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       【关键词】  蛇床子素；,,气相色谱法,
       摘要：目的建立完善的气相色谱测定蛇床子素含量的方法。方法首先采用柱层析的方法对样品进行预处理，分离蛇床子提取物中的甘油三酯，并结合红外和核磁图谱验证；然后采用DB5色谱柱，外标法测定蛇床子素的含量。结果经过预处理的样品在该条件下测定蛇床子素，线性范围好，r=0.999 7； 回收率为97.97%~102.4%；RSD为1.09%（n=5）。结论该方法简便、准确度高，重现性好。
       关键词：蛇床子素；  气相色谱法
       The Determination for the Osthole of the Extracts  from Fructus Cnidii by the Gas Chromatography
       ZHANG Xiaoxia， ZHOU  Maoxing*， ZHANG Gaoyong，GONG Zhuyun， NIE Yongliang
       (China Institute of Daily Chemical Industry,Taiyuan 030001,China)
       Abstract：Fructus cnidii was isolated from the fruits of Cnidium Monnieri(L.) Cusson ,which is a useful traditional Chinese herb. Osthole, a chemical principle isolated, was determined and quantitatively analysed by the capillary gas chromatography. The method of column chromatography with silica-gel as the stationary phase was employed for the separation of triglyceride from the extracts. The fraction was verified by IR and NMR. The GC-9A system consisted of DB-5 column could be applied for the determination for the osthole. External standard method was used for quantitative analysis. The results showed that the linear range of the standard curve was good(r=0.999 7). The recovery rate was between 97.97% and 102.4%, and RSD was 1.09%(n=5). This method is simple,easy and reliable. It also has good repeatability and sensibility.
       Key words：Osthole;   Gas Chromatagraphy 
   
　　蛇床子Fructus Cnidii，为伞形科蛇床属植物蛇床Cnidium monnieri(L.)Cusson的干燥成熟果实，具有散寒、祛风、燥湿、杀虫、止痒等功能［1］。蛇床子中的有效成分为蛇床子素，常用的分析方法包括薄层扫描法［2］、高效液相色谱法［3］和气相色谱法［4］。其中，采用气相色谱法测定蛇床子素时，样品均采取直接进样的方式，然而蛇床子提取物中含有甘油三酯等油脂成分，甘油三酯分子量大,沸点高,测定中很难流出，因此，如果不在测定前去除甘油三酯，会在色谱柱中积聚甚至造成测定时鬼峰的出现，从而影响分析结果的准确性。本文首先采用柱层析的方法对蛇床子提取物进行了预处理，分离去除了甘油三酯，然后用外标法测定了蛇床子素的含量。现将结果报道如下。
       　　1  材料与方法
       1.1  仪器GC9A气相色谱仪,带火焰离子化检测器(FID)及CR3A数据微处理机（日本岛津公司）；ESJ20型电子天平（沈阳龙腾电子称重仪器有限公司）；27030型红外光谱仪（日本日立公司）；DRX300型超导核磁共振仪（瑞士布鲁克公司）；层析柱（自制Φ=15 mm, h=300 mm）。
       1.2  药品与试剂蛇床子素对照品（广州合成三先生物科技有限公司）按本实验方法测定，经归一化计算含量为98% ；蛇床子（武汉天惠生物有限公司）；硅胶(青岛海洋化工厂；80~100目，使用前于120℃烘5 h)；石油醚（沸程30~60℃）、苯、丙酮、95%乙醇均为分析纯。蛇床子提取物为超临界CO2萃取物（自制）。
       1.3  色谱条件色谱柱:DB5石英毛细管柱（30 m×0.32 mm）；检测器:FID；柱温采用程序升温：初始温度为80℃，保持2 min后以5℃/min的速率升至310℃，恒温8 min；检测室与进样口温度∶320℃；载气：He；流速：30 ml/min；分流比30∶1；进样量：1μl。
