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       【关键词】  毛脉酸模；,,大黄素；,,大黄酚；,,时空分布
       摘要：目的研究毛脉酸模根茎、根头部、根中部、根尖部、剩余根的大黄素和大黄酚含量的时空分布规律。方法采用高效液相色谱法，测定其根中各个部位的大黄素和大黄酚的含量。结果该植物中的两种生物活性成分表现明显的季节变化，大黄素的含量波动范围为0.01%～0.3%，而大黄酚含量在0.05%～0.9%之间变化。但它们在空间上无显著差异。结论 该研究为寻找毛脉酸模的最佳采收期及最佳药用部位提供了理论依据和实践指导。
       关键词：毛脉酸模；  大黄素；  大黄酚；  时空分布
       Space-time Distribution Pattern of Emodin and Chrysophanol Content in Root of Rumex gmelini
       YUE Yunfei, WANG Zhen-yue*,WANG Qianbo, LI Ruiming, WANG Zongquan, WANG Jing
       (Heilongjiang Province Institute for Drug Control ,Harbin 150001，China; College of Pharmacy , Heilongjiang University of TCM , Harbin 150040 , China; Chinese Medical Center, Tasly R&D Institute Tianjin 300402,China)
       Abstract：ObjectiveThe paper deals with spacetime distribution pattern of emodin and chrysophanol content in rhizome, root head, root central, root tip, surplus root in Rumex gmelini. MethodsThe content of emodin and chrysophanol in the parts of root were determined by HPLC. ResultsThe two active constituents have changed obviously with different seasons. The extent of the content of emodin was from 0.01% to 0.3%.The extent of the content of chrysophanol was from 0.05% to 0.9%. But their spatial contents little effect.ConclusionThe study supplied basis of theory and direction of practice for searching the date of gathering and the parts of herb plant.
       Key words： Rumex gmelini Turcz;   Emodin;   Chrysophanol;   Space-time distribution
   
　　毛脉酸模Rumex gmelini Turcz.为蓼科（Polyonaceae）酸模属多年生宿根草本植物，广泛分布于黑龙江省大小兴安岭及张广才岭等地区，是黑龙江省、吉林长白山地区的重要药用资源植物。以根入药，味甘，性寒，有清热解毒、凉血止血、通便利尿之功，民间治疗癣病或止血著称［1，2］。 化学成分研究表明，毛脉酸模根中含有白藜芦醇、白藜芦醇苷、大黄素、大黄酚、大黄素甲醚、酸模素及黄酮等多种化合物［3～5］，其中蒽醌类成分具有抗炎、抗衰老、抗肿瘤、降压、抑制心肌运动的缺血等多种药理作用［6～8］。这些生物活性成分都是毛脉酸模的次生代谢产物。植物的次生代谢是植物长期适应环境变化而形成的代谢过程，这个过程不同于初生代谢，具有显著的种属、器官、组织以及发育时期特异性。同时，药用植物生物活性成分时空动态的分布规律研究近年来也倍受重视，成为了中药资源学研究领域的前沿和热点。但很少涉及到植物本身药用部位的时空变化，本文通过对毛脉酸模中大黄素、大黄酚含量与根的不同部位、时间关系的研究，探讨其生物活性成分在毛脉酸模根中的时空变化规律，为在适宜时间选择合适部位而获得高产量和高含量的毛脉酸模提供有利的理论基础和可行的生产方案。
       　　1  仪器与材料
       Agilent1100高效液相色谱仪，色谱柱：迪马 C18（200 mm×4.6 mm，5 μm），Mettler 电子天平AE 240（瑞士），DIKMA 微孔滤膜（0.45 μm），ZK-82B型真空干燥箱（上海市实验仪器总厂）。大黄素、大黄酚均由中国药品生物制品检定所提供，甲醇、乙腈为美国 Dikma公司产品，色谱纯；磷酸为分析纯；水为自制重蒸水。样品于2003年和2004年采自黑龙江中医药大学药用植物园（所有样品均由黑龙江中医药大学药学院生药教研室王振月教授鉴定）。
       　　2  方法
       2.1  样品处理采样方法为从每年的5月24日开始，每隔1个月采样1次，每年共采样5次，依次为5月24日、6月30日、7月30日、8月31日、9月30日。将采回样品的根分为根茎、根头部、根中部、根尖部、剩余根等几段（将主根平均分为3段，靠近根茎部分为根头部，间隔3~5 cm处为根中部，再间隔3~5 cm处为根尖部，其余的根及须根为剩余根）。
       2.2   色谱条件  色谱柱为迪马 C18柱；流动相为甲醇0.1%磷酸溶液（65∶35）；柱温40℃；流速1.0 ml/min；检测波长254 nm；进样量10 μl。
