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       【关键词】  拳参正丁醇提取物；,,心肌缺血；,,冠脉结扎；,,血清酶；,,自由基
       摘要：目的观察拳参正丁醇提取物对结扎大鼠左冠状动脉前降支损伤的保护作用。方法取40只雄性Wistar大鼠，随机分为假手术组、结扎冠状动脉组、拳参正丁醇提取物高剂量组（120 mg/kg）、拳参正丁醇提取物低剂量组（60 mg/kg）。结扎冠状动脉左前降支使心肌缺血并持续120 min，复制结扎冠状动脉损伤模型。记录缺血前、缺血15min、给药30，60，90，120 minⅡ导联ECG，统计各标测点Ⅱ导联ECG的ST段偏移∑ST。治疗组于结扎冠状动脉左前降支前20 min经十二指肠注入拳参正丁醇提取物。结扎冠状动脉组及假手术组经十二指肠注入等体积生理盐水。实验结束后心内取血测定血清乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)活性；测定心肌组织丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活性。另用24只Wister大鼠同上述分组及动物模型制作方法，取其心肌作TTC染色测心肌梗死面积。结果治疗组与模型组比较，心肌梗死面积明显缩小，血清LDH、CK活性降低，血清MDA含量减小，SOD活性升高，∑ST值减少，且呈一定剂量依赖性。结论 拳参正丁醇提取物治疗组（高、低剂量）对大鼠结扎冠状动脉的损伤均有保护作用。
       关键词：拳参正丁醇提取物；  心肌缺血；  冠脉结扎；  血清酶；  自由基
       The Protective Effect of Polygonum Bistora L. nButyl Alcohol Extract on Myocardial Ischemia
       YE Heyang, WANG Xiurong, HUANG Zhi-hua, ZHOU Li, HE Wei, ZENG Jing
       (1.Department of Pharmacology, Gannan Medical College, Ganzhou,341000 China; 2.Huazhong University of Science and Technology, Wuhan 430074, China)
       Abstract：ObjectiveObserve the protective effect of Polygonum Bistora L. n-Butyl Alcohol Extract(PBNA) on anaesthetic rats caused by ligating the branch of left anterior descending coronary artery.MethodsRats ischemia injury model was established by lighting the branch of left anterior descending coronary artery for a durative course of 120 min. Forty male rats were randomly divided into four groups,  sham operation group,  model group, two PBNA （120mg/kg,60mg/kg）groups.The two PBNA groups were treated with PBNA respectively by given the drugs 20 min by way of duodenum before ischemia, and to the sham operation group and the model group, saline was given instead. TheⅡcardioelectric lead of ECG was recorded before myocardial ischemia was caused by ligating the branch of left anterior descending coronary artery and after lighting 15,30,60,90,120min, and analyzed the ∑-ST of Ⅱcardioelectric lead of ECG of each moment to evaluate the protective effect of treatment of PBNA.And the activity of creatine phosphokinase (CK) and lactate dehydrogenase (LDH) in serum, also the content of malondialdehyde (MDA) and superoxide dismutase (SOD) in myocardial tissue were observed to evaluate the protective effect of treatment of PBNA. To measure the area of myocardial infarction area of myocardial ischemia injury was by another 24 rats and by the same methods.ResultsThe area of acute myocardial infarction was less, the value of ∑-ST was reduced,the activity of LDH and CK were lower in the two PBNA groups than those in the model group. The activity of SOD was significanntly higher and that of MDA was markedly lower in the former two than those in the model group. And all the changes mentioned above show some dose-dependent effect.ConclusionPolygonum Bistora L. n-Butyl Alcohol Extract have obviously protective effects on myocardium against ichemia injury which was caused by ligating the branch of left anterior descending coronary artery.
