲酸大幅度升高［1］,提示其可明显抑制肝脏炎症及纤维化的发展。
       1.2 银杏叶提取物(Egb)银杏叶提取物主要成分为黄酮苷和银杏内酯，具有清除氧自由基、抑制脂质过氧化、改善肝脏微循环等作用。近年用于实验性肝纤维化动物显示其有良好的保肝和抗纤维化效果。Egb能有效防止实验性大鼠肝纤维化的发生及发展,作用机制可能是通过减轻氧自由基和脂质过氧化作用对肝细胞的损伤,抑制肝星形细胞(HSC)的增殖,降低Ⅰ型胶原及TGFβ1的表达,最终抑制肝纤维化的发生［2］。刘诗权等［3］研究了银杏叶萃取物对大鼠纤维化肝脏核转录因子(NF-ΚB)的影响后发现EGb治疗组能明显提高肝组织超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧物酶(GSH-px)活性,而丙二醛(MDA)、羟脯氨酸(Hyp)含量显著低于模型组,显示出明显的抗氧化作用,并随着SOD和GSH-px活性的升高, EGb治疗组NF-ΚB P65的表达显著降低,表明Egb抗肝纤维化机理是通过抑制氧化应激对NF-ΚB诱导的结果。
       　2中草药活性单体
       2.1 槲皮素槲皮素(quercetin)是植物界分布广泛,具有多种生物活性的黄酮类化合物。体外研究发现槲皮素呈浓度依赖性地抑制血小板衍生生长因子(PDGF)促HSC T6细胞的增殖和TGFβ1刺激的胶原合成及Ｉ型原胶原ｍRNA的表达［4］。近来动物实验表明，槲皮素能降低鼠CCl4肝纤维化模型中肝组织胶原的含量，降低诱生型一氧化氮合酶(i NOS)的表达，抑制脂质过氧化［5］。Lee ES等［6］予DMN致肝纤维化的大鼠连续4周口服槲皮素(10mg・kg-1・d-1), 发现其能明显降低ALT、AST、胆红素水平，升高白蛋白水平，增加肝组织中谷胱甘肽的含量，减少MDA、羟脯氨酸含量以及降低TGFβ1、抑制肝脏HSC活化，减少I型胶原mRNA的表达。
       2.2丹参提取物
       2.2.1 丹酚酸Ａ丹酚酸Ａ(SA-A)是丹参的水溶性成分,具有良好的抗氧化作用。体外研究发现SA-A可通过抗肝细胞脂质过氧化损伤,减轻损伤肝细胞旁分泌对HSC的活化。胡义扬等［7］以不同浓度的SA-A分别作用于CCl4处理过的体外肝细胞，结果发现相对于模型组(不加SA-A)，SA-A组则呈浓度依赖性地明显抑制培养上清液中ALT，AST活性和过氧化产物－MDA含量的升高。将上述各组的培养上清液(各组过氧化产物含量不同)作用于HSC48 h后,模型组(MDA含量高)对HSC增殖有明显的促进作用, 同时HSC的Ⅰ型胶原合成和mRNA表达增强,而SA-A组对HSC的活化作用明显减弱。不仅如此，SA-A还能直接影响成纤维细胞增殖及胶原合成。王晓玲等［8］研究发现10-6 mol・L-1的SA-A能显著抑制成纤维细胞增殖,且能抑制细胞内胶原合成率,但对细胞外胶原的分泌均无明显影响。因此, SA-A能抑制成纤维细胞增殖及细胞内胶原合成。
