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       【关键词】  疏肝舒乳颗粒；,,乳腺增生症；,,动物模型；,,形态学,
       摘要：目的通过家兔乳腺增生症（HDB）模型的复制，观察疏肝舒乳颗粒(SGSR)对HDB形态学的影响，探讨其治疗HDB的机理。方法采用雌二醇肌肉内注射法，复制家兔乳腺增生症模型，经SGSR干预治疗后，观察动物HDB的形态学改变。依组织增生程度的不同HDB模型被分为正常对照及轻、中、重三级（0Ⅲ）。结果经SGSR治疗后，增生的多层乳腺导管上皮回复为单层柱状上皮，部分上皮发生退行性改变及变性萎缩，同造模组相比，有统计学差异(P<0.01)。结论 疏肝舒乳颗粒是治疗HDB的有效药物,其治疗HDB的机理之一是使乳腺导管上皮及腺上皮发生退行性改变和变性萎缩。
       关键词：疏肝舒乳颗粒；  乳腺增生症；  动物模型；  形态学
       The Morphologic Effects of Shu Gan Shu Ru Granule on the Hyperplastic Disease of Breast of Experimental Rabbit
       WANG Chengxin , LI Yan
       (Cancer Institute of Jianghan University ,Wuhan 430056,China)
       Abstract：ObjectiveTo observe the the morphologic effects of Shu Gan Shu Ru granule (SGSR) on hyperplastic disease of breast (HDB) of experimental rabbits and investigate the mechanism of SGSR to treat HDB, this study was carried out by means of the rabbit model of HDB.MethodsThe method of intramuscular injection of benzoate estradiol on rabbits to duplicate the model of HDB was applied, then the rabbits were treated with SGSR and the morphologic changes of animal HDB were observed. According to the extent of lesion HDB model was divided into normal, mild, moderate and severe degrees (0Ⅲ).ResultsAfter treatment the hyperplastic and dysplastic multi-layer duct epithelia returned normal and part of the epithelia showed atrophic disappearance and there were statistically differences(P<0.01). ConclusionSGSR is an effective drug of treating HDB. One of the treatment mechanism was that it not only restrains the hyperplasia / dysplasia of duct epithelia but also made it retrocession and atrophic changed.
Key words：Shu Gan Shu Ru Granules;  Hyperplastic disease of breast;  Animal model;  Morphology
   
　　乳腺增生症是育龄妇女的一种常见病,病理学上越来越多的研究也证明其同乳腺癌的关系十分密切，特别是异型增生者更易癌变［1］。故开发有效的治疗HDB的药物,是防治乳腺癌的关键。自1995年始，我们根据乳腺增生的机理，结合现代中药研究成果及中医理论研制的疏肝舒乳颗粒 (SGSR) 治疗乳腺增生症（HDB），经临床应用多年，有确切的治疗效果［2］。本研究通过HDB动物模型的建立，进行实验性药物治疗，并着重观察治疗后动物HDB的病理形态学变化，探讨SGSR治疗效果与形态学的关系，为该药治疗HDB提供理论依据。
       　　1  材料与方法
       1.1  药物方剂由柴胡、当归、丹参、黄芪、延胡索、王不留行等多味中药组成。医院制剂生产批文为武制剂［98］A4098；批号：991118，武汉市四医院中药制剂室制备，成品含药量同生药量相等。苯甲酸雌二醇注射液，上海第九制药厂生产；三苯氧胺片，10 mg/片，上海华联制药有限公司生产。
       1.2  动物分组及给药方法选用5~6月龄的未孕雌性日本大耳白兔，体重1.9~2.2 kg，购自华中科技大学同济医学院动物实验中心。
