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       【关键词】  川芎嗪；,,肠缺血再灌注损伤；,,小肠；,,肝脏
       摘要：目的探讨川芎嗪对大鼠肠缺血再灌注肝损伤的保护作用。方法选用健康Wistar大鼠24只，随机分成3组（每组8只）：假手术对照组、缺血再灌注组、川芎嗪治疗组。夹闭大鼠肠系膜上动脉（SMA）60 min造成缺血，再灌注2 h后取出肝组织制成匀浆，测定超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化酶（GSHPX）、丙二醛（MDA）、Ca2+Mg2+ATP酶的含量及肝形态细胞学变化。结果川芎嗪治疗组肝组织MDA含量明显低于缺血再灌注组（P＜0.01），SOD，GSHPX，Ca2+Mg2+ATP酶的含量均明显高于缺血再灌注组（P＜0.01），肝细胞形态学异常变化明显减轻。结论川芎嗪能减少大鼠脂质过氧化，改善ATPase功能，减轻大鼠肠缺血再灌注所致肝脏损伤。
       关键词：川芎嗪；  肠缺血再灌注损伤；  小肠；  肝脏
       Protective Effects of Tetramethylpyrazine on Hepatic Damage Induced by Intestinal Ischemiareperfusion in Rats
       GAO Hui, RUAN Mingfeng, BAI Yuting, WAN Jingzhi
       (Department of Surgery, Medical School of Xianning College, Xianning  437100,China;  The First Affiliated Hospital of Xianning College，Xianning 437100,China)
       Abstract:ObjectiveTo explore the protective effects of tetramethylpyrazine on hepatic damage induced by intestinal ischemiareperfusion in rats. MethodsDivide the rats randomly into three groups: ⑴sham operated group, ⑵untreated ischemiareperfution(I/R) group, ⑶pretreatment with tetramethylpyrazine before I/R(Te). Superior mesenteric artery was clipped for 60 min to cause ischimia, and then unclipped to make reperfusion for 2 hours after reperfusion, the liver tissues were gathered and homogenized respectively, and the contents of SOD, GSHPX, MDA and ATPase,and morphological changes of hepatocytes were assayed.ResultsThe contents of MDA in liver in Te groups were less than that in I/R group （P＜0.01）,the contents of SOD,GSHPX and Ca2+,Mg2+,ATPase in Te groups were higher than those in I/R group（P＜0.01）,and the abnormal morphological changes of hepatocytes diminished remarkably. ConclusionTetramethylpyrazine can reduce lipid peroxidation, improve ATPase activity and decrease the injury of liver tissue in the rats after intestinal ischemiareperfusion.
       Key words:Tetramethylpyrazine;   Ischemiareperfusion injury;   Gut;   Liver
   
　　肠缺血再灌注（ischemiareperfusion，I/R）是机体遭受严重创伤、大手术、烧伤、感染等刺激后发生较早的病理过程之一，可引起肝、肾、肺等远隔器官的损伤［1］。目前认为，缺血再灌注损伤产生的机理主要与氧自由基大量生成导致组织器官脂质过氧化有关［2］。川芎嗪（Tetramethylpyrazine，TMP）是从川芎中提出的一种生物碱，具有解痉、扩管、降压等广泛的生物作用，主要应用于心血管疾病的治疗［3］。本研究旨在探讨川芎嗪对大鼠肠缺血再灌注肝损伤的保护作用，并探讨其可能机制。
       　　1  材料与方法
       1.1  药品及试剂川芎嗪注射液40 mg/2ml（无锡市第七制药有限公司生产，批号H32023383）。SOD，GSHPX，MDA，Ca2+Mg2+ATPase试剂盒均购自南京建成生物工程研究所。