       1.4  方法将蛇床子提取物经柱层析处理后，精密称取适量于50 ml容量瓶中，用丙酮溶解并稀释至刻度，按1.3色谱条件测定蛇床子素的含量。图1~2分别为蛇床子素标样及样品的气相色谱图。 
       图1  蛇床子素的标准色谱图(略)   
       图2  样品的色谱图(1∶蛇床子素)(略)
       　　2  结果
       2.1  样品预处理
       2.1.1  柱层析分离条件的选择硅胶是一种微酸性的吸附剂，吸附活性比氧化铝稍低，可用于分离大多数弱极性、中等极性和较强极性的化合物。本实验中，被分离的甘油三酯极性很弱，故选用硅胶为吸附剂。展开与洗脱是色谱分离的关键操作。参考各种有机溶剂的溶解度参数和它们在硅胶上的吸附强度参数［5］以及柱层析分离甘油酯混合物（黎顺兰，吴伯涛.油脂及其衍生物的标准分析方法.粮食部陕西油脂科学研究所，内部资料，1981：140.），本实验选用石油醚、苯、95%乙醇为洗脱剂。多次实验结果表明：分别采用石油醚、石油醚∶苯=20∶80（体积比）和95%乙醇梯度洗脱，可以将石蜡和甘油三酯从蛇床子提取物中分离（图3为蛇床子提取物的柱层析淋洗曲线）。从图中可以看出，经过柱层析，石油醚洗脱出了石蜡，石油醚∶苯=20∶80（体积比）洗脱出了甘油三酯，可以从样品中完全分离，避免了油脂在柱中的积聚，保护了色谱柱，同时避免了测量中鬼峰的出现。然后将95%乙醇洗脱出的馏分进行气相色谱分析。样品总回收率在99%以上。
       图3  蛇床子提取物的淋洗曲线(略)
       2.1.2  馏分分析将柱层析中石油醚：苯=20∶80（体积比）洗脱出的馏分分别用红外光谱和核磁共振氢谱鉴定，图谱分别见图4、图5。
       图4  馏分的红外光谱图(略)
       图5  馏分核磁共振氢谱(略)
       图4中1 740 cm1为酯的羰基的特征吸收峰，1 170 cm1处的峰为酯的吸收峰。2 920，2 850，1 460 cm1和1 380 cm1处的峰表示分子中有甲基和亚甲基，720 cm1处的峰表示分子中有直链的亚甲基链，而大于3 000 cm1无吸收峰，证明不存在羟基，表现为甘油三脂肪酸酯的特征。图5中各基团上的化学位移分别为:烷烃链上δ0.87 (CH3),δ1.24(CH2),δ1.60(OCOCCH2),δ2.30(OCOCH2C), 甘油上δ4.10(OCH2CCH2O),δ5.3(OCCHCO)。其核磁谱图与甘油三脂肪酸酯的谱图大体一致。综合以上信息，可确认该馏分为甘油三脂肪酸酯。
       2.2  线性关系考察精密称取0.110 4 g蛇床子素对照品于50 ml容量瓶中，用丙酮溶解并稀释至刻度，精密移取一定量，用丙酮配制成含蛇床子素0.187 8，0.344 4，0.489 5，0.638 2，0.815 6，0.992 3 mg/ml的系列标准溶液，用微量注射器吸取1 μl进行气相色谱分析。以峰面积积分值为纵坐标，对照品浓度为横坐标进行线性回归，得回归方程y=21 983.88+111 670.15x，相关系数r=0.999 7。结果表明，样品在此浓度范围内具有良好的线性关系。
       2.3  方法精密度实验取同一批样品，精密称取5份，按本实验方法分别测定蛇床子素的含量,相对标准偏差为1.09%,表明方法精密度良好。
       2.4  加标回收率实验精密称取已知含量的蛇床子提取物样品，分别加入一定量的蛇床子素标准物质，按本实验方法进行测定结果见表1。回收率为97.97%~102.4%。
       表1  回收率测定结果(略)
       2.5  样品测定精密称量各蛇床子提取物2.5 g，经过柱层析分离甘油三酯，然后按本实验方法进行气相色谱分析，最后再核算出原蛇床子提取物中蛇床子素的含量。结果见表2。
       表2  样品中蛇床子素的含量(略)
       　3  讨论
       采用柱层析的方法分离蛇床子提取物中的甘油三酯，避免了油脂在柱中的积聚，起到了保护色谱柱的作用，同时也避免了分析测定中鬼峰的出现，从而使得该方法在测定蛇床子素时，具有简便、快速、准确，重现性好等特点，有一定的实用价值。
       　参考文献：
       ［1］  中国医学科学院药物研究所.中药志，第3册［M］.北京：人民卫生出版社，1984：593.
       ［2］  中华人民共和国卫生部药典委员会.中国药典［S］.广州：广东科技出版社，1995：276.
       ［3］  T.H.Tsai; Pharmacokinetics of osthole in rat plasma using high-performance liquid chromatography［J］.Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis ,1996,14:749.
       ［4］  高  海，孙文基，沙振方.毛细管气相色谱法测定蛇床子中蛇床子素和欧前胡素的含量［J］.药物分析杂志，1991，11（6）：360.
       ［5］  达世禄.色谱学导论［M］.武汉：武汉大学出版社，1999：254.
       基金项目：山西省高级专家资助项目（No.204512）
       (中国日用化学工业研究院，山西 太原  030001）