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       【关键词】  金钱草颗粒；,,槲皮素；,,山奈素；,,含量测定；,,高效液相色谱法
       摘要：目的建立用高效液相色谱(HPLC)法测定金钱草颗粒中槲皮素和山奈素含量的方法。方法采用Dalian Elite Hypersil ODS2  5 μm（200 mm×4.6 mm）柱，以甲醇0.4%磷酸溶液（45∶55）为流动相；流速：1.0 ml・min1；检测波长为360 nm。柱温：30℃。结果该法线性关系良好，槲皮素平均回收率为101.2%，RSD为1.14%；山奈素平均回收率为100.1%，RSD为1.33%。结论该方法简便、准确、重现性好，可用于该制剂的质量控制和评价。
       关键词：金钱草颗粒；  槲皮素；  山奈素；  含量测定；  高效液相色谱法
       Determination of Quercetin and Kaempferol in Herba Lysimachiae Granules by HPLC
       HE Yu, XUE Chaojin
       (Bijie District Institute for Drug Control,Bijie 551700,China)
       Abstract：ObjectiveTo establish an HPLC method for the determination of quercetin and kaempferol in Herba Lysimachiae Granules.MethodsDalian Elite Hypersil ODS2 5μm（200 mm×4.6 mm）column was used. The mobile phase was methanol-0.4% phosphoric acid solution(45∶55). The flow rate was 1.0 ml・min1；The detection wavelength was 360 nm；The column temperature was 30℃.ResultsThe linear relation was good . The average recovery of quercetin was 101.2% with RSD=1.14%；The average recovery of kaemferol was 100.1% with RSDwas1.33%.ConclusionThe method is simple,accurate and with a good reproducibility and can be used for the quality control of the granules.
       Key words： Herba Lysimachiae Granules；  Quercetin；  Kaempferol；  Determinatim；  HPLC
   
　　金钱草颗粒为单味药制剂，具有清利湿热，通淋消肿的功效。用于热淋，沙淋，尿涩作痛，黄疸尿赤，痈肿疔疮，毒蛇咬伤，肝胆结石，尿路结石等症的治疗。所含的槲皮素和山奈素为主要有效成分。本方收载于《国家中成药标准汇编》（中成药地方标准上升国家标准部分内科、肝胆分册）标准中无含量测定方法，不利于制剂的质量控制。本文参考有关文献［1,2］，采用HPLC法测定金钱草颗粒中槲皮素和山奈素的含量，分离度好，回收率高，能有效控制金钱草颗粒的含量。
       　　1  仪器与试药
       1.1  仪器 
       美国Waters1525高效液相色谱仪、2487双波长紫外检测器，Breeze色谱工作站，AY120电子天平（日本岛津公司），AB265S电子天平（日本岛津公司）。
       1.2  试药
       槲皮素对照品（购自中国药品生物制品检定所，批号100081200406，含量97.3%,120℃干燥4 h后使用）；山奈素对照品（购自中国药品生物制品检定所，批号：110861200304）,样品由重庆某药厂提供（批号：040509，040603，040401）；甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
       　　2  方法与结果
       2.1  对照品溶液的制备
       精密称取120℃干燥4 h的槲皮素对照品10.41 mg，置100 ml容量瓶中，加80%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每毫升含槲皮素101.289 3 μg）。精密称取山奈素对照品10.25 mg，置100 ml容量瓶中，加80%甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每毫升含山奈素102.5μg）。作为对照品储备液。
       2.2  样品溶液的制备 
       取本品10袋的内容物，混匀，研细，精密称取1 g，置锥形瓶中，精密加80%甲醇50 ml，称定重量，超声30 min，放冷，再称定重量，用80%甲醇补足减失的重量，滤过，精密量取续滤液25 ml，精密加入盐酸5ml，置90℃水浴中加热水解1 h，取出，迅速冷却，转移置50 ml容量瓶中，用80%甲醇稀释置刻度，摇匀，即得。
       2.3  色谱条件与系统适应性实验
       采用十八烷基硅烷键合硅胶填充色谱柱；以甲醇0.4%磷酸溶液（45∶55）为流动相；流速1.0 ml・min1；检测波长为360 nm。理论板数以槲皮素峰计算大于6 000，主峰与相邻杂质峰之间的分离度大于1.5。结果见图1。
       2.4  线性关系考察
       分别精密吸取槲皮素对照品储备液1.0 ml，分别置10，25，50，100，200 ml容量瓶中，各精密加入山奈素对照品储备液5.0 ml，加80%甲醇稀释至刻度，摇匀，制成系列混合对照品溶液。按上述色谱条件分别进样测定，以峰面积积分值A为纵坐标，以槲皮素和山奈素的浓度C（μg・ml1）为横坐标，其标准曲线回归方程和线性范围结果见表1。表1  各组分的回归方程和线性范围回归方程 （略）
       2.5  精密度实验  精密量取上述对照品溶液10 μl，重复进样5次，按上述色谱条件测定，槲皮素和山奈素峰面积积分值的RSD分别为0.50%和0.61%。
       2.6  重复性实验 分别取同一批号（批号：040509）样品各5份，照2.2样品溶液的制备和测定方法进行测定，结果槲皮素的平均含量为0.042%， RSD为1.02%，山奈素的平均含量为0.168% RSD为0.52%。
       2.7  稳定性实验取同一批号的供试品溶液（批号：040509），每隔2 h进样1次（10 μl），共进样6次，按上述色谱条件分别测定，结果槲皮素和山奈素的RSD分别为1.24%和1.55%，表明供试品溶液在12 h内稳定。
       2.8  空白实验 按处方比例及工艺，制备缺金钱草的阴性制剂，再按供试品溶液制备方法制备不含金钱草的阴性对照品溶液，进样10 μl测定。结果阴性对照品溶液分别在与槲皮素和山奈素对照品相同保留时间位置未见有相同保留时间的吸收，说明辅料对本方法测定槲皮素和山奈素的含量无干扰。见图谱1-c。
       2.9  加样回收率实验取已知含量的样品（批号：040509）内容物适量，精密称定，分别精密加入槲皮素对照品溶液（101.289 3 μg・ml1）2.0 ml和山奈素对照品溶液10.0 ml，按照供试品溶液制备项下的方法制备，依法测定，计算回收率。结果见表2～3。表2  槲皮素回收率测定结果（略）表3  山奈素回收率测定结果样品重（略）
       2.10  样品测定 取3批样品，按上述测定方法进行测定，以外标峰面积法计算样品的含量，结果见表4。表4  样品含量测定结果（略）
       　　3  讨论   
       3.1  本实验样品溶液的制备是参照《中国药典》2005年版Ⅰ部金钱草含量测定项下供试品溶液制备的方法，因本样品为颗粒剂，因此把回流1 h改为超声30 min，经试验证明该法提取效果较好，干扰成分较少。
       3.2  试验中以文献［1］提供的色谱条件为基础，改变流动相的比例，通过试验摸索，金钱草颗粒中各组分能够实现较好的分离，证明该条件适合金钱草颗粒的含量测定。
       3.3  本文建立的方法简便，专属性及重复好，结果准确可靠，可用于该制剂的质量控制与分析。
       　参考文献：
       ［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005:152.
       ［2］国家药品监督管理局.国家药品标准汇编中成药地方标准上升国家标准・口腔  肿瘤  儿科分册［S］.WS11446(ＺＤ1446)-002.
       (贵州省毕节地区药品检验所  551700)
       作者简介：何  羽(1978)，男(汉族)，贵州黔西人，现任毕节地区药品检验所药师，学士学位，主要从事药品检验和质量标准研究工作.