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       【关键词】  逍遥丸；,,芍药苷；,,高效液相色谱法
       摘要：目的建立和完善逍遥丸（浓缩丸）的质量标准。方法采用薄层色谱（TLC） 法鉴别当归、甘草、白芍；采用高效液相色谱（HPLC）法测定芍药苷的含量。结果芍药苷的平均回收率为100.2%，RSD=1.26%（n=6）。结论 该法简便准确，可作为该制剂质量控制标准。
       关键词：逍遥丸；  芍药苷；  高效液相色谱法
       Study on Quality Standard for Xiaoyao Concentrated Pills
       GAN Guoping，ZHANG Lianping， LI Qiuyi， LIU Yan wen*
       (Hubei College of TCM,Wuhan 430061,China)
       Abstract：ObjectiveTo establish the standard of Xiaoyao Concentrated Pills. MethodsRadix Angelicae Sinensis, Radix Glycyrrhizae, Radix Paeoniae Alba in the preparation were identified by TLC; Paeoniflorin was determined by HPLC.ResultsThe average recovery was 100.2%, RSD was 1.26%(n=6) .ConclusionThe methods are simple, accurate and reproducible.
       Key words：Xiaoyao Concentrated Pills;   Paeoniflorin;   HPLC
   
　　逍遥丸（浓缩丸）是临床常用的中成药，收载于部颁标准（中药成方制剂第11册）中，由柴胡、当归、白芍、甘草等8味中药组成。具有疏肝健脾，养血调经之功效。原标准中仅有当归和白芍的鉴别，没有含量测定项目。为了更好的控制该制剂的质量，保证用药的安全有效，本实验增加了甘草的薄层鉴别，并采用高效液相色谱法测定了芍药苷的含量，以完善该药的质量标准。
       　　1  仪器与试药
       DIONEX液相色谱仪，逍遥丸：市售品。当归对照药材、甘草对照药材、芍药苷对照品均由中国药品生物制品检定所提供。乙腈为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯。
       　　2  方法与结果
       2.1  鉴别
       2.1.1  当归的薄层鉴别 取样品粉末1 g，加乙醇10 ml，超声处理10 min，滤过，滤液蒸干，残渣加1 ml乙醇使溶解，作为供试品溶液。另取不含当归的阴性对照样品，同法制成阴性对照样品溶液。再取当归对照药材0.1 g，加乙醇10 ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法［1］，吸取上述3种溶液各2 μl，分别点与同一硅胶G薄层板上，以正己烷醋酸乙酯(9∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外灯（365 nm）下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点。阴性对照样品无干扰。见图1。
       2.1.2  甘草的薄层鉴别取样品粉末5 g，加乙醇40 ml，超声处理20 min，滤过，滤液蒸干，残渣加水20 ml使溶解，再加乙醚萃取2次，20 ml/次，合并水层，用水饱和的正丁醇振摇提取2次，20 ml/次，合并正丁醇液，蒸干，残渣加甲醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。再取甘草对照药材1 g，加乙醇20 ml，同法制成对照药材溶液。照薄层色谱法［1］，吸取上述3种溶液各5 μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以醋酸乙酯甲酸冰醋酸水(15∶1∶1∶2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%的硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性对照样品无干扰。见图2。
