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       【关键词】  半枝莲
        摘要：目的：从半枝莲中提取总黄酮和多糖，并测定其含量。方法：运用微波技术提取半枝莲总黄酮和多糖，用比色法测定总黄酮和多糖含量。结果：测得半枝莲中总黄酮含量为3.74%，平均回收率为98.91%，相对标准偏差(RSD)为2.01%(n=5)；多糖含量为5.79%，平均回收率为101.3%，相对标准偏差(RSD)为3.0%(n=5)。结论：运用微波技术从半枝莲中联合提取总黄酮和多糖，反应速度加快，提高了提取效率。
        关键词：微波技术；半枝莲；总黄酮；多糖；提取；含量测定
        Microwave Extraction and Determination of Total Flavonoids and Polysaccharides in Scutellaria barbata D.Don
        XUE Mei, WANG Zijun, ZHOU Jing
        (Chemistry and Chemical Engineering College, Shihezi University, Shihezi, Xinjiang 832002, China)
        Abstract:Objective:To extract and determine total flavonoids and polysaccharides in Scutellaria barbata D.Don.Methods:Total flavonoids and polysaccharides in Scutellaria barbata D.Don were extracted by microwave technology and determined by colorimetry.Results:Total flavonoids in Scutellaria barbata D.Don was 3.74%,and recovery rate was 98.91%,RSD was 2.01%(n=5)；Polysaccharides in Scutellaria barbata D.Don was 5.79%,and recovery rate was 101.3%,RSD was 3.0%(n=5).Conclusion:Microwave technology was applied to extracting total flavonoids and polysaccharides in Scutellaria barbata D.Don for the first time. The reaction speed is faster and the result is satisfactory.
        Key words:Microwave technology;Scutellaria barbata D.Don;Total flavonoids;Polysaccharide;Extraction;Determination
        半枝莲Scutellaria barbata D.Don别名并头草、金挖耳,为唇形科黄芩属植物,据文献［1］介绍,半枝莲有很多的药用功能,对机体的细胞免疫有促进作用,对癌细胞有一定的抑制作用,有清热、解毒、抗病毒、活血、祛瘀、消肿、止痛、抗癌、保肝等功效。半枝莲中含有多种生物活性物质，现提取总黄酮成份制成中药二类新药咽炎胶囊,试用于临床。但对半枝莲的多糖研究未见报道。
        微波技术的应用，近年来得到很大发展。微波具有穿透力强、选择性高、加热效率高等特点。微波辐射(MWI)可以大大加快反应速度，缩短反应时间［3］。微波技术应用于植物细胞破壁，有效地提高了收率［4］。
        本实验运用微波技术联合提取并测定半枝莲中总黄酮和多糖的含量［5］，反应速度加快，实验结果令人满意。为半枝莲总黄酮和多糖的研究和开发利用奠定了基础。
           1仪器、样品及试剂
        ＵＶ2401型分光光度计(日本岛津)，MCL3型连续微波反应器(四川大学无线电系)。对照品芦丁购自中国药品生物制品检定所，其余试剂均为分析纯。半枝莲购自石河子中药店，粉碎后备用。
           2方法与结果
        2.1测定方法依据　以芦丁为对照品测定半枝莲中总黄酮含量，加入铝离子试剂，同时控制适宜pH值，使黄酮化合物与铝盐形成配合物在可见光区能获得稳定的特征吸收峰。运用微波技术水提醇沉法制得半枝莲粗多糖，并采用酚硫酸比色法对其多糖含量进行测定。
        2.1.1半枝莲中总黄酮和多糖的含量测定
        2.1.1.1样品溶液制备取半枝莲约2 g，精密称定，用滤纸包好。分置于索氏提取器中，用石油醚（60～90℃）水浴回流脱脂2次（2 h/次），弃去石油醚提取液。半枝莲挥干石油醚后，置100 ml烧瓶中，将此烧瓶放入MCL3型连续微波反应器中，用80%乙醇回流提取两次，调整功率560,500,400,350W，每次反应时间20 min，提尽黄酮。另用少量80%乙醇多次洗涤半枝莲，并入提取液中，定量转移入100 ml容量瓶中，加80%乙醇至刻度，摇匀，即得测总黄酮之半枝莲样品液。
        将提尽黄酮后的半枝莲置100 ml烧瓶中，放入MCL3型连续微波反应器中，用80%乙醇回流提取20 min，调整功率560，500，400，350W，以除去单糖及一些苷类，弃提取液。半枝莲挥干乙醇后，再放入MCL3型连续微波反应器中，继续以水回流提取2次（每次20　min），调整功率560，500，400，350W，减压抽滤，各次滤液合并。水浴浓缩后，用蒸馏水定容至250 ml，即为测多糖的半枝莲样品液。
        2.2总黄酮含量的测定
