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       【关键词】  高效液相色谱法
          摘要：目的：建立高效液相色谱(HPLC)法测定健脑安神片中淫羊藿苷含量的方法。方法：Alltima C18色谱柱（5 μm，150    mm×4.6 mm ），乙腈水（30∶70）为流动相，检测波长270 nm。结果：淫羊藿苷在0.020～0.50 μg范围内线性关系良好（r=0.999），平均回收率为98.84%，RSD=1.06%。结论：该方法简便，快捷，灵敏，准确，重现性好，可作为健脑安神片的质量控制标准。
        关键词：健脑安神片；高效液相色谱法；淫羊藿苷
        Determination of Icariin in Jiannao Anshen Tablet by HPLC
        KANG DongZhou1， JIANG Yanling1， ZHANG  Shanyu1, CUI Sheng2
        (1.College  of Pharmacy，Yanbian University，Yanji 133000, China; 2.Jilin Tianhe Pharmaceutical Co.Ltd.133000, China)
        Abstract:Objective:To establish a method for determination of icariin in Jiannao Anshen Tablet by HPLC.Methods:HPLC analysis was carried out on Alltima C18 column(5 μm，150 mm×4.6 mm)with Acetonitrilewater(30∶70) as mobile phase and UV detection at 270 nm.Results:The calibration curve was in good linearity of icariin over the range of 0.020～0.50 μg(r=0.999 9).The average recovery was 98.84％with RSD was 1.06%.Conclusion:The method appeared to be simple, quick, sensitive, accurate, reproducible and can be used to control the quality of Jiannao Anshen Tablet.
        Key words:Jiannao Anshen tablet；HPLC；Ｉcariin
        健脑安神片是由黄精、 淫羊藿、枸杞子等16味中药材经提取制成，具有滋补强壮，镇静安神等功效，适用于神经衰弱，头痛、头晕，健忘失眠，耳鸣等患者。淫羊藿为方中主药之一，淫羊藿苷为其中的主要有效成分，故本实验参照《中国药典》和文献［1～4］方法，采用高效液相色谱法测定了淫羊藿苷含量。
           1仪器与试药
        HITACHI高效液相色谱仪(包括HITACHI Integrator D75，HITACHI PumpL7150，HITACHI DetectorL7420 UVVIS)：UV2201紫外分光光度仪；AS系列超声波清洗器(天津奥特恩斯仪器有限公司；AL01溶剂过滤器(天津市金州科学仪器有限公司)；健脑安神片(按《中华人民共和国卫生部药品标准・中成药剂》中收载的制法制备，批号：040423040428)；淫羊藿苷对照品(供含量测定用，批号：110737200312，中国药品生物制品检定所)。乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其它试剂均为分析纯。
           2方法与结果
        2.1淫羊藿苷检测波长的确定取淫羊藿苷对照品溶液(A：0.010 mg/ml)，照紫外分光光度法，在200～350 nm波长范围内测定吸光度，绘制曲线，对照品溶液在270 nm波长处有最大吸收，故选用270 nm为其检测波长。
        2.2色谱条件色谱柱：Alltima，C18(5 μm，150 mm×4.6 mm)，柱温：30℃，流动相为乙腈水(30∶70)，流速：1.0 ml／min，检测波长：270 nm。在此色谱条件下，供试品色谱中，在与对照品色谱相同的保留时间处有色谱峰，与其它组分能基本达到基线分离，R＞1.5，理论塔板数按淫羊藿苷峰计算＞3 000。
        2.3供试品溶液的制备取健脑安神片研细，精密称定0.5 g，置25 ml量瓶中  ，加入70％甲醇20 ml，超声处理30 min，放至室温，定容，摇匀，上清液用0.45 μm微孔滤膜滤过，即得。