       Key words：Polygonum Bistora L. n-Butyl Alcohol Extract(PBNA);  Myocardial ischemia;  Ligation coronary artery;  Serum enzyme;  Free radicals
   
　　拳参Polygonum Bistora L.别名草河车，系蓼科蓼属植物的干燥根茎。具有清热、镇惊、理湿、消肿等功效。主要成分［1］为没食子酸、丁二酸、槲皮素、槲皮素5OβD葡萄糖苷、原儿茶酸等。其中槲皮素的药理作用研究较多,包括抗癌［2,3］、止泻［4,5］、抑制血小板聚集［6］、心肌保护作用、抗氧自由基［7~11］等。其水提取液具有抗心律失常作用［12］；正丁醇提取物Polygonum bistora L. n-butyl alcohol extract，PBNA）具有中枢抑制［13］、镇痛作用［14］已有报道；本实验报道其正丁醇提物对结扎心肌冠状动脉的保护作用。
       　　1  材料
       1.1  拳参正丁醇提取物实验样品由沈阳药科大学植化教研室邱峰博士提供。实验前用双蒸水稀至所需浓度。
       1.2  动物与药品健康雄性Wistar大鼠，体重(220±20)g,由江西省实验动物中心提供（动物中心许可证号为0219712，动物合格证号为JXA2004118，级别为清洁级）。TTC，红四氮唑，2,3,5triphenylterazolium chloride TTC,中国医药集团上海化学试剂公司；甲醛溶液，南昌洪都试剂化工厂（批号040202）；其他试剂均为国产分析纯。
       1.3  试剂及仪器SOD，MDA，GSH，LDH，CK试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。Mettler Toledo AG135型光电天平，made in Switzerland；中佳KLC2046型低速冷冻离心机；721分光光度计，上海精密科学仪器有限公司；XDH3心电图机；DH140动物人工呼吸机，浙江医科大学医学仪器厂；电热恒温浴锅，湖北黄石医疗器械厂； JN-A型天平（上海第二天平仪器厂）； Hair冰箱；手术器械一套等。
       　　2  方法
       2.1  实验方法及分组取40只雄性Wistar大鼠，随机分为假手术组、结扎冠状动脉组、拳参正丁醇提取物高剂量组（120 mg/kg）、拳参正丁醇提取物低剂量组（60 mg/kg）。用10％水合氯醛(3 ml／kg)腹腔麻醉后，气管插管，行人工呼吸。左侧第3~4肋间开胸，剪开心包，暴露心脏，于肺动脉园锥及左心房间找出冠状动脉左前降支，并用圆形无创缝合针6／0丝线置于左冠状动脉前降支起始部下2 mm处备用。除假手术组仅穿线不结扎外，其余各组均以0号线立即结扎，结扎时用一细小塑料管（直径约0.8 mm）垫于血管与结扎线之间。结扎冠状动脉，以ECGⅡ导联ST段抬高0.1mV或T波高耸、心肌颜色变暗红色为结扎成功的标志，记录结扎15，30，60，90，120 min的Ⅱ导联ECG。治疗组于结扎冠状动脉左前降支前20 min经十二指肠注入拳参正丁醇提取物，模型组及假手术组经十二指肠注入等体积生理盐水。结扎120 min后实验结束，左心室心内穿刺取血，分离血清置20℃冰箱保存待测，测定血清乳酸脱氢酶(LDH)、磷酸肌酸激酶(CK)值, 操作步骤按试剂盒说明书进行。然后迅速取出心脏，并测定心肌组织丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)值。
       另取24只Wistar大鼠同上述分组及动物模型制作方法，取心肌作TTC染色测心肌梗死面积，取出心脏，用冰生理盐水洗净称重。将左心室均匀地横切成5份，用滤纸吸去表面水份，然后放入0.125％TTC 37℃环境中染色15 min，非梗塞区不变色，梗塞区呈灰白色。置于10%的甲醛溶液中固定24 h，将梗塞区心肌剪下，用光电天平称重，以梗塞区心肌湿重占全心肌湿重的百分比表示心肌梗塞的范围。评价拳参正丁醇提取物治疗组（高、低剂量）对大鼠心肌结扎冠状动脉损伤的保护作用。
