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       【关键词】  丹参酮ⅡA；,,高效液相色谱；,,丹参；,,大黄；,,槐米；,,制首乌；,,薄层色谱
       摘要：目的建立通脉活血灵胶囊的质量标准。方法建立丹参、槐米、大黄、制首乌的薄层鉴别方法和丹参酮ⅡA的含量测定方法。结果在薄层(TLC)色谱中检出丹参、槐米、大黄、制首乌，阴性对照无干扰。丹参酮ⅡA的线性范围为0.080 5~0.402 4 μg（r = 0.999 8），平均回收率为101.00%，RSD=1.43%。结论 定性定量方法简便、准确，专属性强，重现性好，能有效地控制该制剂的质量。
       关键词：丹参酮ⅡA；  高效液相色谱；  丹参；  大黄；  槐米；  制首乌；  薄层色谱
       Study on Quality Standard for Tongmai Huoxue Ling Capsules
       HAO Na， LI Lanfang， ZHANG Qinzeng，ZHANG Jianwu，XUE Baojuan
       （Hebei Academy of Medical Science,Shijiazhuang 050021,China;Hebei Medical University of TCM ,Shijiazhuang 050000,China）
       Abstract：ObjectiveThe quality standard for Tongmai Huoxueling capsules were studied．MethodsThe TLC method for identification of Przewalsk Sage Root，Rhubarb，Pagodatree Flower Bud ，Fleeceflower Root in these capsules were established．The tanshinoneⅡA was determined by HPLC．ResultsPrzewalsk Sage Root， Rhubarb，Pagodatree Flower Bud ，Fleeceflower Root could be detected by TLC．TanshinoneⅡA showed a linear relationship at the concentration range of 0.080 5~0.402 4 μg(r=0.999 8)．The average recovery was 101.00% with RSD=1.43%(n=3)．ConclusionThis method is suitable for the quality control of  Compound Tongmai Huoxueling Capsules．
       Key words：TanshinoneⅡA；  HPLC ；  Przewalsk Sage Root ；  Rhubarb ；  Pagodatree Flower Bud ；  Fleece flower Root；   TLC
   
　　通脉活血灵胶囊由丹参、槐米、大黄、制首乌等药材组成，功能为温经通络，活血化瘀。药理实验证明具有降低血液粘度，调节血脂预防动脉硬化的功效［1~3］。在临床上用于治疗高粘血症有很好的疗效［4］。为了有效地控制其质量，我们对丹参、槐米、大黄、制首乌等进行薄层色谱鉴别。处方中丹参为君药，丹参酮ⅡA是通脉活血灵胶囊的主要有效成分之一。本研究在定性鉴别的基础上，用HPLC法 测定通脉活血灵胶囊中丹参酮ⅡA含量。
       1  器材
       1.1  仪器 Aglient 1100 高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）；UV2100分光光度计（日本岛津）；KQ250DB型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；旋转蒸发器（上海亚荣生化化工厂）；匀浆器（贝尔德仪器技术厂）；939薄层制板器（重庆市南岸贝尔德仪器技术厂）；硅胶G（青岛海洋化工厂，化学纯，批号：81852500）。
