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       【关键词】  童喘清颗粒；,,,黄芪甲苷；,,,高效液相色谱法
       摘要：目的建立了童喘清颗粒含量测定的高效液相色谱-蒸发光散射（HPLC-ELSD）方法。方法采用汉邦ODS C18（4.6 mm×250 mm,5 μm）色谱柱；柱温：30℃；流动相为乙腈-水（36∶64），流速1.0 ml/min；蒸发光散射检测器（漂移管温度：110℃，气体流量：2.3 L/min）检测。结果黄芪甲苷量在2.036~20.460μg范围内呈良好线性关系，r=0.999 1，样品平均回收率为97.8%，RSD为1.97%。结论HPLC-ELSD测定童喘清颗粒中黄芪甲苷结果准确可靠、快速、灵敏、重现性好。
       关键词：童喘清颗粒；   黄芪甲苷；   高效液相色谱法
       Determination of Astragaloside IV in Tongchuanqing Granules by HPLC-ELSD
       ZHU Ling-ying, DUAN Jin-ao, QIAN Da-wei, JU Jian-ming
       (Jiangsu Academy of Traditional Chinese Medicine,Jiangsu Engineering Research Center For Pharmaceutical Preparation,Nanjing 210028, China)
       Abstract:ObjectiveTo established an HPLC-ELSD method for the determination of astragalosid IV in Tongchuanqin Granules.MethodsA Hanbon C18(4.6 mm×250 mm, 5 μm)column was used and a mixture of acetonitrile-water(36∶64)was used as the mobile phase at a flow rate 1.0 ml/min.The column temperature was 110℃ and the flowrate was 2.3 L/min.ResultsThe linear ranges of determination of astragalosid IV were 2.036~20.460 μg,and r was 0.999 1.The average recovery was 97.8% and RSD was 1.97%.ConclusionThe method is sensitive,rapid and the results are accurate with good reproducibility.
       Key words:Tongchuanqin Granules;  Astragaloside IV;  HPLC-ELSD
   
　　童喘清颗粒为新研发的中药制剂，主要由黄芪、化橘红、葶苈子等药材组成，益气培元，平喘止咳，化痰下气，用于儿童哮喘。根据祖国传统中医药理论及方解，在本方中黄芪为君药，其它各药分别为臣药与佐使药。为了控制该制剂的内在质量，参照文献方法［1,2］，建立了制剂中黄芪成分黄芪甲苷的高效液相色谱一蒸发光散射检测的含量测定方法。
       1  仪器与材料
       1.1  仪器Waters高效液相色谱仪（Alliance 2695四元泵、自动进样系统、柱温箱、Empower色谱工作站）；Allerch ELSD-2000蒸发光散射检测器；MilliporeMilli-Q纯水器；METTLER万分之一及百万分之一电子天平。
       1.2  材料黄芪甲苷（中国药品生物制品检定所，批号：0781-200109）；乙腈（色谱纯）；童喘清颗粒（中试产品）。
       　2  方法与结果
       2.1  色谱条件色谱柱：汉邦ODS C18（4.6 mm×250 mm,5 μm）；柱温：30℃；流动相：乙腈水（36∶64）；流速：1 ml/min；检测器：漂移管温度：110℃，气体流量：2.3 L /min。
       在此条件下，供试品溶液中黄芪甲苷与相邻成分达到基线分离，理论板数，以黄芪甲苷峰计可达5 000。结果见图1。