       2.1.3  白芍的薄层鉴别取2.1.2项下剩余的供试品溶液，加中性氧化铝2 g，置水浴上拌匀、干燥，加在中性氧化铝柱（200目，2 g，内径1 cm）上，用甲醇40 ml洗脱，收集洗脱液，蒸干，残渣加乙醇1 ml使溶解，作为供试品溶液。另取不含白芍的阴性对照样品，同法制成阴性对照样品溶液。再取芍药苷对照品，加乙醇配成每毫升含2 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法试验，吸取上述3种溶液各3 μl，分别点于同一块硅胶G薄层板上，以三氯甲烷醋酸乙酯甲醇甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，105℃加热显色，供试品色谱中,在与对照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,阴性对照样品无干扰。见图3。
       图1当归的鉴别（略）
       图2  甘草的鉴别 （略）
       图3  芍药的鉴别（略）
       2.2  含量测定
       2.2.1  色谱条件 色谱柱：Kromasil C18（250 mm×4.6 mm，5μm），流动相：乙腈水(20∶80)，流速:1.0 ml/min，柱温：25℃，检测波长：230 nm，进样量10 μl。
       2.2.2  供试品溶液的制备 取供试品，研碎，取约0.5 g，精密称定，置50 ml量瓶中，加稀乙醇约40 ml，超声处理30 min，放冷，用稀乙醇定容至刻度，摇匀,滤过，取续滤液，即得。
       2.2.3  对照品溶液的制备  精密称取芍药苷对照品适量，加稀乙醇制成每毫升约含50 μg的溶液,即得。
       2.2.4  阴性对照实验 取不含白芍的阴性样品，照供试品溶液制备方法制备,即得阴性样品溶液。
       2.2.5  测定波长的选择取芍药苷对照品溶液，于紫外分光光度计上扫描，结果芍药苷的最大吸收波长为230 nm，作为测定波长。
       2.2.6  系统适应性实验及空白实验取上述3种溶液，分别注入液相色谱仪，记录色谱图。结果，供试品色谱中，芍药苷峰与其它组分峰达到基线分离。理论板数按芍药苷峰计算为4 000；阴性对照溶液色谱中，在与芍药苷峰相同保留时间处，无吸收峰,即阴性对照无干扰。见图4。
       2.2.7  线性关系考察 取芍药苷对照品溶液，加甲醇制成一系列浓度的溶液，分别进样测定。以峰面积值A为纵坐标，对照品的进样量C（μg）为横坐标，进行曲线回归，得回归方程为：A＝25.362 0C+0.119 5，r＝0.999 8，n＝5。表明芍药苷在0.250 4～1.252 0 μg范围内，其进样量与峰面积具良好的线性关系。
       2.2.8  精密度实验取同一浓度的供试品溶液，重复进样5次，10μl/次,测定峰面积值，结果峰面积平均值为16.039，RSD为1.13%。
       2.2.9  供试品溶液的稳定性实验取同一供试品溶液，于0，2，4，6，8 h进样测定，在8 h内测得供试品溶液芍药苷峰面积的RSD为0.70%。结果表明，供试品溶液在8 h内稳定。
       a.供试品    b.芍药苷对照品    c.阴性样品
 
　　图4  逍遥丸的HPLC图谱（略）
       2.2.10  重现性实验取同一批号的样品6份，照供试品溶液制备方法处理，测定，结果表明:芍药苷的含量平均值为4.72 mg/g，RSD=1.88％，表明方法重现性良好。
       2.2.11  回收率实验取已知含量的供试品，研碎，取6份，每份约0.25 g，精密称定，置于50 ml量瓶中，各精密加入对照品溶液（芍药苷51.8 μg/ml）25 ml，超声处理30 min，放冷，用稀乙醇溶液稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，进样测定。结果见表1。
       表1  加样回收率实验结果（略）
       结果，芍药苷的平均加样回收率为100.2％，RSD为1.26％（n=6）。表明实验方法准确。
       2.2.12  含量测定取3批样品，依法实验，按外标法以峰面积计算。结果见表2。
       表2  样品含量测定结果（略）
       　　3  讨论
　　　
　　作当归、白芍薄层鉴别时，原标准采用加热回流法提取法，制备供试品溶液，本实验改为超声提取法，效果较好，操作更简便，节约时间。含量测定时，曾对供试品溶液的制备提取时间进行了比较，取同批样品，分别超声处理20，30，40 min。结果表明，超声提取30 min即可提取完全。
       　　参考文献：
       ［1］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：附录VI B，78，554，555.
       (湖北中医学院，湖北 武汉   430061）