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       【关键词】  品质鉴定；,,金银花；,,元素含量；,,电子探针
       摘要：目的建立中药材金银花道地性和非道地性及其品质区分新方法。方法利用电子探针技术对同一生境中两种不同种质金银花单个叶肉细胞内元素进行定量分析。 结果生活在石灰土壤环境中的金银花，受环境条件影响其叶细胞中的元素含量共同表征为Ca多Mg少，并且P的含量仅次于Ca的含量；忍冬除Ca含量低于华南忍冬外，其它元素如Mg，P，Mn和Fe的含量均高于华南忍冬，表现出种质差异性。结论 由于不同种质金银花叶内元素含量在细胞水平上存在差异，因而可利用电子探针技术快速、有效地进行金银花等中药材品质鉴定。
       关键词：品质鉴定；  金银花；  元素含量；  电子探针
       Application of Electron Probe Method on Quality Identification of Flos Lonicerae
       LI Qiang， LI Linli， YU Longjiang
       (1.School of Life Science and Technology, Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430074, China; 2.Institute of Karst Geology, CAGS, Karst Dynamics Laboratory, MLR, Guilin 541004, China; 3.College of Resources and Environment Science, Southwest China Normal University, Chongqing 400715, China)
       Abstract：Objective To develope a new method for distinguishing the geo-authentic and non- authentic species of Flos Lonicerae and identification on the quality of medicinal materials. MethodsThe electron probe was used to analyze the element weight in the cells of two different species of Flos Lonicerae living in the same environment.ResultsThe content of Ca is the highest while the content of Mg is the lowest in the cell of two different species of Flos Lonicerae (r＝-0.156，P<0.05) and the content of P in the cell is inferior to Ca (r＝0.868，P<0.01), which reflects the effect of environment. Moreover, the important feature is that the elements except Ca in the cell of Lonicera japonica Thunb. are higher than those of Lonicera confusa, which affects its quality and officinal value and forms the grade of medicinal materials.ConclusionThe method of electron probe is effective in appraising and distinguishing the quality of Flos Lonicerae and other medicinal materials because it can be used to distinguish the content of elements in the cell of different Flos Lonicerae, which is controlled by genetic factor.
       Key words：Quality identification;  Flos Lonicerae;  Element content;  Electron probe
   
　　忍冬科忍冬属植物忍冬及同属多种植物的干燥花蕾，俗称“金银花”，具有疏风散热、清热解毒的功效，主要用于急性热病及各种急性感染性疾病，是临床上常用药物之一［1］。金银花全身是宝，其茎叶也因含有绿原酸和黄酮等主要药用成分而具有重要经济价值［2，3］。
       目前全世界忍冬属植物约200种，我国有98种，广布于全国各省区，并以西南部种类最多，其中可供药用的品种达47种［1~4］，但传统上以河南和山东为金银花的道地产区。药材的道地性是药材对其适生条件长期选择的结果，具有强烈的地域性，在特定的生境区质量最好、疗效最佳、产量最大，如不同种质金银花药材中的绿原酸和黄酮类成分含量差异悬殊 ［5，6］，说明种质差异对药用植物有着特殊的潜资源意义。
       本文以同一生境中的两种不同种质的金银花叶为材料，运用电子探针微区分析技术，精确分析元素在金银花单个叶肉细胞内的含量，以期获得某些元素在不同种质金银花叶细胞内的变化规律，从而为今后药材品质鉴定以及GAP基地建设提供参考。
       　　1  材料
