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       【关键词】  炮制；,,薯蓣皂苷元；,,高效液相色谱法
       摘要：目的用高效液相色谱（HPLC）法测定胡芦巴不同炮制品中薯蓣皂苷元的含量。方法HPLC法，分析柱为C18柱（ODS 5μm ， 4.6 mm×250 mm），乙腈水（87∶13）为流动相，检测波长203 nm。结果薯蓣皂苷元进样在1.558~15.58μg之间线性关系良好，r=0.999 9。平均加样回收率为98.55%，RSD=2.2%。结论胡芦巴随炮制程度的加深其化学成分及其含量都发生了变化。
       关键词：炮制；  薯蓣皂苷元；  高效液相色谱法
       Study on Quality of Different Preparation of the Semen Trigonellae
       YANG Yun， YAN Hongmin， SUN Weiying
       (Henan College of Traditional Chinese Medicine,Zhengzhou 450008,China;   Henan Hospital of Geosciences,Zhengzhou 450000,China)
       Abstract：ObjectiveHPLC was used to determine the contents of diosgen of the different Preparation of the Semen Trigonellae.MethodsHPLC，the column was C18 column (ODS 5μm ， 4.6 mm×250 mm).The mobile phase consisted of acetonitrile-water (87:13).The determination wavelength was 203 nm. ResultsThe linear range of diosgen was good from 1.558 to 15.558 μg, r=0.999 9.The average recovery was 98.55%(RSD=2.2%).ConclusionThe Semen Trigonellae changed, the contents and the kind of chemical materials were from the semen Trigon changed with varianc of the process.
       Key words：Process ;  Diosgen ;   HPLC
   
　　胡芦巴为豆科植物胡芦巴Trigonella foenum-gracum L.的干燥成熟种子，具有温肾阳、逐寒湿、止痛的功效。2005版《中国药典》（以下简称《药典》）收载的胡芦巴炮制品有葫芦巴和盐胡芦巴，胡芦巴生用可发挥散寒逐湿功效，用于寒湿脚气、腿脚疼痛、行走无力；经盐水炒后，增强了温肾阳、逐寒湿的功效，用于疝痛、腰痛,同时，加热使共存酶大部分遭到破坏，减少苷类化合物的酶解，另外，芦巴子经炒后，种子内膨胀，种皮爆破，变得疏松，易粉碎，有效成分容易煎出［1］。本实验研究的目的在于：虽然2000年或2005年版《药典》对胡芦巴中胡芦巴碱的含量测定以及检识作出了规定，但是对于有效成分之一的皂苷类化合物的检测未能作出指导性的规定，本实验通过对胡芦巴不同炮制品中的薯蓣皂苷元定性定量研究，为胡芦巴质量控制和指纹图谱的绘制作了初步的探索，为胡芦巴饮片加工与规范化炮制提供部分参考数据。
       　　1  仪器及试药
       1.1  仪器SHIMADZU高效液相分析仪：CLASSVP工作站；紫外检测器：LC2010AHT；BS210S型电子天平（北京塞多利斯公司）；METTLER AE240电子分析天平（瑞士）。
       1.2  试药胡芦巴药材来源：河南省药材公司（产地：河南），经本校生药实验室陈随清教授鉴定为豆科植物胡芦巴Trigonella foenum-gracum L. 的干燥成熟种子；薯蓣皂苷元对照品（供含量测定用）：中国药品生物制品检定所(批号：1539200001)；乙腈为色谱纯（江苏百林），水为双效蒸馏水，其它试剂均为分析纯。
       　　2  方法与结果
