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       【关键词】  高效液相色谱法；,,骨宝昕肾片；,,染料木素
       摘要：目的用高效液相色谱法测定骨宝昕肾片中染料木素的含量。方法采用Zoobax C18（4.6 mm×250 mm）色谱柱，乙腈水（V∶V=30∶70）为流动相，检测波长270 nm，柱温40℃，流速1.0 ml/min。结果线性范围0.001 752~0.019 272 μg，线性关系良好，回归方程为Y=4 866 020.692 X－20.276，相关系数r=0.999 9，平均回收率为98.89%，RSD为0.91%。结论该法适合测定骨宝昕肾片中染料木素的含量。
       关键词：高效液相色谱法；  骨宝昕肾片；  染料木素
       Determination of the Genistein in the Gubaoxinshen Tablets by HPLC
       ZHANG Yan，JIN Xiangqun，WANG Guangshu
       (Pharmaceutical College，Jilin University，Changchun  130021，China)
       Abstract:ObjectiveTo determine the content of the genistein in the Gubaoxinshen Tablets by HPLC.MethodsThe Zoobax C18  Column（4.6 mm×250 mm）was used,the methyl cyanide-water（V∶V=30∶70） mixture as the mobile phase,with the detection at 270 nm,the flow rate was 1.0 ml/min and column temperature was 40℃. ResultsThe linear calibration curves were obtained in the concentration ranges of 0.001 752~0.019 272 μg.The regression equation was Y=4 866 020.692 X－20.276, r=0.999 9.The average recovery was 98.89%,and RSD was 0.91%. ConclusionThis method was convenient,accurate and specified.
       Key words:HPLC;   Gubaoxinshen Tablets;   Genistein
   
　　骨宝昕肾片属于中药二类新药，经过临床证明具有很好的治疗骨质疏松作用，是由大豆、淫羊藿2味中药材经提取等工艺制成，大豆为方中主要药物之一，其主要有效成分为染料木素。鉴于质控标准中无定量指标，不能有效的控制产品内在质量，作者采用高效液相色谱法对该药中的染料木素进行了含量测定。
       　　1  材料与方法
       1.1  仪器、试剂与供试品
       1.1.1  仪器美国Waters 600 E高效液相色谱仪；Waters 2 487双波长紫外检测器；KQ250型超声波清洗器。
       1.1.2  试药染料木素对照品购于美国SIGMA公司；乙腈及甲醇为色谱纯；水为二次蒸馏水；骨宝昕肾片为本实验室制。
       1.2  对照品溶液的制备精密称取染料木素对照品0.19 g，置于5 ml量瓶中，用甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀。
       1.3  供试品溶液的制备取本品20片，除去薄膜衣，研细，取0.2 g，精密称定，置索氏提取器中，用甲醇提取4 h，提取液蒸干，用蒸馏水20 ml加热溶解后，经大孔吸附树脂（直径1 cm，长10 cm）,先用100 ml蒸馏水洗，弃去水洗液，再用95%的乙醇洗脱，收集该洗脱液100 ml，回收乙醇后蒸干，用20 ml流动相定量转移至50ml量瓶中，超声处理（功率为250 W，频率为20kHZ）使溶解，加流动相至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45μm）滤过，取续滤液，即得。
       1.4  方法学考察
       1.4.1  HPLC色谱条件乙腈水（V∶V=30∶70）为流动相，检测波长270 nm，流速1.0 ml/min。
       1.4.2  线性范围考察精密称取染料木素对照品适量，加流动相制成每1ml含1.752μg的溶液，精密吸收此溶液各1，3，5，7，9，11μl分别注入液相色谱仪，测定。
以进样量为横坐标，以峰面积值为纵坐标作图，得一条通过原点的直线，回归方程为Y=4 866 020.692 X－20.276，r=0.999 9，结果表明染料木素进样量在0.001 752~0.019 272 μg之间，进样量与峰面积积分值呈良好的线性关系。
       1.4.3  精密度考察取同一供试品溶液，重复进样5次，记录峰面积，计算RSD为1.21%。
       1.4.4  稳定性考察  
       精密吸取同一供试品溶液，按0，4，8，12，16，20，24 h时间间隔，分别测定色谱峰面积。测定结果表明，供试品溶液至少在24 h内稳定，色谱峰面积无明显变化，RSD为1.78%，供试品溶液稳定。
       1.4.5  重现性考察取同批骨宝昕肾片适量，6份，研碎后，精密称定，制备供试品溶液，在上述色谱条件下依次测定，测定结果RSD为1.19%。
       1.4.6  加样回收率实验精密称取染料木素对照品适量，加入到已知染料木素含量的骨宝昕肾片（染料木素含量为0.06%）中，测定，平均回收率为98.89%，RSD为0.91%（n=6）。结果见表1。表1  染料木素的回收率和RSD值No.（略）
       2  结果
       三批骨宝昕肾片中染料木素的含量测定结果见表2。测定结果表明，骨宝昕肾片中染料木素的含量基本稳定,限定本品染料木素的含量不得低于0.05%，即每片染料木素的含量不得低于0.26 mg。对照品色谱图见图1，样品的色谱图见图2。表2  染料木素的含量（略）
       　　3  讨论
       HPLC法检测具有准确，灵敏的特点，其准确性较高，可用于天然产物的分离研究，本文测定染料木素含量，说明该方法准确可行。
       本供试品为薄膜衣片，在含量测定中，需剥去薄膜衣，否则影响含量测定。供试品溶液的制备过程中，超声处理10~50 min，测得含量基本一致，故采用超声处理15 min，即可。
       　　参考文献：
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       ［2］李  洁,潘喜华,仲伟鉴,等.大豆异黄酮防治骨质疏松的研究进展［J］.上海预防医学杂志,2000,12(4):191.
       ［3］季  晖,刘  康,李绍平,等.淫羊藿总黄酮对维A酸诱导大鼠骨质疏松症的防治作用［J］.中国药科大学学报,2000,31(3):222.
       ［4］季晖,刘康,龚小健,等.淫羊藿总黄酮对摘除卵巢大鼠骨质疏松症的防治作用［J］.中国骨质疏松杂志,2001,7(1):4.
       ［5］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京:化学工业出版社,2005:229.
       (吉林大学药学院，吉林 长春  130021)
       作者简介：张  彦(1975)，女(汉族)，吉林长春人，现任吉林大学药学院讲师，硕士学位，主要从事生药学研究工作.