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       【关键词】  乙醇
        摘要：目的：研究漏芦乙醇提取物对D半乳糖致衰老小鼠组织学的影响。方法：D半乳糖制作小鼠衰老模型，组织化学方法观察小鼠脑组织琥珀酸脱氢酶(SDH)、乳酸脱氢酶(LDH)、脂褐素(LPF)的变化，同步观察电子显微镜下的组织学变化。结果：漏芦乙醇提取物对D半乳糖所致的衰老小鼠的大脑皮质神经元的SDH活性下降、LDH活性升高及LPF含量增多有明显的抑制作用，对线粒体等细胞器的变性具有改善作用。结论：漏芦乙醇提取物对D半乳糖致衰老小鼠具有抗衰老作用。
        关键词：漏芦；衰老；组织学；小鼠
        Study of the Alcohol Extract of Rhaponticum uniflorm(L.)DC.  on  Histology in the Senescent mice Induced by Dgalactose
        PIAO Long1, XING Cheng2
        (1.Affiliated Hospital of College of Medicine,Yanbian University ,Yanji 133000, China； 2.Jilin Provincial Bureau of Health，Changchun 130000，China)
        Abstract:Objective:To study on the effect of the alcohol extract of Rhaponticum uniflorm(L.)DC.  on  histology in the senescent mice induced by Dgalactose.Methods:The senescent mice induced by Dgalactose, SDH and LDH, LPF were detected by the histochemical method, and the histological changes were synchronously observed by electronic microscope.Results:Rhaponticum uniflorm(L.)DC. extract significantly increased the the activity of SDH in brain tissue, decreased the activity LDH and the content LPF. It was observed under microscope that Rhaponticum uniflorm(L.)DC. could retrieve the degeneration of mitochondrion.Conclusion:Rhaponticum uniflorm(L.)DC. extract has antisenile effect on Dgalgctose induced senescent in mice.
        Key words:Rhaponticum uniflorm（L.）DC.;Senescence;Histology;Mice
        漏芦Rhaponticum uniflorm(L.)DC. 为菊科多年生草本植物，产于东北、华北和西北诸省区，药源丰富。早在《神农本草经》中就有“下乳汁，......轻身益气、耳目聪明、不老延年"的记载。近年来研究发现漏芦有提高细胞免疫［1］、抗动脉粥样硬化［2］、抗炎［3］等作用。本实验观察漏芦对D半乳糖所致小鼠衰老模型的组织学变化，阐明漏芦的抗衰老作用，为进一步开发应用漏芦提供一些实验依据。
           1材料与方法
        1.1药物漏芦采自吉林省长白山，将漏芦切碎后，用90%乙醇回流提取(1h)3次，温度100℃。合并3次滤液，减压浓缩，得漏芦乙醇提取物(1 g漏芦有效成分相当于7.3 g漏芦生药)。
        1.2试剂D半乳糖系上海试剂二厂产品(批号为980218)，其他试剂均为国产分析纯。
        1.3仪器JEM1200透射电镜，OLMPUS万能显微镜。
        1.4动物昆明种小鼠(雌雄各半)，体重为18～22 g，由延边大学医学院动物科提供。