       2.2.2 丹酚酸Ｂ盐丹参中的另一主要水溶性成分丹酚酸Ｂ盐(SA-B)已被证实有显著的抗肝纤维化作用。刘成海等［9］观察到丹酚酸Ｂ盐(SA-B)可明显抑制HSC增殖,抑制TGFβ1刺激的HSC活化与细胞外基质蛋白表达,以及TGFβ1刺激的HSC胞内的Smad2/3蛋白表达、磷酸化与核转位, 提示对TGFβ1的HSC内信号转导与促细胞活化作用的干预是SA-B抗肝纤维化的作用机理之一。新近的研究表明，SA-B体外可抑制活化的及经丙二醛(MDA)刺激后的HSC的增殖细胞核抗原的表达量,从而降低细胞内氧化程度,发挥其抗氧化和抗增殖的作用［10］。动物实验发现SA-B能有效保护CCl4与DMN等化学性中毒大鼠的肝损伤,预防与逆转肝纤维化的形成。临床对SA-B治疗慢性乙型肝炎患者肝纤维化的作用进行观察, SA-B治疗组肝纤维化逆转率达36.67%,患者血清透明质酸(HA)、层粘连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原肽(PⅢP)、Ⅳ胶原(C-Ⅳ)均全面下降,且无明显副作用［11］,显示了良好的应用前景。
       2.2.3丹参素丹参素也是丹参的水溶性有效成分之一。郑元义等［12］动物实验发现丹参素具有显著抑制HSC增殖并促进其凋亡的作用，其作用与其浓度呈正相关性。
       2.4苦杏仁苷桃仁提取物苦杏仁苷(amygdalin), 又称扁桃苷, 具有预防肝纤维化和促进肝纤维化逆转的作用。体外实验发现，苦杏仁苷可抑制活化的HSC 增殖、减少其合成和分泌胶原［13］。近年来的研究表明,苦杏仁苷可通过提高肝组织胶原酶活性,有效抑制胶原等基质成分的合成代谢,修复肝窦内皮细胞同肝细胞之间的功能性基底膜,表明其能增加肝血流量,提高胶原酶活性,促进胶原分解［14］。张晓平等［15］ 发现苦杏仁苷能有效地阻止肝纤维化小鼠血清中Ⅰ型前胶原(PC-Ⅰ)、Ⅲ 型前胶原(PC-Ⅲ)水平升高,从而预防肝纤维化的形成。临床应用苦杏仁苷静脉输注治疗40例血吸虫性肝纤维化患者,结果与对照组比较,治疗组肝脾明显缩小,尿羟脯氨酸排出显著增加［16］。
       2.5 汉防己碱汉防己碱（Tetrandrine,Tet）为中药防己的活性成分之一，属双节基异喹啉化合物的生物碱, 具有钙通道拮抗剂作用。临床和实验研究均表明Tet对防治肝纤维化有良好的疗效。细胞学研究表明, Tet能显著抑制T6成纤维细胞的胶原合成,明显抑制肝贮脂细胞（Ito细胞）的增殖及转化,有阻断PDGF促Ito细胞增殖及胶原合成的作用。分子生物学研究表明, Tet对Ｉ、Ⅲ、Ⅳ型胶原基因的表达具有抑制作用,即在转录水平上抑制了胶原的合成。实验研究发现该药能抑制CCl4所诱导的大鼠肝纤维化, 显著减少肝脏总胶原、Ⅰ型胶原、Ⅲ型胶原的含量。将其和HSC共同培养,可减少细胞内DNA含量,但不影响细胞生存,使活性HSC的标志α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达下降［17］。进一步研究发现Tet能显著抑制CCl4诱导肝纤维化大鼠肝组织c-fos和c-jun mRNA表达,并能在转录水平抑制肝纤维化的发生、发展［18］。提示Tet可通过调节核转录因子c-fos和c-jun mRNA的表达及AP-1DNA结合活性而产生抗肝纤维化作用。此外，Tet还可抑制肝纤维化大鼠组织金属蛋白酶抑制因子1(TIMP1) mRNA的表达,从而促进细胞外基质(ECM)的降解［19］。临床观察研究115例慢性肝病患者口服Tet 6个月后,血清HA、PCⅢ含量显著降低(Ｐ＜0.01),其中14例肝纤维化消失,54例胶原纤维沉积明显减轻,19例胶原纤维轻度减轻,炎细胞浸润明显减轻或消失, Ito细胞数量减少,与肝泰乐对照有显著性差异(Ｐ＜0.01)［20］。
