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       【关键词】  转化生长因子β1；,,Burkitt淋巴瘤；,,c
       摘要：目的利用Burkitt淋巴瘤细胞株Jiyoye细胞探讨转化生长因子β1（TGFβ1）对淋巴瘤细胞生长的抑制作用和cmyc 基因的影响。方法利用MTT及RTPCR方法检测细胞生存率、cmyc 基因的表达水平。结果不同浓度的TGFβ1作用于Jiyoye细胞24 ，48 h和72 h后，细胞生存率随浓度的升高和时间的延长而逐渐降低。实验组各时间段的生存率与对照组相比显著降低（P<0.01），同时，实验组各组间均有显著性差异（P<0.01）。实验组中cmyc 基因的表达24 h开始下降，48 h和72 h时明显受抑制，与对照组相比有显著性差异(P<0.01)。结论 TGFβ1可在浓度和时间依赖性抑制Jiyoye细胞株生长的同时抑制cmyc基因的表达。
       关键词：转化生长因子β1；  Burkitt淋巴瘤；  cmyc基因
       Effect of Transforming Growth Factor β1 on Cell Growth and cmyc Gene Expression on Lymphoma Cell Line
       LI Zhuhu， LIN  Zhenhua， LEE  Mija
       （Department of Pathology, College of Medicine, Yanbian University, Yanji 133000, China;Department of Pathology, College of Medicine, Chosun University Gwoungju, South Korea）
       Abstract：ObjectiveTo investigate the inhibition of transforming growth factorbeta1 (TGFb1) on cell growth and cmyc gene expression on Burkitt lymphoma cell lineJiyoye.MethodsThe cell survival rate and cmyc gene expression were detected by using MTT assay and RTPCR.ResultsAfter 24, 48 and 72 h of different concentration of TGF β1 action on Jiyoye cell line, the cell survival rate decreased along with the increase of concentration and extension of the time. Compared with the control group, the cell survival rate of every stage in experimental group significantly decreased（P<0.01）. At the same time, there was also significant difference among the experimental groups（P<0.01）. Cmyc gene expression began to reduce at 24 h, and significantly inhibited at 48 h and 72 h，it was significantly lower than control group(P<0.01). ConclusionTGFb1 could inhibit the growth of Jiyoye cell line depending on the concentration and time process, and also inhibit the expression of cmyc gene.
       Key words：TGFβ1;  Burkitt lymphoma;  cmyc gene
   
　　转化生长因子（transforming growth factor-beta，TGFβ）是分子量为25KD的蛋白质，具有多种功能［1］。TGFβ1对多种类型的细胞生长具有抑制作用［2，3］。目前认为，TGFβ1可通过抑制c-myc基因的转录启动部位（transcriptional initiation）而抑制细胞的生长［4，5］。cmyc癌基因具有调节细胞生长和增殖及分化的功能。cmyc基因的扩增或蛋白的过度表达可促进肿瘤细胞生长 ［6］。TGFβ1对恶性淋巴瘤生长抑制作用方面的研究报告较少见。本研究以Burkitt淋巴瘤细胞株Jiyoye为模型，观察TGFβ1对淋巴瘤细胞生长及cmyc基因的影响。
       　　1  材料和方法
       1.1  材料
       1.1.1  细胞株  Burkitt淋巴瘤细胞株Jiyoye由韩国白血病细胞株银行提供，在韩国朝鲜大学校医科大学病理学教研室传代培养。