       　　3  结果
       3.1  PBNA对麻醉大鼠冠脉结扎所致心肌梗死心肌梗塞范围的影响结果见表1。结果表明，拳参正丁醇提取物治疗组（高、低剂量）均能缩小心肌梗死范围，高剂量组与结扎冠状动脉组比较差异有显著性(P<0.01)。低剂量组与结扎冠状动脉组比较差异有显著性(P<0.05), 高、低剂量组的作用呈剂量相关性。表1  各组结扎冠状动脉损伤后心肌梗塞范围比较 (略)
       3.2  PBNA对麻醉大鼠冠脉结扎所致心肌梗塞中血清LDH和CK的影响结果见表2。结果表明，各组与假手术组比较，其LDH值均明显升高(P< 0.01)。拳参正丁醇提取物（高剂量组）与结扎冠状动脉组比较，使血清LDH降低(P<0.01)，拳参正丁醇提取物（低剂量组）与结扎冠状动脉组比较，也能使血清LDH降低(P<0.05)。拳参正丁醇提取物（高剂量组）与结扎冠状动脉组比较，使血清CK值降低(P<0.01)，拳参正丁醇提取物（低剂量组）与结扎冠状动脉组比较，均能使血清CK值降低(P<0.05)。表2  各组血清LDH和CK的比较(略)
       3.3  PBNA对麻醉大鼠冠脉结扎所致心肌梗塞中心肌组织SOD活性和MDA含量的影响结果见表3。结果表明，假手术组SOD活性最高，与其他各组相比较差异有显著性(P<0.01)。而拳参正丁醇提取物（高剂量组）与结扎冠状动脉组比较SOD活性明显增高，差异有显著性(P<0.05)，拳参正丁醇提取物治疗（低剂量组）与结扎冠状动脉组比较MDA含量虽有增高，但无显著性差异。假手术组MDA含量值低，与其他各组相比较差异有显著性(P< 0.01)。而拳参正丁醇提取物（高剂量组）与结扎冠状动脉组比较MDA明显降低，差异有显著性(P< 0.05)，拳参正丁醇提取物治疗（低剂量组）与结扎冠状动脉组比较MDA虽有降低，但无显著性差异。表3  各组心肌组织SOD活性和MDA含量的比较(略)
       3.4  PBNA对麻醉大鼠冠脉结扎所致心肌梗塞ΣST的影响 结果见表4。结果表明，PBNA低、高剂量组十二指肠给药后ΣST与模型组比较均明显下降(P＜0.05或0.01），提示PBAN能明显减轻心肌缺血程度，且呈一定剂量依赖性。
       　　4  讨论
       心肌结扎冠状动脉损伤时，自由基的产生及其介导的脂质过氧化反应、心肌细胞Ca2+超载是心肌结扎冠状动脉损伤重要环节之一。因此，寻找有效氧自由基清除剂及Ca2+拮抗剂，恢复缺血区心肌细胞正常功能，已成为心肌结扎冠状动脉药物研究的重要方面。表4  PBNA对麻醉大鼠冠脉结扎所致心肌梗塞ΣST的影响(略)
       拳参正丁醇提取物，其主要有效成分为没食子酸、丁二酸、槲皮素、槲皮素5OβD葡萄糖苷、原儿茶酸等。其中槲皮素、槲皮素5OβD葡萄糖苷具有抗癌、清除氧自由基，抗脂质氧化反应，保护心肌［8~11］。降低血液黏滞度［6］，改善缺血心肌组织微循环，对结扎冠状动脉损伤心肌起保护作用。
       拳参正丁醇提取物对大鼠急性心肌结扎冠状动脉损伤具有保护作用，其保护机理可能与下列因素有关：①扩张冠状动脉，降低血管阻力，增加结扎冠状动脉血流量；②抗凝、抑制血小板聚集活化［6］，降低血粘滞度，改善营养性心肌血流量。使缺血受损的心肌细胞得到充分血液营养供应；③抗心律失常作用［12］；④通过Ca2+拮抗剂样作用阻止Ca2+内流，增加肌浆网Ca2+摄取．减少胞浆游离Ca2+"浓度，阻断Ca2+超载引起的心肌细胞损伤加重；⑤抗氧自由基作用。
       本实验结果提示，拳参正丁醇提取物对大鼠心肌结扎冠状动脉损伤有明显的保护作用。其主要作用成分可能为槲皮素。
       参考文献：
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       1.赣南医学院,江西 赣州  341000； 
       2.华中科技大学，湖北 武汉  430074
       基金项目：江西省卫生厅中医药管理局科研基金资助课题（No.030015）
作者简介：叶和杨(1968)，男(汉族)，江西上饶人，现任赣南医学院副教授，学士学位，主要从事免疫药理及中草药药理的研究工作.