        1.5方法
        1.5.1衰老小鼠模型的制备及药物投入60只小鼠随机分为正常组，模型组，给药组、阳性对照组。各组动物在实验前禁食12 h进行实验，给药组分别灌服漏芦乙醇提取物7.12，3.56，1.78 g/(kg・d)、阳性对照组灌服脑复康0.4 g/kg及等体积蒸馏水。除正常组外，给药组和模型组小鼠每天皮下注射D半乳糖0.12 mg/kg，连续40 d。第41天处死小鼠，迅速取出大脑，进行组织学观察。
        1.5.2观察指标
        1.5.2.1超微结构观察左侧小块中央回皮质1 mm×1 mm×1 mm，用0.1 mol/L磷酸缓冲液冲洗3次，经3%戊二醛固定2 h，1%锇酸后固定1 h，梯度丙酮脱水，Epon812环氧树脂包埋,做超薄切片，铀铅双重染色后，在JEM200透射电镜下观察并拍片。
        1.5.2.2组化指标观察取组织块, 立即进行冰冻切片，并以陈啸梅等［4］报道的方法显示SDH，LDH；Glenner氏反应法显示LPF，万能相差显微镜下观察并拍片。
           2结果
        2.1超微结构观察正常组细胞器形态基本正常，模型组神经元胞体内溶酶体大小和形态不规则，线粒体出现肿胀变性和空泡样变，且核膜不规则；给药组、阳性对照组锥体细胞内溶酶体、LPF大小和形态较规则，线粒体轻度肿胀，核膜较规则。
        2.2组化指标观察酶组织化学按反应颜色的深浅不同,分别对照观察:分为弱阳性(±)、阳性(＋)、中等阳性()、强阳性()、最强阳性()四个等级。结果见表1。
        表1各组神经元内酶组织化学及LPF含量变化表（略）
           3讨论
        SDH存在于所有的有氧呼吸的细胞内，是线粒体的标志酶，SDH活性变化与线粒体的损伤同时现，与线粒体的数目平行升降其活性能反应三羧酸循环情况［5］。LDH是细胞内无氧糖酵解途径重要的酶。正常情况下，大脑皮层神经细胞内的能量代谢（生物氧化）极其旺盛，而无氧糖酵解作用低下。本实验模型组SDH活性明显降低，LDH的活性明显增强，而漏芦能使SDH活性增强，抑制LDH活性，说明漏芦能够改善细胞的能量代谢，使细胞处于功能活跃状态。LPF是一种代谢废物，是由于自由基使细胞膜发生脂质过氧化作用，产生的脂质过氧化物与蛋白质结合而形成的，是衰老的一项重要指标［6］。随着年龄的增长，LPF越积越多，主要存在于心脏、血管、大脑、肝脏等处，其数量的多少反映了细胞损伤的程度，降低其在细胞内的堆积，有可能延缓衰老［7］。本实验提示漏芦可以减少LPF的形成和畜积。
漏芦作为一种抗衰老的药物，具有广泛的开发前景，对其确切的作用机理，今后应从其有效成分及抗脂质过氧化角度进行深入研究。
           参考文献：
        ［1］龚树生，阎汝南，党毅，等. 白何首乌总磷脂及漏芦蜕皮甾酮对小鼠细胞免疫的影响［J］中华老年医学杂志，1983，2(4)：193197.
        ［2］刘晓青，卢咏才，郭肇铮，等. 漏芦对鹌鹑动脉粥样硬化形态学变化的影响［J］. 中国医药学报，1989，4(3)：2224.
        ［3］邹莉波，于庆海. 祁州漏芦抗缺氧作用及机制的研究［J］. 中国药理与临床，1993，6(3)：3032.
        ［4］陈啸梅. 组织化学手册［M］.北京：人民卫生出版社，1982：224224.
        ［5］Ishihara A, Ohira Tanaka M, Nishikawa W, Ishioka N, Higashibata A, Izumi R,Shimazu T, Ibata Y. Cell body size and succinate dehydrogenase activity of spinal motoneurons innervating the soleus muscle in mice, rats, and cats［J］. Neurochem Res 2001;26:13011304.
        ［6］郑沛枢,徐萍,陶玲娣. 皮肤中脂褐素含量与皮肤老化的关系［J］.中华皮肤科杂志,1990,24(6):407410.
        ［7］张熙，李文彬，谢光春，张学敏.脂褐素形成的实验研究［J］.中华老年医学杂志,1993;12(1):35.
        (1. 延边大学医学院附属医院，吉林 延吉133000；2.吉林省卫生厅，吉林 长春130000)