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       【关键词】  缺血性心脏病；,,心脑通络液；,,基因
       摘要：目的探讨心脑通络液治疗缺血性心脏病的机理。方法使用兔开胸结扎冠状动脉造成缺血性心脏病模型，将30只兔随机分成5组，即假手术组、模型组、地奥心血康组、心脑通络液高、低剂量组。2 d后检测NO及其基因表达，ET1及其基因表达。结果心脑通络液能升高NO水平，降低ET1水平，升高ecNOS mRNA水平，降低ET1 mRNA水平，疗效优于地奥心血康组(P<0.05 ) 。结论 心脑通络液能从基因转录和翻译水平对ecNOS， ET1进行调节，显著升高家兔心肌缺血后血清中NO水平，降低ET1水平，减轻缺血状态下对心肌细胞和血管内皮细胞造成的损害，具有保护缺血心肌细胞及血管内皮功能的功效。
       关键词：缺血性心脏病；  心脑通络液；  基因
       Experimental Study on Mechanism of Treating Ischemia Heart Disease with Xinnaotongluoye
       LI Yan, LU Ruihua, WU Xian
       (The First Hospital Attached to Heilongjiang University of Traditional Chinese Medicine, 150040, China)
       Abstract：ObjectiveTo study mechanism of treating Ischemia heart disease with Xinnaotongluoye. MethodsMade the model of AMI by tieing up the rabbit`s coronary artery. Divided the rabbits into five groups. After two days the NO,Et1 and their mRNA level were observed.ResultsThe study showed Xinnaotongluoye could make level of NO and its mRNA up and the level of ET1 and its mRNA down, the relative effect was more significant in the Xinnaotongluoye group than the Diaoxinxuekang group (P<0.05). ConclusionXinnaotongluoye can improve the level of NO and its mRNA, the level of ET1 and its mRNA to protect the myocardium against the harm of Ischemia heart disease.
       Key words：Ischemia heart disease ；  Xinnaotongluoye；  Gene
   
　　随着我国人们生活水平的提高，缺血性心脏病发病率明显增加，发病年龄明显提前。对于缺血性心脏病的治疗目前最有力的手段是心肌血运重建疗法，主要是介入疗法及静脉溶栓治疗，但介入疗法价格昂贵，目前尚难以适应我国国情而广泛开展，溶栓疗法也受到诸如就诊时间、年龄、禁忌证等诸多方面的限制，特别是对心肌血液重建后再灌注损伤等问题尚无有力手段，仍需寻找新的治疗方法。中医药在治疗缺血性心脏病方面积累了诸多经验，中医针对其病机气虚血淤的治法－益气活血法尤为重要。心脑通络液在临床上已被广泛应用，取得了良好的疗效。本研究从分子水平探讨了心脑通络液对缺血性心脏病的治疗作用，希望能开拓治疗缺血性心脏病的新途径，进一步丰富心脑通络液治疗缺血性心脏病的机理。
       　　1  材料与方法
       1.1  模型制备 选用日本大耳白兔30只，雄性，体重2.0~2.3 kg，4~5月龄，均购自黑龙江中医药大学实验动物中心。使用兔开胸结扎冠状动脉造成缺血性心脏病模型。
       1.2  动物分组、饲养与给药将30只雄性家兔按随机数字表法分成5组，每组6只，即假手术组、模型组、地奥心血康组、心脑通络液高、低剂量组。各组家兔均采用灌胃给药，2次/d；假手术组及模型组给予生理盐水灌服；地奥心血康组灌服地奥心血康悬液10 ml/kg（剂量相当于生药0.1 g/kg）；心脑通络液低剂量组灌服心脑通络液5 ml/kg；心脑通络液高剂量组灌服心脑通络液10 ml/kg。各组灌胃量均以生理盐水平衡。连续灌胃3 d，末次给药1 h后进行造模。心脑通络液，主要组成：黄芪、丹参、当归、川芎、桃仁、红花、水蛭、瓜蒌、半夏、甘草等。由黑龙江中医药大学附属二院制剂室提供，200 ml/瓶。地奥心血康，成都地奥制药集团有限公司，批号0406058  0.1 g/粒。
