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       【关键词】  元胡止痛片；,,延胡索乙素；,,高效液相色谱
       摘要：目的建立元胡止痛片中延胡索乙素的含量测定方法。方法C18ODS色谱柱 (4.6 mm×250 mm, 20 μm) ； 流动相：甲醇0.1%磷酸溶液（三乙胺调pH值至6.0）(55∶45)；检测波长：280 nm；流速：1.0 ml・min1。结果延胡索乙素对照品在0.153 2~0.766 0 μg范围内，进样量与峰面积间呈良好的线性关系，r=0.999 99，平均回收率为99.53%。结论该方法操作简便，结果准确，重现性好，可用于控制该制剂的质量。
       关键词：元胡止痛片；  延胡索乙素；  高效液相色谱
       元胡止痛片是2005版《中国药典》［1］收载品种，由延胡索（醋制）、白芷2味中药组成。具有理气、活血、止痛功能，用于气滞血淤的胃痛、胁痛、头痛及痛经等。是中药止痛著名方剂。现代研究表明，延胡索乙素具有较强的镇痛，镇静，催眠等药理作用［2］。因此，该成分是元胡止痛片中的有效活性成分之一。2005版《中国药典》［1］收载的元胡止痛片中延胡索乙素的含量测定方法为薄层色谱扫描法，操作比较复杂。本实验采用HPLC法改进延胡索乙素的含量方法，并对测定方法学进行了研究。
       1  仪器与试剂
       仪器：高效液相色谱仪(日本岛津CLASSVP 10AVP)；C18ODS色谱柱 (4.6 mm×250 mm, 20μm) (大连依利特) ；HP1050/3D化学工作站；样品：元胡止痛片，自制；对照品：延胡索乙素对照品，批号：110726200208，供含量测定用（中国药品生物制品检定所提供）； 试剂：所用试剂均为分析纯、色谱纯；水为重蒸馏水(自制)。
       　　2   方法与结果
       2.1  色谱条件与系统适用性实验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；甲醇-0.1%磷酸溶液（三乙胺调pH值至6.0）(55∶45)为流动相；流速1.0 ml・min1，检测波长280 nm；理论板数按延胡索乙素峰计算应不低于3 000。
       2.2   对照品溶液的制备 精密称取延胡索乙素对照品适量，加甲醇制成每毫升含46 μg的溶液，即得。
       2.3  供试品溶液的制备取本品10片，除去糖衣，研细，取细粉0.50 g，精密称定，置平底烧瓶中，精密加入浓氨试液甲醇(1∶20)混合溶液50 ml,称定重量,冷浸1 h后加热回流1 h,放冷,再称定重量, 用浓氨试液甲醇(1∶20)混合溶液补足减失的重量,摇匀,滤过,精密吸取续滤液25 ml，置水浴上蒸干,残渣加甲醇溶解,转移至5 ml量瓶中，并稀释至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，即得。
       2.4   线性关系考察 精密称取延胡索乙素对照品3.83 mg至25 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，得混合对照品原液（153.2 μg/ml）。精密吸取对照品原液1，2，3，4，5 ml，分别至10 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，分别精密吸取10 μl，注入液相色谱仪，记录峰面积。以进样量(X)对峰面积(Y)作图，得到其标准曲线图。得回归方程Y=3.94×107 X+0.027 51，r=0.999 99， n=5。延胡索乙素对照品在在0.153 2~0.766 0 μg范围内，进样量与峰面积间呈良好的线性关系。
       2.5  精密度实验 准确吸取上述对照品溶液10.0 μl，注入液相色谱仪，测定峰面积值，重复进样6次，RSD为0.42%。结果表明，本法精密度较好。
       2.6  稳定性实验 取同一供试品溶液，分别于1，2，3，4，5，6 h测定延胡索乙素的峰面积值， RSD为0.78%，结果显示供试品溶液在6 h内稳定。
       2.7  重复性实验 对同一批样品平行制备5份供试液,分别取10.0μl，注入液相色谱仪，进行含量测定， RSD为1.96%。表明本法重现性较好。
       2.8  阴性对照实验 取缺延胡索的处方药材，按工艺制备制成缺延胡索的阴性制剂，照供试品溶液制备方法制成阴性溶液，分别吸取对照品溶液、供试品溶液及阴性溶液各10.0μl，注入液相色谱仪，按上述条件进行测定，记录色谱图，从色谱图中可以看出，方中其它成分在本测定条件下，对延胡索乙素的含量测定无干扰。见图1~3。
       图1  对照品色谱图（略）
       图2  样品色谱图 （略）
       图3  阴性样品色谱图（略）
       2.9   加样回收率实验精密称取已知含量的同一批号样品（延胡索乙素含量为0.45 mg/g）9份，分为3个浓度组，称样量分别为0.17，0.25，0.32 g，每组3份，均精密称定，3个浓度组分别精密加入对照品原液（延胡索乙素含量为0.1532 mg/ml）0.9，0.7，0.5 ml，按供试品溶液制备方法及上述色谱条件测定，计算加样回收率。结果见表1。
       2.10   供试样品的含量测定 分别取不同批号的样品，按本方法的测定条件，分别测定各样品中延胡索乙素的含量。结果见表2。
       表1  延胡索乙素加样回收率实验（略）　
       表2  3批样品中延胡索乙素含量测定结果（略）
       　　3   讨论
       3.1   延胡索是元胡止痛片处方中的君药，延胡索乙素是延胡索的主要活性成分之一，因此建立元胡止痛片中延胡索乙素的含量指标具有一定的实际意义。本文的HPLC测定条件不受方中其它成分的干扰，专属性较强，测试结果比较准确，可用于该制剂的质量控制。
       3.2  在供试品溶液的制备方法中，我们曾选用甲醇超声处理30 min，乙醇超声处理30 min，氯仿超声处理30 min，浓氨试液甲醇(1∶20)混合溶液超声处理30 min，浓氨试液甲醇(1∶20)混合溶液加热回流提取等方法，结果以浓氨试液甲醇(1∶20)混合溶液冷浸1 h后，加热回流提取1 h，供试液测定值最高，故确定以浓氨试液甲醇(1∶20)混合溶液加热回流提取制备供试液。
       　　参考文献：
       ［1］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：01.
       ［2］  阴  健中药现代研究与临床应用［M］.北京：学苑出版社，1993：3695.
       (河南仲景保健药业有限公司，河南 郑州  450001)