       选取两株相邻的忍冬Lonicera japonica Thunb. 和华南忍冬Lonicera confusa作为研究对象，分别采集同一叶龄(生长期40天)的健壮叶片用于电子探针分析。其中忍冬原产山东平邑，后引种到广西弄拉。
       弄拉位于广西南宁地区马山县东南部古零镇境内典型的岩溶峰丛山区。其地理坐标为108°19′E，23°29′N。该区位于亚热带季风区，具有高温多雨、降雨集中、湿度大等气候特征。据多年气象观测资料，该区平均气温为19.84 ℃，年平均降雨量为1 700 mm［7］。该区地层岩性为泥盆系东岗岭组厚层硅泥质白云岩，因而该区土壤具有偏碱富钙的石灰土特征［8］。
       　　2  方法
       取忍冬和华南忍冬同一叶龄的新鲜叶片洗净搽干，将其剪成1 cm×1 cm左右的小块，用FAA固定24 h，并经70%，85%，95%，100%，100%的酒精系列脱水，固定在载玻片上。然后，经氩气干燥，精密刻蚀喷镀仪镀金后，在30kV高压下用FEI公司生产的Quanta 200找到单个叶肉细胞，利用EDAX9100能谱仪作为电子探针对叶肉细胞中元素含量进行分析。
       　　3  结果
       3.1  金银花叶细胞中主要元素含量特征尽管气候、土壤和人为活动等外界条件对植物的化学元素含量有着直接或间接的影响，但植物本身对元素所具有的选择性吸收能力，是决定其元素含量特征的首要因素［9］。
       通过分析发现：忍冬和华南忍冬叶细胞中的主要元素含量尽管变化较大，但在很大程度上反映了植物体的化学成分特征。通过图1~2可以看出，这两种金银花叶内元素含量在重量百分比(WT%)方面有许多相似之处，总是Ca最多Mg最少(相关系数0.156，P<0.05)，并且P在叶内的含量仅次于Ca(相关系数0.868，P<0.01)。这可能与植物在利用Ca时对Mg的吸收具有拮抗作用，而对P的吸收具有协同作用有关［10,11］。见图1~2。
       此外,从两种金银花叶细胞内元素的重量百分比来看，除华南忍冬叶细胞内钙含量是忍冬的2.35倍外，忍冬叶细胞内Mg ，P和Mn元素的含量均明显高于华南忍冬，分别是其1.4，2.5和3.5倍。此外，华南忍冬叶细胞内由于Fe含量较少没有检出，而忍冬叶细胞内Fe元素的含量为0.95%。从而说明：受遗传因素影响，金银花主要通过主动吸收来调控其细胞内的元素含量［12］。
       由于元素的原子数百分比(AT%)与该元素的存在形式和含量密切相关，并能反映该元素的含量状况，因而这两种金银花叶细胞中原子数百分比(AT%)和重量百分比(WT%)的排列顺序基本一致。见表1~2。表1  华南忍冬叶细胞内重量及原子数百分比（略）表2  忍冬叶细胞内重量及原子数百分比（略）
       3.2  金银花叶细胞中元素含量对其质量的影响药材的道地性是药材对其生境长期选择的结果，具有强烈的地域性，其药理作用的发挥在于其体内微量元素对疾病部位具有特有性亲和特征［13］。而中药材微量元素的含量与富集状况主要与其种质有关，并决定其质量高低。
       华南忍冬作为非传统道地金银花，由于对其长期生活的石灰土壤具有一定的适应特征，造成体内Ca含量较高，并通过元素间的协同作用和拮抗作用影响华南忍冬对土壤中其它元素的吸收，从而使华南忍冬叶细胞中的其它元素含量较低。而传统道地金银花-忍冬，尽管在一定程度上也受到其生境土壤地球化学的影响，但由于受遗传因素控制，对土壤中的钙元素转运能力相对较弱，从而使其叶细胞内的钙元素含量仅为(WT%)4.87%，远低于华南忍冬体内的钙元素含量，并使Mg ，P，Mn和Fe在其体内的含量也相应较高。
       通过以上分析，说明金银花药材体内元素含量高低不是由土壤因子决定，而由其遗传因素决定，因而不同种质金银花质量的差异能够通过叶内元素的差异得到反映。
       　　4  小结
       4.1  忍冬和华南忍冬叶细胞内元素含量呈现出Ca多Mg少的特征，与它们在被植物吸收过程中的拮抗作用和协同作用有关。
       4.2  忍冬叶细胞内元素含量(除Ca外)均高于华南忍冬叶内相应元素含量,表现出不同种质金银花品质的差异性以及道地金银花和非道地金银花在调控药材利用土壤元素机理上的差别。
       因而本文通过对比分析不同种质金银花叶内元素含量特征，认为药用植物有效成分的形成、积累机制主要是由其遗传因素决定，并影响其质量，从而本文的研究将能为今后金银花种质资源的评价及鉴定提供一定的理论依据。
       　　参考文献：
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       ［3］武雪芬，景小琦，李国茹.金银花叶药用成分的提取及抑菌试验［J］.天然产物研究与开发，2001，13(3):43.
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       ［11］张晓林，和丽忠，陈锦玉，等.土壤一烤烟矿质营养元素相互关系的主组分分析［J］.土壤学报，2001，38(2):193.
       ［12］张重义，李  萍，齐  辉，等.金银花道地与非道地产区地质背景及土壤理化状况分析［J］.中国中药杂志，2003，28(3):207.
       ［13］杨克敌.微量元素与健康［M］.北京：科学出版社，2003：1.
       1.华中科技大学生命科学与技术学院，湖北 武汉   430074；
       2.中国地质科学院岩溶地质研究所，国土资源部岩溶动力学重点实验室，广西 桂林  541004；
 
　　3.西南师范大学资源环境学院，重庆 北碚  400715
       基金项目：西南师范大学自然地理学重点学科开放基金资助项目（No.250-411110）
       作者简介：李  强(1978)，男(汉族)，山东曹县人，现在读华中科技大学生命科学与技术学院博士研究生，硕士学位，主要从事分子生态学研究工作.