       1.3  方法造模12 h后开始灌胃，灌胃2 d后用20%的乌拉坦耳缘静脉注射麻醉，剂量为1 g/kg，剪开腹腔，从下腔静脉按各试剂盒要求取血保存，按各试剂盒方法检测NO，ET1水平。打开胸腔，取出心脏，用0. 9%生理盐水冲洗干净，在心脏左室心尖部剪取心肌组织，按相应原位杂交实验要求保存，按原位杂交方法检测NO基因表达，ET1基因表达情况。
       1.4  统计学分析所有资料均以 ±s表示，将数据输入计算机SPSS系统中处理，组间差异采用方差分析，均数两两比较采用t检验。
       　　2  结果
       2.1  各组家兔血清中NO的检测结果见表1。表1中所示，实验后假手术组、地奥心血康组、心脑通络液低剂量及心脑通络液高剂量组NO数值均高于模型组，与之比较有极显著性差异 (P<0.01)；假手术组、心脑通络液高剂量组与低剂量组比较有显著性差异(P<0.05)；而假手术组、高剂量组组间无显著性差异(P>0.05)；心脑通络液低剂量组与地奥心血康组有显著性差异(P<0. 05)。结果表明，心脑通络液能升高NO水平，疗效优于地奥心血康组，有随着剂量增大而增加趋势。
       2.2  各组家兔血清中ET1的检测结果见表2。表2中所示，实验后假手术组、地奥心血康组、心脑通络液低剂量及心脑通络液高剂量组ET1数值均低于模型组，与之比较，地奥心血康组有显著性差异(P<0.05)，假手术组、心脑通络液低剂量组及心脑通络液高剂量组有极显著性差异(P<0.01)；心脑通络液高剂量组与低剂量组比较有显著性差异(P<0.05)；而假手术组、与低剂量组及高剂量组有极显著性差异(P<0.01)；心脑通络液低剂量组与地奥心血康组有显著性差异(P<0.05)。结果表明，心脑通络液能降低ET1水平，疗效优于地奥心血康组，有随着剂量增大而增加趋势。
       表1  各组家兔血清中NO的变化（略）
       与模型组比较,*P<0.01；与低剂量组比较, □ P<0.05；与高剂量组比较,●P<0.01;n=6
       表2  各组家兔血清中ET1的变化（略）
       与模型组比较，*P<0.01；与低剂量组比较， □P<0.05；与高剂量组比较，●P<0.01；n=6
       2.3  一氧化氮合酶原位杂交图像分析结果见表3。表3中所示，实验后假手术组、地奥心血康组、心脑通络液低剂量及心脑通络液高剂量组ecNOS mRNA数值均高于模型组，与之比较有极显著性差异(P<0.01)，地奥心血康组、心脑通络液低剂量组有极显著性差异(P<0.01)；心脑通络液高剂量组与低剂量组比较有极显著性差异(P<0.01)；而假手术组、高剂量组组间无显著性差异(P>0.05)；而假手术组、与低剂量组有极显著性差异(P<0.01)；心脑通络液低剂量组与地奥心血康组有极显著性差异(P<0.01)。结果表明，心脑通络液能升高ecNOS mRNA水平，疗效优于地奥心血康组，有随着剂量增大而增加趋势。
       表3  一氧化氮合酶原位杂交图像分析结果（略）
       与模型组比较，*P<0.01；与低剂量组比较，□P<0.01；与高剂量组比较，●P<0.01;n=6
       2.4  内皮素原位杂交图像分析结果见表4。表4中所示，实验后假手术组、地奥心血康组、心脑通络液低剂量及心脑通络液高剂量组ET1 mRNA数值均低于模型组，与之比较有极显著性差异(P<0.01)；假手术组、高剂量组有显著性差异(P<0.05)；假手术组与低剂量组有极显著性差异(P<0.01)；心脑通络液高剂量组与低剂量组比较显著性差异(P<0.05)；心脑通络液低剂量组与地奥心血康组有显著性差异(P<0.05)。结果表明，心脑通络液能降低ET1 mRNA水平，疗效优于地奥心血康组，有随着剂量增大而增加趋势。
       表4  内皮素原位杂交图像分析结果（略）
       与模型组比较，*P<0. 01，与低剂量组比较，□P<0. 05，与高剂量组比较，●P<0. 01;n=6
       　　3  讨论