       2.3  对照品溶液的制备  精密称取大黄素对照品10.40 mg，置100 ml容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度。配成浓度为0.104 mg/ml的大黄素对照品溶液。精密称取大黄酚对照品12.40 mg，置100 ml容量瓶中，加甲醇溶解，并稀释至刻度。再精密量取5.0 ml, 加甲醇定容至10 ml。配成浓度为0.062 mg/ml的大黄酚对照品溶液。见图1。
       2.4  供试品溶液的制备  将上述样品置50℃干燥恒重后，粉碎成粉末（过100目筛），精密称取粉末0.2 g，置索氏提取器中，以70%乙醇为溶剂回流4 h，提取液回收至干，残渣用水溶解，过滤，滤渣和滤器用甲醇洗涤，将滤液和洗液合并，用甲醇定容至10 ml，作为供试品溶液。见图2。
       2.5  线性关系  分别取大黄素、大黄酚0.5，2，5，10，20 μl注入高效液相色谱仪中，以峰面积为横坐标，浓度为纵坐标作曲线。结果见表1。
       2.6   精密度实验  取同一份供试品溶液，连续进样5次，大黄素、大黄酚峰面积的 RSD值分别为1.24％，0.98％，表明精密度良好。
       1. 大黄素  2. 大黄酚
       图1  标准品HPLC色谱图(略)
       1. 大黄素  2. 大黄酚
　　
　　图2  样品HPLC色谱图(略)
       表1  大黄素、大黄酚的标准曲线(略)
       2.7  重复性实验  取同一样品粉末5份，每份精密称取0.2 g，按“2.3”制成供试品溶液，结果大黄素、大黄酚峰面积的RSD值分别为1.92%，2.27％，表明重复性良好。
       2.8   稳定性实验 取同1份供试品溶液，分别在0，2，6，18，24 h进样测试，结果大黄素、大黄酚峰面积的RSD值分别为3.25%，2.06%。表明该样品在24 h内稳定。
       2.9    加样回收率实验  取大黄素对照品11.40 mg，加甲醇溶解并稀释至100 ml，分别取0.6，1.0，1.4 ml各3份分别加入到9份样品中，按“2.3”制成供试品溶液，测定含量，计算加样回收率。结果见表2。实验结果表明，平均回收率为99.42%，RSD为1.3%。
       表2  加样回收率实验结果(略)
       　　3  结果
       3.1  毛脉酸模根中大黄素含量的时空变化规律  如图3所示，毛脉酸模根茎、根头部、根中部、根尖部、剩余根中的大黄素的含量在200305～200310期间变化不大，都在0.01%～0.1%范围内波动，从5月末含量逐渐上升，8月初达到最高，而后又逐渐下降，9月末含量最低。而在200405～200410期间根的各个部位中大黄素的含量变化较大，波动范围在0.01%～0.3%。在此生长时期中基本呈递增的趋势，只是在9月初时略有下降。各个部位中大黄素的含量在整个时期中均无明显差异。但是在2004年的含量要明显高于2003年的含量。这主要是由于生物活性物质的合成和积累所造成的。
       3.2  毛脉酸模根中大黄酚含量的时空变化规律  从图4可以看出，毛脉酸模根茎、根头部、根中部、根尖部、剩余根中的大黄酚的含量的变化规律与大黄素完全一致，只是变化的幅度不一样，波动范围为0.05%～0.9%。
       图3  毛脉酸模根中大黄素含量的时空变化图(略)
       图4  毛脉酸模根中大黄酚含量的时空变化图(略)
       　　4   讨论
       植物的基础代谢与次生代谢是处于交替开放变化过程中的，生物活性物质的这种不断的波动变化是一种正常的生理过程。毛脉酸模根的各部位中的大黄素和大黄酚含量表现出明显的季节变异，总体上是每年处于逐渐上升的趋势，并且20040510间的含量高于2003年，呈现了年际的递增趋向。这可能是由于毛脉酸模在生长的高峰期，光合同化产物集中供给植物营养生长和生殖生长的需要，造成次生代谢物的底物不足，使次生代谢物的合成途径受到影响，合成速率减慢，表现出次生代谢产物的含量低的缘故。环境影响着药用植物的生长和化学物质的形成与变化，因此植物不同部位的次生代谢产物的含量存在着差异性，也就是具有空间异质性。但是毛脉酸模根茎、根头部、根中部、根尖部、剩余根中大黄素和大黄酚含量无显著的差异，可能是由于该植物根的各个部位所处的土壤的含水量、pH值、肥力状况以及所含的微量元素相似所致。
       　　参考文献：
       ［1］  刘慎谭. 东北草本植物志, 第2卷［M］. 北京: 科学出版社 , 1959：24.
       ［2］  吉林省中医中药研究所. 长白山植物药志［M］.吉林：人民出版社 , 1982：299.
       ［3］  王振月, 李延冰, 匡海学, 等. 毛脉酸模中大黄酚、大黄素的分离鉴定［J］.中医药学报, 1996 , 24(2)：54.
       ［4］  王振月, 蔡学勤, 康毅华, 等. 毛脉酸模中两个化合物的结构研究［J］.中草药, 1996, 27 (12): 714.
       ［5］  王振月, 左月明, 康毅华, 等. 毛脉酸模的化学成分的研究（Ⅱ）［J］.中草药, 2005, 36(11)：1626.
       ［6］  杨雪琼, 邹永明, 叶静茹, 等. 蓼属植物的化学成分［J］. 云南化工, 2003, 30(1): 31.
       ［7］  杨崇德, 张秀贤. 大黄素的药理研究进展［J］.中国药业, 2003, 12(3): 78.
       ［8］  王林丽, 徐梦雪. 芦荟药理作用及临床研究进展［J］.中国药业, 2003, 12(8): 70.
       基金项目：国家自然科学基金资助项目(NO.30270156)
       (黑龙江省药品检验所，黑龙江 哈尔滨  150001；黑龙江中医药大学， 黑龙江 哈尔滨  150040；天士力集团 现代中药研究所，天津  300402)