       2.6川芎嗪川芎嗪(chuanxiongzine)是川芎的根茎中分离提纯的一种生物碱。王红等［21］的研究表明CCl4诱导大鼠肝纤维化后,给予川芎嗪后可降低肝纤维化大鼠血清MDA、PCⅢ、HA及肝组织中的MDA、HA含量,说明其抗肝纤维化作用可能部分与其抗脂质过氧化作用有关。姬成伟等［22］进一步发现川芎嗪能明显抑制肝星形细胞的增殖与活化，由此推测川芎嗪有可能通过抗脂质过氧化而抑制肝星形细胞增殖、活化。临床上运用川芎嗪治疗慢性乙肝肝纤维化82例时发现经川芎嗪治疗后患者肝功能及肝纤维化指标(HA、PC-Ⅲ、LN、C-Ⅳ)较治疗前明显好转［23］,表明其有较强的抗肝纤维化作用。
       2.7 葫芦素Ｂ( cucurbitacin B)葫芦素Ｂ源于甜瓜蒂及丝瓜等植物种子中,为苦味苷元成分。徐天雄等［24］应用九芝堂肝立克片(每片含葫芦素Ｂ 0.08 mg)对46例中度慢性乙型肝炎进行治疗,结果表明在一般护肝降酶退黄的基础上加用葫芦素Ｂ可增强PC-Ⅲ、C-Ⅳ的转化及降低HA的水平,抑制胶原和基质合成,促进其降解和吸收,从而达到抑制肝内纤维化的作用。
       2.8 姜黄素姜黄素（curcumin）是一种从姜黄中提取的酸性酚类物质，主链为不饱和脂族及芳香族基团。在体外，姜黄素可减少肝星形细胞 DNA 的合成，下调Ⅰ型胶原蛋白及其α1 链mRNA 的表达［25］。 杨伟峰等［26］发现姜黄素可显著抑制HSC增殖,使细胞周期停滞于G2/M期,并诱导其凋亡,其作用具有时间和剂量依赖性。进一步研究发现姜黄素对HSC并无细胞毒性作用,却剂量依赖地抑制HSC增殖,不同程度抑制Ⅰ型胶原、透明质酸和层粘连蛋白分泌［27］。姜黄素也具有显著的抗氧化作用。刘永刚等［28］发现姜黄素能显著抑制CCl4损伤原代培养大鼠肝细胞所引起的ALT、乳酸脱氢酶(LDH)活性的升高,同时抑制MDA、NO的产生及提高SOD活性, 明显改善肝细胞存活率，表明姜黄素能有效抑制CCl4造成的原代培养大鼠肝细胞损伤，降低氧化应激水平。动物实验中发现对于肝纤维化大鼠，连续30 d给予姜黄素300 mg・(kg・d)-1口服，可减少肝脏胶原沉积和Ⅰ型胶原 mRNA 的表达［25］。以上研究表明姜黄素作为一种抗氧化剂可保护肝细胞，抑制HSC增殖，减轻肝纤维化程度。
       　　3 近况与展望
       经过多年的研究,中药提取物治疗肝纤维化取得了较大成绩,发现了许多新的有效成分并作了较深入的研究,一些单体如甘草甜素、苦参碱、川芎嗪等已试用于临床,效果较为满意。虽然近几年中药抗肝纤维化的实验研究已从整体水平到达细胞分子水平,不少已深入到基因表达调控水平；但中药抗肝纤维化活性成分的分离纯化、疗效评定、作用机理方面研究仍较薄弱。再则肝纤维化病因复杂，其中病毒性肝炎致肝纤维化占大多数，而目前兼有抗病毒、保肝、抗肝纤维化的有效成分为数不多，作用有限。在今后的研究工作中,一方面要寻找新的有效成分,另一方面需开展已有的几种有效成分之间的作用比较,进一步阐明不同成分的主要作用机理,以寻找疗效更佳的药物。
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       作者简介：徐标(1979)，男(汉族)，湖北武汉人，现任华中科技大学同济医学院附属协和医院肝病科医师，硕士学位，主要从事肝纤维化防治工作.
       (华中科技大学同济医学院附属协和医院，湖北 武汉430022)
       收稿日期：20050311；