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超声波提取榕树叶(小叶)总黄酮及鉴别
作者:黄锁义, 刘海花, 黎海妮, 张婧萱, 唐玉莲, 李容

《时珍国医国药》 2006年 第9期

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       【关键词】  超声波提取;,,榕树叶;,,总黄酮;,,鉴别
       摘要:目的为充分利用榕树叶植物资源,避免资源浪费,探讨榕树叶中总黄酮的提取及鉴别方法。方法采用超声波乙醇浸提法从榕叶中提取黄酮类物质,对所提取的黄酮类物质进行验证,并用分光光度法测定含量。结果测得样品中总黄酮的含量C=2.660 mg/ml,回收率为100.2%,其纯度和产率均较高。结论 该方法采用全物理过程,无任何污染,是提取榕树叶黄酮类物质的有效途径。
       关键词:超声波提取;  榕树叶;  总黄酮;  鉴别
       The Total Flavanone of  Banyan Leaves(Flocculus) Extraction and the Identification by Ultrasonic Wave
       HUANG Suo-yi, LIU Haihua, LI Haini, ZHANG Jingxuan,TANG Yulian, LI Rong
       (Department of Chemistry, Youjiang Medical College for Nationalities,Baise, Guangxi 533000,China; Department of Laboratory Medicine,Youjiang Medical College for Nationalities, Baise, Guangxi 533000,China)
       Abstract:ObjectiveTo make use of the resources of banyan leaves ,avoid wasting and approach the extraction of total flavanone of banyan leaves.  MethodsThe flavonoids were extracted by ethanol as the solvent from banyan leaves with ultrasonic wave and ethanol extraction .Using spectrophotometry to extract and check the flavanone of banyan leaves. ResultsThe content of the total flavanone of banyan leaves was C=2.660 mg/ml and the rate of  recovery was 100.2%.  ConclusionThis method is a purely physical process and has not any pollution. It is an ideal way to extract the flavanone of  banyan  leaves.
       Key words:Ultrasonic wave treatment;  Banyan leaves;  Total flavanone;  Identification
   
