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       【关键词】  胡颓子叶；,,,免疫功能
       摘要：目的探讨胡颓子叶对小鼠免疫功能的影响。方法用不同剂量胡颓子叶水煎液给正常小鼠连续灌胃10 d，检测小鼠免疫器官脏体比、巨噬细胞吞噬功能、T淋巴细胞增殖。结果胡颓子叶水煎液能增加小鼠胸腺指数和脾指数、明显增强小鼠巨噬细胞吞噬功能、促进T淋巴细胞增殖。结论胡颓子叶水煎液显著增强小鼠免疫功能。
       关键词：胡颓子叶；   免疫功能
       Influence of Leaves of Elaeagnus bockii Diels  on Immunefunctions of Mice
       WU Yang, LIU  Jin hong, NIE Qing
       (Medical School of Hubei Institute for Nationalities,Enshi 445000, China； The People"s Hospital of Jianshi County of Hubei,Jianshi  445000, China)
       Abstract:ObjectiveTo study the effect of leaves of Elaeagnus bockii Diels on immunefunctions of mice.MethodsAfter mice were fed with different amount  of water boiled liquid of the leaves for 10 days,the ratio of organs and body weight,phagocytes function and lymphocytes replication were detected.ResultsWater boiled liquid of the leaves of Elaeagnus bockii Diels increased the index of thymus and spleen,promoted phagocytic function of phagocytes of mice,enhanced replication of T lymphocytes.ConclusionLeaves of Elaeagnus bockii Diels can obviously increase immunefunctions of mice.
       Key words: Elaeagnus bockii Diels;   Immunefunctions
   
　　胡颓子科Elaeagnaceae植物，全球共有3属约80余种，我国有沙棘属Hippophae和胡颓子属Elaeagnus两属。沙棘属我国只有4种［1］，已经得到较好研究、开发和利用，并取得了巨大的经济、生态及社会效益［2］。胡颓子属我国约有51种［1］，全国各地均产，但长江流域及以南地区更普遍，资源极为丰富，但其药用、食用等作用至今研究较少。本课题组选用生长于湖北省巴东县的长叶胡颓子Elaeagnus bockii Diels研究其抗肿瘤作用。为探讨其抗肿瘤作用及机理，我们做了长叶胡颓子叶对小鼠免疫功能影响的实验研究。
       　　1  材料
       1.1  动物昆明种小鼠、雌雄各半，体重18~22 g。
       1.2  主要试剂长叶胡颓子叶采自湖北省巴东县，四噻唑盐（MTT），Sigma公司产品。BRMI1640细胞培养基，GIBCO公司产品。植物血凝素（PHA），Sigma公司产品。二甲基亚砜（DMSO），苏州化工研究所产品。MK3型酶标仪，芬兰雷勃中国总部产品。
       　　2  方法
       2.1  受试物及给药长叶胡颓子叶常规水煎2次，用纱布过滤后混合并浓缩至1 g生药/ml，4 ℃保存备用。实验小鼠随机分成4组，每组10只，正常对照组用生理盐水灌胃0.4 ml/d，共10 d；实验1，2，3组分别用胡颓子叶水煎液10，20，30 g/kg・d-1灌胃，连续10 d后测定以下指标。
       2.2  巨噬细胞吞噬功能测定实验第10天各组小鼠称体重，然后每只小鼠腹腔注射5%淀粉肉汤1 ml，致敏24 h后，腹腔注射1 ml，5%鸡红细胞悬液，4 h后脱臼处死小鼠，并在腹腔注入5 ml冷Hank液，按摩腹部5 min后，解剖小鼠，无菌吸取腹腔液涂片，晾干，甲醇固定5 min，瑞姬氏复合染色剂染色，镜检，在油镜下观察，随机计数100个吞噬细胞中吞噬鸡红细胞及吞噬的鸡红细胞总数，并计算巨噬细胞吞噬百分率与吞噬指数。
       2.3  免疫器官脏体比的影响上述处死小鼠，无菌操作取胸腺，脾脏称重，分别计算胸腺指数、脾指数。
       2.4  T细胞增殖反应测定（MTT法）［3］无菌取脾脏制备小鼠脾细胞悬液，用RPMI1640I不完全营养液流涤3次，10 000 r/min离心，然后用完全营养液配成3.5×106 ml，台盼蓝染色检测细胞存活率＞95%；取100 ml加入96孔细胞培养内（每孔含3.5×105ml个细胞，每个样品做3个复孔），加入240 mg/L的PHA 20 ml（使终浓度为40 mg/L，同时设不加PHA对照孔），置37℃、5%CO2培养箱中培养48 h后，每孔加入MTT 10 ml（5 g/L），再继续培养4 h，离心，弃上清，加入30%DMSO 100 ml充分振荡后静置20 min，最后用酶标仪于波长570 nm处测OD值。结果以3个复孔的平均值±标准差表示。
       　3  结果
       3.1  长叶胡颓子叶对小鼠免疫器官脏体比的影响结果见表1。
       表1  长叶胡颓子叶对小鼠胸腺和脾脏的影响(略)
       与对照组比较,aP＜0.05
       3.2  长叶胡颓子叶对小鼠吞噬细胞吞噬功能的影响结果见表2。
       表2  长叶胡颓子叶对小鼠巨噬细胞活性的影响(略)
       与对照组比较,bP＜0.01
       3.3  长叶胡颓子叶对小鼠T淋细胞巴增殖的影响结果见表3。
       表3  长叶胡颓子叶对小鼠T细胞增殖的影响(略)
       与对照组比较,bP＜0.01
       　　4  讨论
       本实验结果显示，长叶胡颓子叶能增加小鼠胸腺指数和脾指数，增强腹腔吞噬细胞的吞噬功能，促进T淋巴细胞增殖，且胡颓子叶对小鼠免疫功能增强作用的程度与胡颓子叶浓度之间有一定的依存关系，在一定范围内随浓度增加而增强（实验2，3组比实验1组效果好），但到了一定剂量后其作用效果就不再继续上升（实验2，3组之间差异无统计学意义P＞0.05）。巨噬细胞是机体内生物学作用最为活跃的细胞，具有吞噬、杀伤及消化病原体、杀伤肿瘤细胞，并在特异性免疫应答中参与抗原的提呈及免疫调节作用［4］。T淋巴细胞介导特异性细胞免疫并参与体液免疫应答。而机体抗肿瘤免疫效应一般以细胞免疫为主［4］。长叶胡颓子叶对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的激活，对T淋巴细胞增殖的促进，显示其良好的免疫增强作用，并可能是其抗肿瘤作用机制之一。本课题组正在进行的提取长叶胡颓子熊果酸，体外对脾细胞增殖及脾细胞产生IFNγ、IL2水平影响的研究，将进一步探讨胡颓子叶抗肿瘤机制。
       　　参考文献：
       ［1］  张泽荣.中国植物志,52卷二分册［M］.北京：科学出版社，1983：659.
       ［2］  杨昌煦,熊济华.重庆胡颓子植物种质资源与利用研究［J］.西南农业大学学报，2002，24(1)：26，41.
       ［3］  林忠宁,董胜璋,董书芸,等.MTT法检测T淋巴细胞增殖功能的方法学探讨与应用［J］.中国卫生检测杂志，2000，10(1)：8.
       ［4］  龚非力.医学免疫学，第2版［M］.北京:科学出版社,2004.
       基金项目：湖北省科技厅科技攻关资助项目（No.JX2C42）
       (湖北民族学院医学院，湖北 恩施  445000；  湖北省建始县人民医院，湖北 建始  445000)