        2.2.1 标准曲线制备精密称取芦丁对照品10 mg，置25 ml容量瓶中，加80%乙醇溶解，定容，精密吸取0.0，0.2，0.4，0.6,0.8，1.0 ml，分置于10 ml容量瓶中，加5%亚硝酸钠0.3 ml，放置6 min，再加10%硝酸铝0.3 ml，放置6 min,加4%氢氧化钠4 ml，加水至刻度，摇匀。进行全波长扫描，在510 nm处均有最大吸收。以510 mn处测得的吸收度A对浓度C回归，得回归方程：A=11.225C+0.002 7，r=0.999 13，在8～40 μg/ml的范围内，浓度与吸收度有良好的线性关系。
        2.2.2 样品测定分别将测总黄酮之各样品液定量稀释5倍后，再精密吸取各稀释液适量于10 ml容量瓶中，照标准曲线制定项下方法操作，测定吸收度，由回归方程求出稀释液中总黄酮浓度，然后计算百分含量。结果见表1。
        2.2.3稳定性实验按样品测定方法操作，测定同一供试液在不同时间吸收度。结果表明，吸收度值在6 h内基本不变，因此测定应控制在6 h内完成。
        表1半枝莲中总黄酮和多糖含量%（略）
        2.2.4回收率实验取已知总黄酮含量的供试品溶液1.0 ml于10 ml容量瓶中，再加入0.2 mg/ml的芦丁对照品溶液0.5 ml，依法测定，结果平均回收率为98.91%，RSD=2.01%(n=5)。
        2.3多糖含量测定 
        2.3.1标准葡萄糖溶液的配制精密称取干燥恒重的葡萄糖25.2 mg，加适量水溶解，转移至250 ml容量瓶中，加水至刻度，摇匀，配成浓度为100.8 μg・ml1标准葡萄糖溶液备用。
        2.3.25%苯酚试剂的配制取苯酚100 g，加铝片0.1 g和NaHCO30.05 g，蒸馏。收集182℃馏份，称取7.5 g，加水150 ml溶解，置棕色瓶内放冰箱备用。
        2.3.3标准曲线制备精密量取100.0 μg・ml1标准葡萄糖溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5，0.6，0.7 ml置于干燥试管中，分别加水使成1.0 ml，再分别加入5%苯酚溶液1.6 ml，摇匀，然后加浓H2SO4 7.0 ml，充分摇匀，室温放置25 min，在490 nm处测定其最大吸收度，同时做一空白。结果浓度在10.05～75.56 μg・ml1范围内呈线形关系,实验数据做回归处理得回归方程:A=0.069 1C+0.003,r=0.999 05。
        2.3.4 换算因素测定 半枝莲粉碎后，称取100 g，置于500 ml烧瓶中，将此烧瓶放入MCL3型连续微波反应器中，依次用250 ml石油醚(60～90℃)、乙醚和80%乙醇回流提取两次，调整功率560，500，400，350 W，反应时间20 min。减压抽滤，残渣挥干溶剂后，再放入MCL3型连续微波反应器中，调整功率630，600，560，450 W，继续以水回流提取两次，每次20 min。减压过滤，合并滤液。将滤液减压浓缩至一半体积，加入0.1%活性炭，脱色2次，过滤，滤液加5倍量95%乙醇，放置过夜，抽滤后的沉淀以100 ml水溶解重复醇沉1次。过滤，残渣用乙醚、无水乙醇反复洗涤，60℃干燥，即得半枝莲多糖。精确称取60℃干燥恒重的半枝莲多糖20.00 mg，水溶解后定容到100 ml容量瓶中，摇匀，做为多糖储备液。精确量取多糖储备液0.2 ml，加水至1 ml，按测定标准曲线同样的方法测其吸收度。按下式计算换算因素:f=W/CD式中：W为多糖重量(μg)，C为多糖液中葡萄糖的浓度(μg・ml1)，D为多糖的稀释因素。测得f=1.983。
        2.3.5样品含量测定精确吸取样品液1 ml，按标准曲线制备项下方法测定其吸收度值，按下式计算多糖含量，多糖含量=CDf/W×100(C为样品溶液的葡萄糖的质量，D为样品溶液的稀释倍数，f为换算因素)。结果见表1。
        2.3.6稳定性试验用硫酸-苯酚法测定同一样品液在不同时间的吸收度，吸收度值至少在48 h内不变。
        2.3.7回收率测定精密称取半枝莲适量，加入精制半枝莲多糖适量，按样品液制备和多糖含量测定方法操作，测得多糖平均回收率为101.3%，RSD=3.0%(n=5)。
           3讨论
        黄酮类化合物具有降脂、抗血栓、抗氧化、降糖等多种生理活性［6］。多糖广泛存在于自然界，是多种中草药的有效成分之一，具有多种生物活性，是理想的免疫增强剂。它能提高机体免疫系统的功能，而对正常细胞没有毒副作用，在抗肿瘤、抗病毒、抗衰老等药物研究中，多糖类药物的研制已成为当今世界新药的发展方向之一［7］。本实验运用微波技术从半枝莲中联合提取出半枝莲总黄酮和多糖，并对其含量进行了测定，反应时间缩短。结果显示半枝莲中黄酮含量为3.74%，多糖含量为5.79%，有较高的开发价值。半枝莲黄酮和多糖的结构组成和生理活性有待进一步研究和探讨。
           参考文献：
        ［1］余传隆.中药辞海［M］.北京：中国医药科技出版社,1993：18201828.
        ［2］谭永红，王诗华，梁容梅.中药半枝莲的研究进展［J］ 西南国防医药，2002，12(2)：152153.
        ［3］曾昭钧，李香文.微波有机化学进展［J］.沈阳药科大学学报，1999，16(4)：304309.
        ［4］张代佳，刘传斌，修志龙，等.微波技术在植物胞内有效成分提取中的应用［J］.中草药，2000，31(9)：附564.
        ［5］席先蓉，李寿星.蒲黄及不同炮制品中总黄酮和多糖含量分析［J］.中国中药杂志，2000，25(1)：2528.
        ［6］韩公羽，沈企华.植物药有效成分的研究与开发［M］.杭州：杭州大学出版社，1991：94102.
        ［7］田庚元，冯宇澄，林颖.植物多糖的研究进展［J］.中国中药杂志，1995，20(7)：441441.
        (石河子大学化学化工学院，新疆 石河子832002)