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       【关键词】  感清颗粒剂；,,黄芩苷；,,高效液相色谱法
       摘要：目的建立感清颗粒剂中黄芩苷含量的高效液相色谱法（HPLC）测定方法。方法采用日本岛津公司shimpack CLCODS柱（6.0 mm×150 mm），流动相为甲醇水磷酸（47∶53∶0.2），在280 nm波长处检测。结果黄芩苷在9.70 ～97.0 μg/ml范围内呈线性关系，r=1.000；平均加样回收率为101.2%，RSD=2.01% (n=5)。结论   该方法结果准确、重现性好，可用于测定感清颗粒剂中黄芩苷的含量。
       关键词：感清颗粒剂；  黄芩苷；  高效液相色谱法
       Determination of Baicalin in Ganqing Granules by HPLC
       ZHANG Xinjun,   LIANG Ruixue,    JIA Yuanyin  
       (Shandong Academy of Traditional Chinese Medicine, Jinan 250014，China)
       Abstract：ObjectiveTo establish a method for the determination of baicalin by HPLC in Ganqing Granules.MethodsShim-pack CLCODS column was used. The mobile phase was methanolwater H3PO4 (47∶53∶0.2). The detection wavelength was at 280 nm. ResultsThe linear range of Baicalin was 9.70～97.0  μg/ml ,r=1.000. The average recovery was 101.2%, RSD=2.01% (n=5).ConclusionThe result is accurate and the reproducibility is good. This method can be used for the determination of Baicalin in Ganqing Granules.
       Key words：Ganqing Granules;   Baicalin;   HPLC
   
　　感清颗粒主要由黄芩、柴胡等组成，具有疏风解表、化湿清热的功效。为控制其内在质量，对方中的黄芩苷进行了含量测定的研究。报告如下。
       　1  仪器与试药
       高效液相色谱仪：美国Water公司，检测器为Waters996二级管阵列检测器，泵Waters 600;色谱柱为日本岛津公司shimpack CLCODS柱（6.0 mm×150 mm）；超纯水:millipore公司纯水器；所用甲醇为色谱纯，其它试剂均为分析纯；黄芩苷对照品购于中国药品生物制品检定所，供含量测定用，批号为07159909。
       　2  方法与结果
       2.1  色谱条件与系统适用性实验色谱柱：用十八烷基硅烷键合硅胶为柱填充剂；流动相：甲醇水磷酸（47∶53∶0.2）；流速1.0 ml/min；检测波长280 nm；温度：室温；理论塔板数按黄芩苷峰计算应不少于2 000。
       2.2  供试品溶液的制备取本品适量，研细，取0.5 g，精密称定，加入硅藻土2 g，拌匀，置索式提取器中，加氯仿100 ml，回流提取2 h，取出，晾干，加甲醇100 ml，回流提取2 h，取下，放冷，滤过，并用少量甲醇洗涤容器及滤纸，将洗液合并于滤液中，并定量转移至100 ml容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
       2.3  对照品溶液的制备取60℃减压干燥4 h的黄芩苷对照品，加甲醇制成每毫升含60μg的溶液，作为对照品溶液。
       2.4  方法与专属性 按处方比例准确称取除黄芩以外的其它各味药材，模拟本品的制备工艺和供试品溶液的制备方法，制成缺黄芩空白溶液。分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液与缺黄芩空白溶液各10 μl，注入液相色谱仪，在280 nm处检测，结果表明黄芩苷对照品溶液和供试品溶液在该波长处均有最大吸收峰，而缺黄芩空白溶液在该波长处未见明显色谱峰出现，表明本测定无明显干扰。
       2.5  线性关系精密吸取浓度为194.0 μg/ml的黄芩苷对照品溶液0.5，1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 ml于10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，其浓度分别为9.70，19.4，38.8，58.2，77.6，97.00 μg/ml，精密吸取以上样品各10 μl，注入高效液相色谱仪，测得峰面积积分值，以峰面积积分值为纵坐标，黄芩苷进样量（μg/ ml）为横坐标，绘制标准曲线，结果进样量在9.70～97.0 μg/ml范围内线性关系良好。对所得数据进行回归分析得回归方程：y=32 553X-48 739，r=1.000。
       2.6  精密度实验精密吸取供试品溶液10 μl，连续进样5次，测定峰面积积分值，计算精密度，结果,供试品5次测定的RSD为0.35%(n=5)，表明精密度良好。
       2.7  稳定性实验精密吸取供试品溶液10 μl，每隔2 h进样测定1次，共进样测定5次，其峰面积积分值在测定时间8 h内基本不变，供试品5次测定的RSD为1.17%(n=5)，表明稳定性良好。
       2.8  重复性实验取同一批样品6份，按供试品溶液的制备方法，制成供试品溶液，并测定黄芩苷的含量，结果6次测定的平均含量为11.30mg/g，其RSD为1.11%（n=6），表明重现性良好。
       2.9  回收率实验取已知黄芩苷含量(11.13 mg/g)的样品0.25 g，共取5份，分别加入黄芩苷2.68 mg（配成浓度为1.34 mg/ml的溶液，准确加入2 ml），按以上方法测定样品中黄芩苷的含量，并计算回收率。结果平均加样回收率为101.2%，RSD为2.01%（n=5）。结果见表1。
       表1  添加法回收率实验结果（略）
       2.10  样品测定分别精密吸取对照品溶液与3批供试品溶液各10μl ，注入液相色谱仪，测定，并计算各批样品中黄芩苷的含量，结果见表2。
       表2  3批样品中黄芩苷的含量测定结果（略）
       　3  讨论
       《中国药典》中黄芩苷的含量测定采用的是70%的乙醇直接回流提取，在本标准中，鉴于剂型为颗粒剂（含挥发油），且颗粒中浸膏的量较大，辅料的量相对较少，为避免用70%乙醇提取的杂质太多而影响分离、缩短色谱柱的使用寿命，本标准中对其先用氯仿脱脂，再用甲醇提取。
       参考文献：
       ［1］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：248.
       (山东省中医药研究院，山东 济南  250014)