       1.1.2  试剂人TGFβ1为美国Biovision公司产品；胎牛血清（FBS）为美国JBI公司产品；MTT试剂为美国Sigma公司产品；Trizol、oligo(dT)引物、SuperScriptTM Ⅱ Reverse Transcriptase为美国Invitrogen公司产品；RNaseOUTTM、Ex TaqTM为美国TaKaRa公司产品；cmyc及GAPDH引物由Bioneer公司合成。
       1.2  方法
       1.2.1  Burkitt淋巴瘤细胞株的培养  Burkitt淋巴瘤细胞株Jiyoye细胞，在含10%胎牛血清的RPMI 1640培养液、5% CO2培养箱中进行培养。实验分为两组：对照组，不加TGFβ1的Jiyeye细胞株；实验组，加5 ng/ml TGFβ1的Jiyoye细胞株。两组细胞培养24 ，48及72 h，分别收集细胞后进行各项指标的测定。
       1.2.2  细胞生存率的检测利用MTT法检测人TGFβ1对细胞生长的影响。取对数生长期的细胞用于下列实验。Jiyoye细胞株接种于96孔板，每孔细胞数为2×104个，每次设空白对照组（调零）、对照组及实验组，每组设3个复孔。实验组加不同浓度的TGFβ1（5 ，0.5 ，0.05 ，0.005，0.0005 ng/ml），对照组用同等量的PBS缓冲液代替TGFβ1，分别培养24 ，48 h及72 h后，每孔加入5 mg/mlMTT试剂10 μl，在CO2培养箱中继续培养5 h，加0.04N HCl (5 mol/L HCl : Isopropyl Alcohol = 1 : 125) 100μl，震荡10 min。用酶标仪在540  nm波长测定吸光值，并按公式计算细胞生存率：细胞生存率 % = 实验组吸光值/对照组吸光值×100%。
       1.2.3  RTPCR测定cmyc RNA表达 按Trizol试剂说明书提取对照组和实验组的总RNA，RNA含量通过紫外分光光度计测定A260/A280时的浓度而获得。cmyc 引物：sense 5"CTCCAGCGCCTTCTCTCCGT3",antisense 5"-GAGCCTGCCTCTTTTCCACAG3"。PCR反应条件为：95℃ 5 min；94℃ 30 s，60℃ 45 s，72℃ 45 s，共进行26个循环；72℃ 10 min。用GAPDH做了内对照，其引物：sense 5"GAGAAGGCTGGGGCTCATTT3", antisense 5"CAGTGGGGACGGAAGG3"。PCR反应条件为：94℃ 2 min；94℃ 30 s，60℃ 30 s，72℃ 60 s，共进行23个循环；72℃ 10 min。取10 μl PCR产物，加2 μl6 x上样缓冲液，用2%琼脂糖凝胶进行电泳，紫外透射仪下观察结果并拍照，通过图像分析系统进行统计学分析。
       2  结果
       2.1  TGFβ1对Jiyoye细胞生长的影响  用MTT方法检测了不同浓度的TGFβ1在24，48 ，72 h时对Jiyoye细胞生长的影响。结果，5 ng/ml 浓度的TGFβ1在各时间段对细胞生长的影响最为显著（图1）。加入5 ng/ml浓度的TGFβ1实验组在24，48，72 h时的生存率随浓度的升高和时间的延长而逐渐降低。实验组各时间段的生存率与对照组相比显著降低（P<0.01），同时，实验组各组间均有显著性差异。结果见表1。
       图1  不同浓度的TGF-β1对Jiyoye细胞生长的影响（略）
       表1  5 ng/ml TGFβ1对Jiyoye细胞生长的影响（略）
       与对照组比较，**P<0.01； 实验组中与24 h比较，&&P<0.01，与48 h比较，▲▲P<0.01
       2.2  TGFβ1对Jiyoye细胞cmyc 基因的影响RTPCR方法检测TGFβ1对c-myc 基因表达的影响。结果，在实验组中cmyc 基因表达在24 h时开始降低,与对照组相比有显著性差异(P<0.05)，48 h和72 h时明显降低，与对照组相比具有显著性差异(P<0.01)。对照组cmyc 基因的表达在各时间段无明显变化。结果见图2。
       图2  RT-PCR方法检测TGFβ1对Jiyoye细胞株cmyc 基因表达的影响（略）
       　　3  讨论
       TGFβ1在细胞生长和分化过程中起重要的调节因子的作用。对大多数上皮细胞来源的多种细胞的生长起抑制作用［7，8］。本研究结果，TGFβ1明显抑制Bukitt淋巴瘤细胞株Jiyoye细胞的生长，并且随浓度的升高和时间的延长其抑制作用越明显。Burkitt淋巴瘤是一种浸润性很高的B细胞来源的恶性淋巴瘤。在Burkitt淋巴瘤中cmyc基因从8号染色体易位到具有编码免疫球蛋白重链基因的14号染色体或编码轻链的2号或22号染色体，使cmyc基因被激活［9］。cmyc是定位于染色体8q24的一种癌基因，cmyc基因及其产物cmyc蛋白具有促进DNA复制，调节G1细胞周期、细胞生长、增殖及分化等功能［10，11］。在恶性淋巴瘤、白血病及各种上皮细胞来源的恶性肿瘤中均有cmyc基因及蛋白的过度表达［12］。TGFβ1对恶性淋巴瘤及白血病细胞生长抑制作用方面的研究报告不多，对细胞生长抑制作用与cmyc基因相关关系的研究报告更为少见。本研究以Burkitt淋巴瘤细胞株Jiyoye为模型，利用RTPCR方法检测了TGFβ1对Jiyoye细胞cmyc基因的影响。结果表明，TGFβ1可明显抑制cmyc基因的表达，与对照组相比具有显著性差异，并且作用时间越长，其抑制作用越明显。本研究结果表明，TGFβ1可时间依赖性抑制Burkitt淋巴瘤细胞株Jiyoye细胞的生长，同时抑制cmyc基因的表达。