       1.2  药材丹参酮ⅡA（批号：766200213）、芦丁（批号：100080200306）、丹参对照药材、大黄对照药材、制首乌对照药材均由中国药品生物制品检定所提供；通脉活血灵胶囊（河北省医学科学院药物研究室研制）。 
       　　2  方法与结果
       2.1  定性鉴别
       2.1.1  丹参鉴别  取通脉活血灵胶囊内容物2.5 g，丹参对照药材2 g，丹参的阴性提取物2.5 g，分别加入10 ml乙醚，置于具塞试管中振摇，放置1 h，滤过，滤液水浴挥干，残渣加醋酸乙酯1 ml使溶解，作为供试品溶液，丹参对照药材溶液，丹参阴性供试品溶液。取丹参酮ⅡA对照品加入醋酸乙酯，制成2 mg/ml的对照品溶液。照薄层色谱法［5］实验。吸取上述4种溶液10 μl分别点于同一硅胶G板上，以苯醋酸乙酯（19∶1）为展开剂，展距10 cm，取出晾干，日光下检视，通脉活血灵胶囊供试品色谱与对照药材色谱、对照品色谱相应的位置上，显相同色度的橙红色斑点，而丹参阴性供试品在相应的位置无此斑点，以此鉴别丹参见图1。
       1.阴性对照   2.丹参对照药材  3.样品溶液  4.丹参酮ⅡA
       图1  丹参薄层色谱图 （略）
       2.1.2  槐米鉴别 取通脉活血灵胶囊内容物2.5 g，槐米的阴性提取物2.5 g，分别加入甲醇50 ml，密塞，超声提取（30℃，30 min，功率80Hz），取出，放冷，滤过，滤液用旋转薄膜蒸发仪真空减压浓缩至干，再分别加入5 ml甲醇溶解，即得供试品溶液，槐米阴性供试品溶液。取芦丁对照品加入甲醇，制成0.2 mg/ml的对照品溶液。照薄层色谱法［5］实验吸取上述3种溶液各10μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯甲酸水(8∶1∶1)为展开剂，展距10 cm，取出，晾干，置于碘蒸气中熏1 min后取出［6］。在日光下检视，通脉活血灵胶囊供试品色谱在与对照品色谱相应的位置上，显相同色度的棕黄色斑点，而槐米阴性供试品在相应的位置无此斑点，以此鉴别槐米见图2。
       2.1.3   制首乌及大黄鉴别 取通脉活血灵胶囊内容物2.5 g，大黄对照药材2 g，大黄的阴性提取物2.5 g，制首乌的阴性提取物2.5 g，分别加甲醇40 ml，浸渍1 h，滤过，取滤液5 ml，加水10 ml混匀，加盐酸1 ml，置水浴上加热30 min，立即冷却，加入乙醚20 ml提取2次，合并乙醚液，蒸干，残渣加氯仿2 ml使溶解，作为通脉活血灵胶囊供试品溶液，大黄对照药材溶液，大黄阴性供试品溶液，制首乌阴性供试品溶液。取制首乌对照药材2 g，用95％乙醇50 ml超声提取（30℃，30 min，功率80 Hz），滤过，滤液浓缩至3 ml，作为制首乌对照药材溶液。照薄层色谱法［5］实验。吸取上述5种溶液各10 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚（30～60℃）甲酸乙酯甲酸（15∶5∶1）的上层液为展开剂，展距15 cm，取出晾干，以于紫外365 nm荧光灯下检视，通脉活血灵胶囊供试品色谱与大黄对照药材色谱比较在蓝色背景下显相同色度的5个橙黄色斑点，而大黄阴性供试品在相应的位置无此斑点；与制首乌对照药材色谱比较在蓝色背景下相应位置显相同色度的2个橙黄色斑点，而制首乌阴性供试品在相应的位置无此斑点，以此同时鉴别大黄和制首乌见图3。
       1.阴性对照   2.样品溶液  3.芦丁对照品
　　
　　图2   芦丁薄层色谱图 （略）
       1.大黄阴性对照   2样品溶液  3 .大黄对照药材4.制首乌对照药材  5.大黄酚对照品  6.大黄素对照品
       图3   大黄、制首乌薄层色谱图 （略）
       2.2  丹参酮ⅡA的含量测定
       2.2.1  色谱条件与系统适用性实验［7,8］色谱柱：SBC18（250 mm ×4.6 mm，5μm）；流动相：甲醇水（8∶2）；使用前以0.45 μm微孔滤膜减压滤过，检测波长为270 nm；流速：0.8 ml/min；柱温：30℃；理论塔板数按丹参酮ⅡA峰计算应不低于2 000。