  榕树(banyan)是桑科榕属无花果类植物,全世界有800多种,主要分布在热带、亚热带地区。小叶榕为桑科植物榕树的叶,异名落地金线。我国榕属植物约100种,是热带雨林中的关键种类,主要分布在福建、广东、广西、海南、台湾和浙江等地。研究表明[1]:榕树叶含三萜苷、黄酮苷、酸性树脂、鞣质等,其中黄酮类和萜内酯类等有效成分对治疗冠心病、老年性痴呆、脑血栓、神经系统疾病和消除自由基、抑菌、抗癌等方面有显著效果,无毒副作用,并以此开发出多种药品和保健食品。当前国内外对于榕树叶中黄酮类化合物的研究还相对缺乏。目前有用水、石油醚、乙醇分别从榕树叶中提取黄酮类化合物的报道[1],但是,这几种方法提取的时间长、工艺复杂、提取效率较低。近年来,超声技术应用于提取植物中的生物碱、苷类、生物活性物质、动物组织浆的毒质等研究已有报道[2,3],表明其具有耗能低、效率高、不破坏有效成分的特点。很多研究表明,利用超声波产生的强烈振动、高的加速度、强烈的空化效应、搅拌作用等,可加速植物材料中的有效成分进入溶剂,从而增加有效成分的提取率,缩短提取时间,并且还可避免高温对提取成分的影响[3]。但超声技术应用于提取榕树叶中黄酮类物质的研究尚未见报道,本文报道用超声波提取小榕树叶总黄酮及鉴别。
         1  仪器与试剂
       1.1  仪器KQ5200DB型数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司);UV755B紫外可见分光光度计(上海分析仪器总厂);ZFI型三用紫外分析仪(上海顾村光电仪器厂);SHBIII循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有限公司)。
       1.2  试剂  95%乙醇AR;亚硝酸钠AR;硝酸铝AR;氢氧化钠AR;三氯化铝AR;盐酸AR;氨水AR;冰醋酸AR;醋酸乙酯AR;正丁醇AR;镁粉AR;乙酸镁AR;芦丁标准品(中国药品生物制品检定所);榕树叶(小叶榕)采自右江民族医学院校园内。
         2  方法与结果
       2.1   总黄酮成分提取取新鲜榕叶,烘干,粉碎。称取榕树叶粉末约6 g,加80 ml 95%乙醇,超声波提取2.5 h,抽滤。滤渣再加80 ml 95 %乙醇,超声波提取2.5 h,抽滤,合并两次滤液,减压回收乙醇至滤液仅剩5~7 ml为止,放置100 ml容量瓶中,用60%乙醇稀释至刻度,得样品液。
       2.2  测定方法依据 以芦丁为对照品测定榕树叶中总黄酮的含量,加入铝离子试剂,同时控制适宜pH值,使黄酮化合物与铝盐形成络合物,在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。
       2.3  定量实验总黄酮的含量测定
       2.3.1  波长的选择   取样品液适量,在0.30 ml 5%亚硝酸钠溶液存在的碱性条件下,经硝酸铝显色后,以试剂为空白参比液在420~700 nm波长范围测定络合物的吸光度,络合物于510 nm波长处有最大吸收,故测定时选用此波长。
       2.3.2  标准曲线的绘制 分别精密吸取芦丁对照液(0.10 mg/ml)0.00,0.50,1.00,2.00,3.00,4.00,5.00 ml于10.00 ml容量瓶中,分别加入5%亚硝酸钠溶液0.30 ml,摇匀,静置6 min;再加10%硝酸铝溶液0.30 ml,摇匀,静置6 min;再加4%氢氧化钠溶液4.00 ml,用60%乙醇稀释至刻度,摇匀,静置12 min,以试剂作空白参比液,于510 nm处测吸光度。结果见表1。
       2.3.3  提取物含量的测定精密吸取样品液5.00 ml,置50 ml容量瓶,再精密吸取样品液0.50 ml,按标准曲线的制备方法测定吸光度A=0.105,根据回归方程:A=6.967 1×103+8.418 1C,计算样品中总黄酮的含量C=2.660 mg/ml。
       2.3.4  回收实验 精密量取样品液1.00 ml,加入标准芦丁对照品2.00 ml(0.10 mg/ml),同前样品测定方法操作测定吸光度,求出回收率为100.2%。
       表1  紫外可见分光光度计测定芦丁对照液吸光度(略)
       根据上表得回归方程:A=6.967 1×103+8.418 1C,r=0.999 9
       2.4  定性实验总黄酮的鉴别
       2.4.1  颜色反应 紫外光下呈色反应:取该样品溶液点在滤纸上,在可见光下呈灰黄色,在紫外光下呈灰褐色并有荧光斑点。浓氨水反应:取该样品溶液点在滤纸上,将滤纸在氨水上方熏0.5 min,立即在紫外光下观察,呈极明显的黄褐色荧光斑点。三氯化铝反应:取样品溶液点在滤纸上,滴加1%三氯化铝乙醇溶液,吹干。在可见光下呈灰黄色,在紫外光下呈黄色荧光斑点。乙酸镁反应:取样品溶液点在滤纸上,滴加1%乙酸镁甲醇溶液,吹干,紫外光下呈黄色斑点。盐酸镁粉反应:取乙醇提取液1 ml于试管中加镁粉,再加入浓盐酸数滴(1次加入),在泡沫处呈紫红色。
       2.4.2  纸层析取样品溶液10 μl点在滤纸上。用正丁醇∶醋酸∶水=4∶1∶5(体积比)为展开剂,上行展开5 h,取出晾干。喷1%氯化铝乙醇溶液。吹干后于紫外光下,可见荧光斑点。
         3  讨论
       实验结果表明,本实验方法工艺简单,回收率为100.2%,提取效率高于传统方法,利用本文所提供的超声波提取、纯化方法而得到的黄酮类物质其纯度较高。超声波可以强化乙醇浸提法,达到省时、高效、节能的目的,此方法采用全物理过程,无任何污染,是一条理想的提取黄酮类物质的途径,具有广阔的应用前景。黄酮类化合物是一大类天然产物,广泛存在于植物界,是许多中草药的有效成分,具有很高的药用价值。在自然界中最常见的是黄酮和黄酮醇,其它包括双氢黄(醇)、异黄酮、双黄酮、黄烷醇、查尔酮、橙酮、花色苷及新黄酮类等[1]。天然来源的生物黄酮分子量小,能被人体迅速吸收,能通过血脑屏障,能进入脂肪组织,进而体现出如下功能:消除疲劳、保护血管、防动脉硬化、扩张毛细血管、疏通微循环、抗脂肪氧化、抗衰老、活化大脑及其他脏器细胞的功能。  黄酮类化合物具有抗癌、抗肿瘤、抗心脑血管疾病、抗炎镇痛、免疫调节、降血糖、治疗骨质疏松、抑菌抗病毒、抗氧化、抗衰老、抗辐射等作用[4~9]。近年来,世界上掀起了植物药开发的热潮,植物药以其天然低毒的特点倍受青睐,而黄酮类化合物以其广泛的药理作用引人瞩目,榕树叶(小叶榕)分布广泛,本文实验结果表明,榕树叶(小叶榕)中含有较为丰富的黄酮。因此,榕树叶(小叶榕)具有广泛开发和利用价值,值得综合利用与开发。
        参考文献:
       [1]  夏杏洲,张  辉,魏传晚.榕树叶中黄酮类化合物的提取条件研究[J].食品研究与开发,2002,23(5):35.
       [2]  刘祥义. 超声波提取元宝枫叶总黄酮方法研究[J].云南化工,2003,30(1):27.
       [3]  谢明杰,宋  明,邹翠霞,等. 超声波提取大豆异黄酮[J].大豆科学,2004,23(1):74,75.
       [4]  华光军,郭  勇.黄酮类化合物药理研究进展[J].广东药学,1999,9(4):9.
       [5]  黄河胜,马传庚,陈志武.黄酮类化合物药理作用研究进展[J].中国中药杂志,2000,25(10):499.
       [6]  王  玮,王  琳. 黄酮类化合物的研究进展[J].沈阳医学院学报,2002,4(2):115.
       [7]  曹纬国,刘志勤,邵  云,等. 黄酮类化合物药理作用研究进展[J].西北植物学报,2003,23(12):2241.
       [8]  姜国芳,谢宗波,乐长高.银杏叶黄酮类化合物的研究进展[J].时珍国医国药,2004,15(5):306.
       [9]  黄锁义,黎海妮,余美料,等.益母草总黄酮的提取及鉴别[J]. 时珍国医国药,2005,16(5):398.
       (右江民族医学院化学教研室,广西 百色  533000;右江民族医学院检验医学系,广西 百色  533000) 
        

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