       1.2  实验动物选用健康雄性Wistar大鼠24只，体重250 g，由咸宁学院动物室提供。随机分为3组。
       1.3  模型制备及动物分组10%水合氯醛（0.35 ml/100g）腹腔注射麻醉后，仰卧固定，取腹部正中切口，暴露肠系膜上动脉（SMA）用无损伤动脉夹夹闭其根部导致缺血，松夹即为再灌注，在各设定时相点经髂动脉取血并迅速放血致死，取肝左中叶组织匀浆，同时取少许肝左中叶组织行光、电镜观察。将24只大鼠随机分为3组，每组8只。①假手术对照组（sham）：仅暴露SMA而不夹闭，共3 h结束实验后取材；②缺血灌注组（I/R）：夹闭SMA 60 min后松夹2 h再取材；③川芎嗪治疗组（TMP）：夹闭SMA前15 min经舌下静脉注射川芎嗪（8 mg/kg）余同I/R组。
       1.4  指标测定SOD活性用邻苯三酚自氧化法检测［4］，MDA含量测定用改良硫代巴比妥酸（TBA）比色法测定［5］，5.5,二硫对二硝基苯甲酸（DTNB）比色法测定GSHPX［6］，定磷法测定Ca2+Mg2+ATP酶［7］。光镜检查：取肝组织经10%甲醛固定，石腊包埋切片，HE染色，观察切片。电镜检查：肝组织用生理盐水漂洗后2.5%戊二醛固定，送电镜室，经四氧化锇双固定，脱水、包埋、切片等操作后，在日立H600透视电镜下观察并拍片。
       1.5  统计学分析所有数据均以±s表示，组与组之间采用t检验。
       　　2  结果
       2.1  肝组织中SOD，GSHPX及MDA含量的变化大鼠肠缺血再灌注后肝组织SOD，GSHPX活性下降，而MDA含量明显上升，与假手术对照组比较有显著性差异（P＜0.01）。川芎嗪治疗组肝组织中MDA含量明显低于缺血再灌注组（P＜0.01），SOD，GSHPX的含量均明显高于缺血再灌注组（P＜0.01）。见表1。
       表1  各组大鼠肝组织SOD，GSHPX，MDA，Ca2+Mg2+ATP酶的测定结果（略）
       与假手术对照组比较，△P＜0.01；与缺血再灌注组（I/R）比较，*P＜0.01;n=8
       2.2  肝组织ATP酶活性变化大鼠肠缺血再灌注后肝组织Ca2+Mg2+ATP酶活性下降，与假手术对照组比较有显著性差异（P＜0.01）。川芎嗪治疗组肝组织中Ca2+Mg2+ATP酶活性明显高于缺血再灌注组（P＜0.01）。结果见表1。
       2.3  肝细胞形态学改变光镜下假手术对照组肝小叶正常，肝细胞索清晰，围绕中央静脉呈放射状排列；缺血再灌注组肝小叶结构正常，肝细胞水肿，肝窦淤血变窄；川芎嗪治疗组肝小叶结构正常，肝细胞索及肝窦排列整齐，未见肝细胞水肿。电镜下假手术对照组肝细胞器正常；缺血再灌注组肝细胞有空泡形成，线粒体肿胀，胞浆疏松化，部分肝细胞核固缩、变小；川芎嗪治疗组肝细胞损伤减轻，内未见空泡，线粒体稍肿胀。
       　　3  讨论
       肠缺血再灌注致肝损伤的机制尚不完全清楚，目前认为与内毒素、血小板激活因子、肿瘤坏死因子、前列腺素、补体、氧自由基、白三烯、粒细胞介导、钙超载和基因异常表达有关。自由基损伤是器官组织损伤尤其是肠缺血再灌注损伤的主要机制之一，因此拮抗自由基损伤对防治肠缺血再灌注致多器官损伤具有重要意义。本实验结果显示，大鼠肠缺血再灌注后肝组织SOD，GSHPX活性下降，而MDA含量明显上升，Ca2+Mg2+ATP酶活性下降，说明缺血再灌注损伤大鼠体内有大量氧自由机产生，内环境紊乱，造成肝组织的损伤。川芎嗪治疗组肝组织中MDA含量明显低于缺血再灌注组（P＜0.01），SOD，GSHPX，Ca2+Mg2+ATP酶的含量均明显高于缺血再灌注组（P＜0.01），提示川芎嗪能抑制脂质过氧化反应，提高ATP酶活性，稳定内环境，减少钙超载，这可能是川芎嗪对大鼠肠缺血再灌注后肝损伤有保护作用的主要机理，其具体机制有待进一步深入。
       　　参考文献：
       ［1］  杨  汉,金丽娟.库普弗细胞功能状态对肠缺血再灌注肝、脾、胸腺细胞凋亡的音响［J］.解放军医学杂志,1999,24(4):86.
       ［2］  Neil Granger D.Ischemia-reperfusion injury. Role of Oxygen-derived free radicals［J］.Axta physiol Scand,1986，126(548Suppl):47.
       ［3］  杨光田,王迪浔.实验动物复苏及缺氧时川芎嗪对心脑的作用［J］.中国急救医学,1997,17(1):7.
       ［4］  邓碧玉,彭勤生,李文杰.改良的连苯三酚自氧化测定超氧化物歧化酶活性的方法［J］.生物化学与物理进展,1991，18(2):163.
       ［5］  向  荣,王鼎年.过氧化脂质硫代巴比妥酸分光光度法的改进［J］.生物化学与生物物理进展,1990，17(3):241.
       ［6］  夏奕明,朱连珍.血和组织中谷胱甘肽过氧化酶活力测定［J］.卫生研究,1987，16(4):29.
       ［7］  Bradford MM.A rapid and sensitive method for the quantiation of microgram quantities of protein utilizing the principle of protein-dye binding［J］. Anal Biochem,1976，72:248.
       (咸宁学院医学院，湖北 咸宁  437100；  咸宁学院附属第一医院，湖北 咸宁  437100)