       2.1  样品制备
       2.1.1  生品除杂、净制、干燥，即得。
       2.1.2  炒胡芦巴依照《药典》2005年版Ⅰ部炮制通则清炒法要求进行［2］。
       2.1.3  盐胡芦巴依照《药典》2005年版Ⅰ部盐水炙法（附录IID）炒至鼓起，有香气［2］。
       2.2  含量测定
       2.2.1  色谱条件 色谱柱为大连伊利特Hypersil ODS2 5μm柱（ID4.6 mm×250 mm）；流动相，乙腈∶水（87∶13）；流速1.0 ml/min；检测波长203 nm；柱温30℃；进样量20 μl。
       2.2.2  对照溶液制备  精密称取薯蓣皂苷元对照品，加无水乙醇制成对照品溶液浓度为0.779 mg/ml，薯蓣皂苷元标准品的保留时间为18.458 min。
       2.2.3  供试品溶液制备取胡芦巴药材，粉碎，过40目筛，60℃恒温干燥至恒重，精密称定约1 g，加30 ml石油醚超声脱脂两次，30 min/次。  挥干石油醚后60℃干燥3 h，加30 ml 80%乙醇回流提取两次，3 h/次，回收乙醇，残渣加30 ml 5%硫酸80%异丙醇水溶液于90℃水浴中水解4 h，加适量40%NaOH溶液调至中性，并加适量水溶解生成的硫酸钠，用石油醚萃取，15 ml/次，萃取6次。回收石油醚至干，残渣用无水乙醇溶解，定量转移到10 ml容量瓶中，定容，摇匀。微孔滤膜（0.45μm）滤过，作为供试品溶液［3］。
       2.2.4  标准曲线绘制将薯蓣皂苷元对照品，分别进样2，4，6，8，10，20 μl，以浓度为横坐标、以峰面积为纵坐标绘制标准曲线，得回归方程为Y=4.817×105X+5.309×104，在1.558 ~15.558 μg之间有良好的线性关系， r=0.999 9。
       2.2.5  精密度实验 精密吸取对照品溶液各20 μl，重复进样5次，记录峰面积，其RSD为1.39%，表明精密度良好。
       2.2.6  重现性考察 取生品，按照“供试品溶液制备”项下平行制备6份，测得含量分别为： 4.718，4.764，4.725，4.712，4.739，4.722 mg/g，平均含量为4.730 mg/g，RSD=1.89%。
       2.2.7  加样回收实验精密称取含量已知的样品1g，共6份，脱脂后分别加入薯蓣皂苷元对照溶液适量，按照"供试液制备"项脱脂后的方法进行提取测定，平均加样回收率为98.55%，RSD为2.2%。
       2.2.8  样品测定  分别精密吸取对照品溶液及供试品溶液各20μl，HPLC法测定，外标两点法计算含量。结果见表1。图1中的①②③分别为生品、炒胡芦巴、盐胡芦巴的HPLC图谱，从中可以看出3种样品的峰形峰数大致相同，其中1号峰为薯蓣皂苷元峰，3个样品中都有此峰。而胡芦巴生品中没有2号峰，可以判定2号峰为新生物质峰，可能是炮制过程中胡芦巴中某些化学成分分解所致。
       表1  三种胡芦巴炮制品薯蓣皂苷元含量测定结果（略）
       图1  3种胡芦巴炮制品HPLC图谱（略）
       　　3  讨论
       由于胡芦巴含有大量的脂肪油，在含量测定前应进行脱脂以减少干扰。而薯蓣皂苷元易溶于极性小的有机试剂，如果有游离薯蓣皂苷元的存在必然给含量测定带来误差。在实验过程中，对胡芦巴脱脂液进行了定性鉴别，结果没有检测到薯蓣皂苷元，说明在胡芦巴中没有游离薯蓣皂苷元或含量极低。因此，脱脂过程对含量测定准确性未产生影响，同时在进行加样回收实验时，脱脂后加对照品溶液是合理的、科学的。如果在脱脂前加入对照品溶液将导致回收率偏低，甚至回收率为零。实验发现，胡芦巴随炮制程度的加深薯蓣皂苷元的含量有明显的下降。因此可以通过测定薯蓣皂苷元的含量控制胡芦巴炮制品质量以及规范化葫芦巴的炮制工艺。
       　　参考文献：
       ［1］  马兴民.新编中药炮制法（增订本）［M］. 西安：陕西科学技术出版社，1980：8.
       ［2］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：1.
       ［3］  鲁鑫焱，赵怀清，王学娅，等.不同产地胡芦巴中薯蓣皂苷元的含量比较［J］.中药材，2004，37（7）：499.
       (河南中医学院，河南 郑州  450008；  河南地质医院，河南 郑州  450000)