        2.4阴性对照液的制备按处方量，取除淫羊藿外的其余药味按工艺要求制成缺淫羊藿的样品，同供试品溶液制备方法制备阴性对照液。
        2.5空白对照实验分别吸取淫羊藿苷对照品溶液、供试品溶液及阴性对照液  各10 μl，分别进样，依上述色谱条件操作，进行全程扫描，见图1。结果表示，阴性对照液液相色谱图中，在与对照品溶液色谱图相应的保留时间处无吸收，且供试品色谱中淫羊藿苷吸收峰分离效果较好。
        图1高效液相色谱图（略）
        2.6线性关系考察精密称取淫羊藿苷对照品，加甲醇制成每1 ml含0.10 mg/ml(A液)和0.010 mg/ml(B液)的溶液，精密吸取A液2，5 μl及B液2，5，10 μl进样，依上述色谱条件测定峰面积积分值，以淫羊藿苷对照品进样量为横坐标，峰面积积分值为纵坐标，绘制标准曲线。得回归方程为Y=3.870 09×106X-20 996.79，相关系数r=0.999 9。结果表明，淫羊藿苷在0.020～0.50 μg范围内，浓度与峰面积积分值呈较好的线性关系。
        2.7稳定性实验精密吸取同一供试品溶液10 μl，依上述色谱条件操作，每间隔1 h测定1次峰面积积分值，观察其稳定性，其平均值为243 498.2，RSD为1.98％。结果表明，样品峰在6 h内稳定。
        2.8精密度实验依上述色谱条件操作，精密吸取对照品A溶液5 μl，重复进样5次进行测定，结果平均值为1 934 328，RSD为1.94%，表明本实验所使用仪器的精密度良好。
        2.9重现性实验依上述供试品溶液制备方法和色谱条件操作，对同一批样品(040423)，制成5份供试品溶液，结果平均值为0.689  mg/g，RSD为2.67％，表明重现性良好，该方法准确可靠。
        2.10回收率实验分别称取同一批(040423)已知含量(0.689 mg/g)的本品约0.25 g，研细，精密称定，分别精密加入淫羊藿苷对照品0.17 mg，依2.3项下供试品溶液制备方法操作，同法制得五组供试品溶液，按上述色谱条件操作测定峰面积积分值，计算回收率，见表l。结果表明，按本实验方法回收率较好。
        表1回收率测定结果序号（略）
        2.11样品中淫羊藿苷的含量测定依上述供试品溶液制备方法及色谱条件，对6批健脑安神片样品中的淫羊藿苷含量进行测定，结果见表2。
        表2样品中淫藿苷的含量mg・g-1（略）
           3讨论
        3.1文献报道淫羊藿苷的含量测定法有柱层折一阶导数光谱法［5］、薄层扫描法［6］、液相色谱法等，其中以高效液相色谱法的应用最为广泛。经全波长扫描，确定以270 nm为检测波长，参照药典及文献报道的色谱条件，比较乙腈水冰醋酸(22∶78∶0.1)、甲醇0.4％冰醋酸溶液(55∶45)及乙腈水(30∶70)的分离效果，结果以乙腈水(30∶70)为流动相分离效果较为理想，在此条件下淫羊霍苷与其它组分能达到基线分离，阴性样品无干扰。
        3.2曾按文献报道的方法比较以70％甲醇和50％乙醇为提取溶剂对样品进行处理，结果以70％甲醇提取物杂质量少，重复性好，故选择70％甲醇为提取溶剂。另外对提取时间15，30 min及60 min进行了考察，结果超声提取30 min和60 min时的结果相似，故选择提取时间为30 min。
        3.3经过对6批样品的含量测定，结果表明，该方法具有样品处理简便，回收率好，精密度、重现性高，分析快速等优点，符合《中国药典》2000年版Ⅰ部附录HD高效液相色谱法的各项规定，可作为健脑安神片的质量控制方法。
           参考文献：
        ［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：267267.
        ［2］刘霞，杨远明.HPLC测定舒宁片中淫羊藿苷含量［J］.中成药，2003，25(11)，936937.
        ［3］屠颖，赵陆华，等.抗敏胶囊主要成分的HPLC法分析［J］.中国药科大学学报，2002，33(5)，404407.
        ［4］孙明玉，李明炬.高效液相色谱法测定骨力胶囊中淫羊藿苷含量的研究［J］.贵州医药，2004，28(6)，558559.
        ［5］朱品业.一阶导数光谱法测定抗骨增生片中淫羊藿苷的总黄酮含量［J］.中成药.199l，13(8)，1212.
        ［6］官福兰，言慧洁.薄层扫描法测定神雄精口服液中淫羊藿苷的含量［J］.广东药学，2002，12(3)，12.
        (1.延边大学药学院，吉林 延吉133000；2.吉林天河药业有限公司，吉林 延吉133000)