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       【关键词】  三叶委陵菜；,,带状疱疹；,,病毒
       关键词：三叶委陵菜；  带状疱疹；  病毒
       三叶委陵菜根为蔷薇科植物三叶委陵菜（学名Potentilla freyniana Borum）的根，别名地蜂子根，具有清热利湿、止痛补虚的功效［1］。长期以来，浙江民间将三叶委陵菜根用于治疗骨髓炎、外伤出血蝮蛇咬伤等。研究发现三叶委陵菜根在细胞培养中有抑制带状疱疹病毒的作用。结果如下。
       　　1  材料与方法
       1.1  材料三叶委陵菜根，采自湖北恩施州； 病毒，带状疱疹病毒为武汉大学医学院病毒研究所保存；细胞，人胚肺细胞(HEL)购自中国预防医学科学院病毒学研究所，细胞纯化用含10％小牛血清的MEM培养基，常规加入100 μg/ml的青霉素和100 μg/ml的链霉素。
       1.2  药物提取及纯化
       1.2.1  提取取干三叶委陵菜根（自然干燥）2 kg，切碎，加65％乙醇水浴回流提取3次，2 h/次，合并提取液，回收乙醇至浸膏。
       1.2.2  除杂配制5％的明胶水溶液500 ml，搅拌加入到浸膏中，然后继续在搅拌下加入95％乙醇3 L,持续搅拌4 h，静置，过滤，收集滤液并浓缩。
       1.2.3  萃取将除杂后得到的浓缩液拌入适量粗孔硅胶（硅胶量约为浓缩液的1/4），用醋酸乙酯在索氏提取器中进行萃取［2］，直到醋酸乙酯萃取液呈无色为止。
       1.2.4  纯化合并并浓缩醋酸乙酯萃取液至浸膏，拌入适量粗孔硅胶，于水浴上蒸干剩余溶剂，研磨成粉并上硅胶柱，用氯仿和甲醇进行梯度洗脱，收集、合并相近流份，回收溶剂，浓缩蒸干得到纯化产物。
       1.3  病毒实验
       1.3.1  药物的细胞毒作用将已长成单层的HEL细胞（0.7×105/ml），加入含不同浓度的药物培养基，37℃培养基24 h后，加入中性红染色，并在550 nm波长下读数（OD值）。计算活细胞数。
       1.3.2  抗病毒实验在24孔培养板上，加入已长成单层的HEL细胞（0.7×105/ml），37℃培养24 h后，加入100TCID50/0.1 ml的带状疱疹病毒，吸附1.5 h后，加入含药培养基，置5％CO237℃培养5~7 d，记录结果，同时设正常对照（不加药物，也不加病毒）、病毒对照（病毒攻击细胞后不加药物）和药物对照（以同抗病毒研究组不同浓度的药物处理细胞，不加病毒）。药物的抗病毒作用以两个指标观察。一是检查病毒感染细胞的细胞病变效应（CPE）。如果病毒感染细胞出现CPE，表示药物不能抑制病毒生长，或者说药物无抗病毒作用。反之，如果病毒感染细胞无CPE出现，表示药物能抑制病毒生长，或者说药物 有抗病毒作用。另一指标是测定病毒的感染性滴度，按ReedMueuch法计算，同时计算出抗病毒指数。药物的抗病毒指数等于药物治疗组病毒的感染性滴度除以病毒对照的病毒感染性滴度。
       　　2  结果
       2.1  三叶委陵菜根有效成分分析在确定了醋酸乙酯萃取物有抗带状疱疹病毒作用后，我们对其进行了定性研究。结果根据分离过程观察和初步结构鉴定，表明三叶委陵菜根乙醇提取物醋酸乙酯萃取部分的主要成分为三萜类化合物［2］。
       2.2  药物的细胞毒作用药物对细胞的毒性表现为细胞折光性改变，壁厚，变圆，破碎，脱落，并且吸光值(OD值)下降。待测药物和阳性对照药（阿基洛韦）对细胞的半数毒性浓度分别为500μg/ml和105μg/ml。
       2.3  药物的抗病毒作用不同浓度的药物对病毒的抑制作用见表1。
       　3  讨论
       带状疱疹是中老年人群中常见疾病。由于病毒感染后，在神经节中潜伏，且易复发［3］，患者往往病情较重，特别是疼痛加剧。另外，由于病毒易产生抗药性，使得阿基洛韦的应用受到限制［4］。因此，寻找抗带状疱疹病毒药物是抗疱疹病毒化疗的主要研究目标之一。
       表1  三叶委陵菜根对带状疱疹病毒的抑制作用（略）
       从实验结果可知，三叶委陵菜根乙醇提取物醋酸乙酯萃取物有抗带状疱疹病毒作用，表现在药物浓度增加，抗病毒指数增加，病毒感染性下降，显示量效关系。与阳性对照药物比较，有类似的抗病毒作用。三叶委陵菜根在300 μg/ml时，抗病毒效率与80 μg/ml的阳性对照药物相似。经过初步分离及鉴定可知三叶委陵菜根乙醇提取物醋酸乙酯萃取物主要化学成分为三萜类化合物，如β谷甾醇、齐墩果酸等，进一步的分离及结构鉴定正在实验中。据此我们可以推断出，实验要找的对带状疱疹病毒有抑制作用的有效化合物，很可能就在三叶委陵菜根乙醇提取物醋酸乙酯萃取液部分。实验对药物的进一步研究和应用提供了依据，缩小了寻找药物有效成分的范围，基本确定有效成分的结构类型为三萜类［5］化合物结构。
　　
　　参考文献：
       ［1］  江苏新医学院.中药大辞典［M］.上海：上海科学技术出版社，1992:70.
       ［2］  黄书铭，杨新林，张自强，等.超声循环提取灵芝中三萜类化合物的研究［J］.中草药，2004，35（5）：508.
       ［3］  董  岩，张美芳，徐汉卿，等.菊流浸膏对感染水痘带状疱疹病毒动物的免疫机理研究［J］.中华微生物学和免疫学杂志，2002，22（4）：414.
       ［4］  李宏珍，侯凤英.带状疱疹病毒与中枢神经系统感染［J］.锦州医学院学报，1997，18（2）：62.
       ［5］  许旭东，张聿梅，杨峻山 ，等.安徽木中三萜类化学成分的研究［J］.中国中药杂志，1998，23（12）： 733.
       (华中科技大学化学系，湖北 武汉  430074；  武汉大学医学院病毒研究所，湖北 武汉  430074)