       家兔HDB模型的复制：参照文献报道方法［3］，选雌性家兔24只，随机分为空白组（6只）和实验组（18只）。实验组每天每只家兔肌肉注射苯甲酸雌二醇2 ml（浓度为1 mg/ml），连续使用30 d，停药后随机分为造模对照组、疏肝舒乳治疗组、三苯氧胺治疗组，每组6只，观察至实验结束。SGSR及三苯氧胺组：均分别自兔乳腺增生症模型建立后第31天开始饲喂SGSR及三苯氧胺，连续用药30 d，药物剂量按成人每天剂量×10（倍）×兔体重（kg）÷50(kg)计算。空白对照组动物每天只肌肉注射生理盐水2 ml，连续肌注30 d后停用。造模对照组正常进食、进水至实验结束时分别提取兔的第1对乳腺组织。
       1.3  标本采集和结果判断分别于实验结束（第61天）时，经兔耳静脉注入空气，处死动物，解剖分离兔的第一对乳腺组织，置40 g/L甲醛液内固定，常规石蜡包埋制片，HE染色。
       1.4  统计学方法 以F检验进行统计学处理。
       　2  结果
       因我们实验中的动物为未孕家兔，而雌激素的作用主要是刺激乳腺导管上皮及腺上皮的增殖，故实验中所观察到的主为腺管和腺上皮的改变，腺泡和小叶很少或很难见到。
       2.1  大体观察对不同组别兔的乳腺组织作比较观察，结果发现，不同组别兔的乳腺在大体上也有一定的差异，尤其是HDB造模组各兔乳腺明显增大，形成不太规则之肿胀区，切面有淡黄色液体流出。SGSR组和三苯氧胺组的兔乳腺组织也有与模型组类似改变，但乳腺肿胀增大较轻。空白对照组兔的乳腺未见明显大体病变。
       2.2  光镜观察HDB的镜下形态复杂，分类标准难以掌握，参照人体HDB分类标准［4,5］，将动物HDB模型也分为正常对照及轻、中、重三级，用0～Ⅲ表示。0~Ⅰ级属正常范围，上皮细胞单层；Ⅱ级为上皮细胞增生，层次2~3层，可见低乳头状结构；Ⅲ级为导管上皮非典型增生,细胞层次增多，极性紊乱,管腔大小不等,呈实性、筛状、乳头状增生，但可见肌上皮或次级腺腔等良性指征。不同组别兔乳腺组织形态学分级比较见表1。1  不同组别动物乳腺组织病理形态分级比较（略）
       空白对照组 0~Ⅰ级共10例（10/12），Ⅱ级2例；造模对照组６只兔的乳腺组织呈现大致相同的改变，Ⅱ~Ⅲ级各有5例（10/12）, Ⅰ级2例，其腺体和腺上皮细胞增生, 细胞柱状, 层次增多, 部分导管上皮呈乳头状及实性异性增生，极性紊乱。SGSR及三苯氧胺治疗组多为0~Ⅰ级, 分别为10（10/12）和8例（8/12），其腺体减少, 腺上皮多为单层,低柱、低立方及扁平状, SGSR治疗组可见部分腺上皮萎缩消失。同造模组比较，有统计学差异（P<0.01）。
       从表1中也可看出，SGSR治疗组Ⅱ级为2例，而三苯氧胺组Ⅱ级为4例，证明SGSR的疗效好于三苯氧胺。形态学上，三苯氧胺治疗组的导管上皮呈多样性变化，灶性上皮细胞增生及低乳头状增生较疏肝舒服乳颗粒组明显，上皮细胞萎缩性改变难见，但因样本数量有限，没有统计意义。
       　　3   讨 论
       HDB的发病机理尚不十分清楚，认为与内分泌功能紊乱有关。乳腺的正常生长发育直接受卵巢性激素的影响。卵巢功能失调,致使体内雌激素水平增高或活性增强，孕激素与雌激素比例失调, 导致HDB的发生。本实验观察到在一定时间内维持实验兔血中雌二醇较高浓度，造成血中雌、孕激素比例失调，成功地复制了兔乳腺增生症模型。形态学观察发现，ＨＤＢ模型组中最突出的形态变化是乳腺导管上皮增生和异型增生，结果支持动物体内雌二醇浓度升高是引起ＨＤＢ的主要原因之一。
       三苯氧胺是目前认为治疗ＨＤＢ较为有效的西药，能够抑制和治疗乳腺增生症［6］，但其毒副作用也大，有长期接受三苯氧氨治疗的患者子宫内膜癌的发病率升高的报告［7，8］，故患者难以长期和普遍接受这一治疗。本研究在ＨＤＢ模型的基础上，应用SGSR和三苯氧胺饲喂动物，比较这两种药物对动物乳腺组织产生的形态学变化。结果发现，疏肝舒乳颗粒不仅能影响乳腺导管上皮的增生，而且使之发生退行性改变，出现了疗效好于三苯氧胺的形态学变化。这一结果提示，SGSR对ＨＤＢ的治疗作用主要表现在影响乳腺导管及腺上皮的形态学变化，使其增生受阻并使增生的上皮发生退变或萎缩性改变，从而达到治疗的作用。
       中医认为，乳腺增生症属于“乳癖”范围，情志内伤，肝郁气滞；肝肾不足，冲任失调；阳明胃热，热伤血络是本病的病机特点。从药物机理分析，疏肝舒乳颗粒中柴胡、当归、丹参、疏肝理气，活血化瘀，王不留行、延胡索、黄芪行气散结，消肿止痛，实验表明该方在治疗乳腺增生症、消除增生所引起的症状，均有较好的临床效果。
中药治病的机理复杂,我们前期的研究发现SGSR能提高人体淋巴细胞转化率［9］和其内含有β胡萝卜素类物质, 而β胡萝卜素在试管内可杀灭人乳腺癌细胞［10］。方中的当归和黄芪均可分离出一种多糖成分［11，12］其具有广泛的生物学活性，当归和其中单体成份阿魏酸均能明显地促进转化的淋巴细胞DNA及蛋白质的合成［11］，抗肿瘤的机理可能是通过骨髓细胞增殖能力，激活淋巴细胞，并使之分泌抗体和促进中性粒细胞及巨噬细胞吞噬功能等提高机体免疫功能的作用来达到抑制或杀死肿瘤细胞的目的。在研究人体HDB的过程中我们发现SGSR能明显抑制p53基因的过表达［13］，其抗增生机理也可能和这些作用有关。至于该方中的主要成分提取后对HDB形态学的影响，仍在实验与探讨中。
       　参考文献：
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       (江汉大学肿瘤研究所，湖北 武汉  430056)
       作者简介：王成鑫(1954)，男(汉族)，湖北十堰人，现任江汉大学肿瘤研究所主任医师，学士学位，主要从事肿瘤病理研究工作.