       2.2.2  供试品溶液制备［9,10］取通脉活血灵胶囊内容物1 g，精密称定，置具塞椎形瓶中，精密加入甲醇50 ml，密塞，称定重量，超声提取25 min，放冷，密塞，再称定重量，加甲醇补足减失的重量，摇匀，离心10 min，取上清液，过0.45 μm微孔滤膜，弃去初滤液取续滤液作为供试品溶液。
       2.2.3  对照品溶液制备 精密称取丹参酮ⅡA对照品10 mg，置于50 ml棕色容量瓶中，加甲醇溶解并稀释到刻度，摇匀，精密吸取上述溶液5 ml至25 ml棕色容量瓶中，以甲醇稀释至刻度，摇匀。即得浓度为0.04 mg/ml的丹参酮ⅡA对照品溶液。
       2.2.4  线性关系考察依次吸取上述标准品溶液2，4，6，8，10 μl进样，以丹参酮ⅡA进样量（X）为横坐标，峰面积的积分值（Y）为纵坐标，得回归方程：Y= 455 1.3X+ 9.030 3（r = 0.999 8）。结果表明，丹参酮ⅡA在0.080 5~0.402 4 μg线性关系良好。
       2.2.5   精密度实验精密量取0.04 mg/ml的丹参酮ⅡA对照品溶液5μl注入液相色谱仪，连续进样5次，测定其峰面积，RSD=1.53%。
       2.2.6  稳定性实验 精密量取0.04 mg/ml的丹参酮ⅡA对照品溶液5 μl注入液相色谱仪，分别于0，6，12，24，36 h测定其峰面积，RSD=1.50%(n=6)。
       2.2.7   专属性实验  取定性鉴别用的丹参酮ⅡA阴性供试品，丹参酮ⅡA对照品，取通脉活血灵胶囊供试品，按3.1色谱条件进样测定。结果表明，丹参酮ⅡA阴性供试品在丹参酮ⅡA保留时间内无干扰峰出现（图4）。
       *丹参酮ⅡA  a丹参酮ⅡA对照品  b通脉活血灵胶囊  c阴性对照
       图4   HPLC图谱（略）
       2.2.8  回收率实验 精密称取已知丹参酮ⅡA含量的20040202样品共6份，准确加入已知量丹参酮ⅡA对照品，依3.2方法操作并测定丹参酮ⅡA含量，丹参酮ⅡA的平均回收率为101.00%，RSD=1.43%(n=6)，表明本法具有良好的回收率。结果见表1。
       表1  回收率测定结果（略）  
       2.2.9  重复性实验   精密称取同一批号通脉活血灵胶囊6份，按3.2中方法操作，按2.1项下方法测定，测定丹参酮ⅡA的平均含量为0.1938 mg/g，RSD=0.82%(n=6)。
       2.2.10  样品测定取3个批次通脉活血灵胶囊1 g，精密称定，按3.1项色谱条件进样5μl测定，以外标两点法计算样品中丹参酮ⅡA的含量，测得3批样品含量。结果见表2。
       表2  样品含量测定结果（略）
       　　3  讨论
       在槐米TLC鉴别中，我们对《中国药典》2000版的显色方法进行了改进，用碘蒸气替代三氯化铝显色，显色后芦丁斑点颜色在24 h内稳定，显色效果好。大黄和首乌均为蓼科植物，均含蒽醌类化学成分造成对大黄或首乌薄层鉴别的干扰，将它们一起进行鉴别，阴性无干扰，结果稳定，重复性好。丹参酮ⅡA对光、热敏感，易分解变质，丹参超声提取时间不宜过长［9］，制备过程中超声25 min提取即可代替操作繁复的回流提取测定法。样品应置于棕色量瓶中，在冰箱中保存。用本法测定通脉活血灵中丹参酮ⅡA的含量，丹参酮ⅡA在0.080 5~0.402 4 μg范围内呈线性关系，回归方程为：Y = 455 1.3X+ 9.030 3，r=0.999 8，平均回收率为101.00%，RSD=1.43%。本研究对丹参、槐米、大黄、制首乌进行薄层色谱鉴别，用HPLC法测定通脉活血灵胶囊中丹参酮ⅡA含量，操作简单，结果准确，可作为质量控制方法。
       　　参考文献：
       ［1］  李兰芳，刘赤萍，兰漫野，等.通脉活血灵胶囊对大鼠实验性高脂血症的影响［J］.解放军药学学报，1999，15（1）:19.
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       ［9］  郑  萍，谢笑天，孟东华，等.中药丹参中丹参素丹参酮ⅡA的提取及质量研究［J］.云南师范大学学报，2004，24（4）：50.
       ［10］   杨巧巧，高君柱.丹参提取工艺的优选［J］.中成药，2004，26（1）：84.
       (河北省医学科学院，河北  石家庄  050021；  河北医科大学中医学院，河北  石家庄  050000)