       　　参考文献：
       ［1］  Assoian RK, Komoriya A, Meyers CA, et al. Transforming growth factorbetainhuman platelets. Identification of a major storage site, purification, and characterization［J］.J Biol Chem, 1983, 258(11): 7155.
       ［2］  Tseng WF, Huang SS, Huang JS. LRP1/TbetaRV mediates TGFbeta1induced growth inhibition in CHO cells［J］. FEBS Lett, 2004, 562(1-3): 71.
       ［3］  Derynck R, Akhurst RJ, Balmain A. TGFbeta signaling in tumor suppression and cancer progression［J］.  Nat Genet, 2001, 29(2): 117.
       ［4］   Sasaki T，Suzuki H，Yagi K, et al. Lymphoid enhancer factor 1 makes cells resistant to transforming growth factor βinduced repression of cmyc［J］.Cancer Res, 2003, 63(4): 801.
       ［5］  Claassen GF, Hann SR. A role for transcriptional repression of p21CIP1 by cMyc in overcoming transforming growth factorbeta induced cellcycle arrest［J］. Proc Natl Acad Sci U S A, 2000, 97(17): 9498.
       ［6］  Abba MC, Laguens RM, Dulout FN, et al. The cmyc activation in cervical carcinomas and HPV 16 infections［J］. Mutat Res, 2004, 557(2): 151.
       ［7］  Huang SS， Leal SM， Chen CL, et al. Cellular growth inhibition by TGFbeta1 involves IRS proteins［J］. FEBS Lett, 2004, 565(1-3): 117.
       ［8］  Tseng WF, Huang SS, Huang JS. LRP1/TbetaRV mediates TGFbeta1induced growth inhibition in CHO cells［J］. FEBS Lett, 2004, 562(13): 71.
       ［9］  Dalla-Favera R, Bregni M, Erikson J at el. Human c-myc onc gene is located on the region of chromosome 8 that is translocated in Burkitt lymphoma cells［J］. Proc Natl Acad Sci U S A, 1982, 79(24): 7824.
       ［10］  Amati B. Integrating Myc and TGFbeta signalling in cellcycle control［J］.Nat Cell Biol, 2001,3(5):112-113.
       ［11］  Elend M, Eilers M. Cell growth: downstream of Myc to grow or to cycle?［J］. Curr Biol, 1999, 9(24): 936.
       ［12］   Mathew S, Lorsbach RB, Shearer P, et al. Double minute chromosomes and c-MYC amplification in a child with secondary myelodysplastic syndrome after treatment for acute lymphoblastic leukemia［J］.  Leukemia, 2000, 14(7): 1314.
       (延边大学基础医学院 病理学教研部，吉林 延吉  133000；朝鲜大学医科大学 病理学教研室，韩国 光州)