       2.2  对照品溶液的配制精密称取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每毫升含1.02,0.5,0.307,0.15 mg的4个浓度，即得。
       2.3  线性范围的考察精密吸取黄芪甲苷对照品溶液（1.023 mg/ml）2.0,4.0,8.0,12.0,16.0,20.0 μl，注入液相色谱仪，以进样量的常用对数值作为横坐标，峰面积的常用对数值为纵坐标进行回归计算，得回归方程：Y=1.46+5.12X ，R=0.999 1。以上结果显示在选定的HPLC条件下，黄芪甲苷进样量在2~20 μg呈良好的线性关系。
       2.4  精密度实验精密吸取浓度为307 μg/ml的对照品溶液20 μl，按选定的HPLC条件，连续进样6次，以考察仪器的精密度，平均峰面积积分值为1 813 268，RSD为1.1%。
       2.5  供试品溶液的制备及样品测定取本品装量差异项下的内容物约2.5 g，研细，精密称定，置具塞锥形瓶中，加入水50 ml，密塞，浸泡30 min，超声处理30 min，用水饱和正丁醇提取4次，第1次50 ml，第2，3次各40 ml，第4次30 ml，合并正丁醇液，用氨试液提取2次，50 ml/次，弃去氨水液，再用水洗2次，50 ml/次，弃去水层，正丁醇提取液水浴蒸干，残渣用甲醇溶解转移至5 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，用微孔滤膜（0.45 μm）滤过，取续滤液，即得。
       2.6  重复性实验
       取同一批号样品（20030620）5份，按供试品溶液制备方法制备，HPLC测定，其平均含量为0.813mg/g，RSD为1.4%。
       2.7  加样回收率取已知含量样品颗粒（20020620）（黄芪甲苷含量测定结果为：0.813 mg/g）约1.25 g共5份，精密称定，各加入每毫升含黄芪甲苷1.006 mg的对照品的溶液1.0 ml，按供试品溶液的制备方法处理样品，并测定。结果平均回收率为97.7%，RSD为2.0%。结果见表1。表1  加样回收率实验结果（略）
       2.8  稳定性实验取同一供试品溶液，分别于0，2，4，6，8，12，16，20，24 h进样，测定，RSD=2.1%。
       2.9  3批中试样品测定按拟定的含量测定方法对3批中试样品进行测定。结果见表2。表2  样品中黄芪甲苷的测定结果（略）
       　　3  讨论
       3.1  黄芪为本方的君药，皂苷类成分为黄芪的有效成分，黄芪甲苷为皂苷类成分的主要组分，故选择黄芪甲苷为控制本品质量的指标成分，黄芪中黄芪甲苷的测定，已报道的有薄层扫描法、高效液相色谱法等。本标准对照有关文献，建立高效液相色谱一蒸发光散射检测的黄芪甲苷含量的测定方法，具有分离效果好、灵敏、准确等优点。
       3.2  在进行黄芪甲苷色谱条件优化试验中，我们选择了不同的流动相：不同配比的乙腈∶水；甲醇∶水。发现乙腈∶水为较优组合，经过比较，确定乙腈∶水（36∶64）为最佳流动相。在运用ELSD-2000选择漂移管温度、气体流量，经过筛选，确定漂移管温度110℃，气体流量为2.3 L /min，为最佳色谱条件，在此条件下黄芪甲苷峰与相邻成分达到基线分离，理论塔板数以黄芪甲苷计可达5 000。
       3.3  根据3批中试结果，本品中黄芪甲苷含量的下限暂定为平均含量下浮20%，即为0.60 mg /g。
       3.4  根据本品为颗粒剂，在本品前处理方法的确定中，选择通过比较最终确定了用水直接浸泡的前外理步骤。
       3.5  本文建立的含量测定方法，能有效地控制童喘清颗粒的质量，方法简便、回收率好、精度高、重现性好。
       　参考文献：
       ［1］国家药典委员会.中国药典,Ⅰ部［S］.北京:化学工业出版社,2000:249.
       ［2］钱广生,刘三康,李章方.HPLC测定黄芪注射液中黄芪甲苷的含量［J］.华西药学杂志,2002,17(1):41.
       (江苏省中医药研究院，江苏省现代中药制剂研究技术工程中心，江苏 南京  210028)
       作者简介：朱玲英(1953)，女(汉族)，上海人，现任江苏省中医药研究院副主任技师，主要从事中药新药分析工作.