       缺血性心脏病的基本治则：祖国医学中没有缺血性心脏病的概念，但结合现代医学的研究来看，根据缺血性心脏病临床特点，其大致相当于“胸痹”“心痛”之范畴。从中医学角度出发，缺血性心脏病为本虚标实，本虚以脏气虚亏为主，标实以痰淤痹阻为多见。气虚血淤是缺血性心脏病的主要病机，益气活血是缺血性心脏病的基本治则。益气除可使脉道之血在“气帅”之下而正常运行外，尚可助于化淤祛痰。这正是治病必求于本的体现。而化淤祛痰则是针正对其标，从而达到标本同治的目的。缺血性心脏病多发于老年人，老年人在生理上本虚，且在生理性本虚的基础上并存病理性本虚，病理性本虚乃有大病久病失于调理，或有客邪久留，或反复受邪，或劳倦过度，情志内伤，或房室不节，耗损真阳，伤之脏腑，而留发生缺血性心脏病之隐患。气虚不能摄血，可致血行淤滞不畅，气虚失于运化，可致痰浊内生，痰淤胶结痹阻心脉而发病。从现代研究来看［1］，痰淤相关有着其深刻的物质基础，两者在血液流变学、微循环、自由基及血液生化改变等方而都有相同或近似的改变，从另一角度说明了痰淤相关学说的客观性和科学性。可见益气活血，化淤祛痰作为治疗缺血性心脏病的基本大法，用于临床有良好疗效。中药心脑通络液的作用机理：NO是一种信使分子，它是由一个氧原子和一个氮原子构成的小分子化合物，它参与机体的多种生理功能，具有舒张血管、降低血压、调节冠脉循环、维持正常心输出量和心肌收缩力、保护心肌细胞、抑制血小板黏附聚集、防止血栓形成、抑制血管平滑肌细胞增殖作用［2］。NO是在一氧化氮合酶（NOS）的催化下，由L-精氨酸和氧生成的，心脏中NOS有三种同工酶，即ecNOS、neNOS和iNOS，生理情况下心脏中绝大多数为ecNOS，通过自分泌的形式抑制儿茶酚胺类的刺激肌力作用，促进心肌舒张，降低心肌耗氧量。内皮细胞中ecNOS合成释放NO是血管张力的主要调解因子，血管内皮细胞在基础状态下可维持释放NO，以维持一种基础的血管张力，内皮细胞的NO基础释放可作为内源性缩血管物质的缓冲，NO能灭活过氧化物，可防止细胞膜脂质过氧化反应［3］，缺血心肌中ecNOS基因表达减少或消失，故血清NO水平下降。实验研究结果显示，心脑通络液可拮抗这种病理改变，能从基因转录和翻译水平对ecNOS进行调节，显著升高家兔心肌缺血后血清中NO水平，保护缺血对心肌细胞和血管内皮细胞造成的损害。ET是目前已知作用最强和效应最持久的内源性血管活性肽。对全身血压、局部血流灌注及细胞增殖等具有重要作用，对心血管方面的影响最为广泛［4］。ET 有三种异构类型，即ET1, ET-2和ET-3。其中，ET1细胞产生的唯一家庭成员，它产生于血管平滑肌细胞。ET在心肌梗塞形成中是个重要因素，急性心肌缺血时血浆ET1显著升高，引起心功能恶化和梗塞扩展［5］。各种生长因子和血管蛋白调节ET1基因的转录，这些物质也能调节ET1 mRNA的翻译［6］,NO释放增加，可间接起到干扰ET的作用。实验研究结果显示，心脑通络液可以降低ET1水平，能从基因转录和翻译水平对ET1 mRNA进行调节，保护缺血对心肌细胞和血管内皮细胞造成的损害。心脑通络液是在长期临床中总结出来的经验效方，主要由黄芪、丹参、当归、川芎、桃仁、红花、水蛭、瓜蒌、半夏、甘草组成。该方具有益气活血、化淤祛痰的作用，针对缺血性心脏病的主要病机，具有扶正祛邪，标本兼治，有补有通，补而不滞邪，通而不伤正的特点，应用于临床疗效显著。心脑通络液重用黄芪、丹参，益气活血止痛，为方中君药。黄芪甘温，善于补气固表，可补心、肺、脾、肾之气虚，有补气行气之功，丹参与黄芪相配伍，是益气活血的代表典范；臣以桃仁、红花、水蛭、瓜蒌、半夏活血祛淤，化痰通络，与君药相伍可加强活血之效，并祛痰而不伤正，本组药物是针对缺血性心脏病发病时伴随的痰淤互结的病理状态而设；气为血帅，气行则血畅，活血不忘行气，故佐以川芎活血行气；甘草调和诸药，以之为使药。现代药理研究表明，黄芪具有强心、增加心排血量作用，还具有抗心肌缺血，保护实验性心肌梗塞及再灌注性心肌损伤，有明显的抗氧化作用。据报道，黄芪总皂苷能减轻缺血心肌损伤，缩小心肌缺血范围，对抗血清CPK, LPO浓度的升高，增加SOD含量，缩小心肌梗塞范围［7］；丹参在心血管系统应用中，是现代药理学研究最多的一种中药，具有强心、扩血管及抗血栓形成作用；还具有抗心肌缺血、抗凝、抗心肌缺血再灌注损伤及抗氧化等诸多作用［8,9］。当归、红花、川芎均有抑制血小板TXA2合成和促进PGI2生成、降低血液凝固性、增强纤溶酶活性、降低血液黏度及红细胞聚集性、促进红细胞变形能力等作用［10］；瓜蒌具有扩张冠脉、降低血脂、抗动脉粥样硬化作用［11］。综上所述，方中这些主要药物具有的这些药理作用,为心脑通络液组方的科学性进一步提供了理论依据，可见心脑通络液治疗作用是多方面多环节综合作用的结果，这种疗效的机理也值得进一步深入研究。
       　　参考文献：
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       基金项目：黑龙江省哈尔滨市科技攻关计划项目(No.2002AA9CS151-11)
       (黑龙江中医药大学附属第一医院，黑龙江 哈尔滨  150040)