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       【关键词】  新疆紫草；,,急性肝损
       摘要：目的研究新疆紫草提取物AEJI、AEJⅡ对小鼠急性四氯化碳（CCl4）性肝损伤的保护作用。方法腹腔注射0.1% CCl4橄榄油溶液制备小鼠急性化学性肝损伤模型，以肝脏系数、脾脏系数，血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天门冬氨酸氨基转移酶（AST），肝组织超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）、丙二醛（MDA）的水平和肝脏病理组织学变化为观测指标，观察AEJI、AEJⅡ对小鼠急性CCl4性肝损伤的影响。结果AEJI、AEJⅡ各剂量组均可显著降低小鼠血清ALT，AST活性（P<0.01）； AEJI高剂量组能使肝组织中SOD、GSHPx活性升高、MDA含量下降（P<0.05）；AEJ-I低剂量组可以升高肝组织GSHPx活性（P<0.05），而对肝组织其它指标均无明显影响（P>0.05）；AEJⅡ高剂量组能降低MDA含量（P<0.05），而对肝组织其它指标AEJⅡ各剂量组影响均不明显（P>0.05）；AEJI、AEJⅡ均可不同程度地改善肝脏病理组织性损伤。结论   AEJI、AEJⅡ对小鼠急性CCl4性肝损伤具有保护作用。
       关键词：新疆紫草；  急性肝损伤
       Protective Effects of Arnebia euchroma (Royle) Johnston Extracts Against CCl4induced Acute Liver Injury in Mice
       LIU Yan， MAI Erdan mahmut, NI Jiati rehemu
       (Department of Pharmaceutics, College of Pharmacy , Xinjiang Medical University , Urumqi  830054, China; First Affiliated Hospital of Xinjiang Medical University, Urumqi 830054, China)
       Abstract：ObjectiveTo investigate the protective effects of Arnebia euchroma (Royle) Johnston extracts (ab. AEJI、AEJII) against CCl4induced acute liver injury in mice.MethodsThe acute liver injury animal model was established in mice by intraperitoneal injection of 0.1% CCl4 olive oil .The coefficient of liver and spleen; alanine aminotransferase (ALT) and aspartate amiontransferase (AST) activities in serum ; superoxide dismutase (SOD) ，glutathione peroxidase (GSHPx) activities and malondialdehyde (MDA) content in liver homogenate were assayed and hepatic pathological changes were observed . ResultsAEJI and AEJII significantly decreased the activities of serum ALT and AST in mice (P<0.01) ; AEJI high dose group increased the activity of liver homogenate SOD ，GSHPx  and decreased the content of MDA (P<0.05) ; AEJI low dose group increased the activity of liver homogenate GSHPx (P<0.05) , but it had no  marked effect on other indexes of liver homogenate mentioned above（P>0.05）; AEJII high dose group decreased the content of MDA (P<0.05) , but AEJII had no marked effect on other indexes of liver homogenate mentioned above（P>0.05）; AEJI and AEJII improved liver histopathology injuries. ConclusionAEJI, AEJII showed protective effects on acute liver injury induced by CCl4 in mice.
       Key words：Arnebia euchroma (Royle) Johnston;  Acute liver injury 
   
　　新疆紫草［Arnebia euchroma (Royle) Johnston］又名新疆软紫草、新藏假紫草,主产于新疆，为维吾尔医常用药材。它的化学成分与硬紫草极为相似，紫草素及其衍生物的含量比硬紫草高8倍，被列为正品。药理学研究表明，新疆紫草具有抗炎、抗生育、抗肿瘤、杀菌抗病毒以及免疫调节等作用［1~3］。我们分别制备了新疆紫草的脂溶性和水溶性提取物,并观察了其对小鼠急性CCl4性肝损伤的保护作用,初步探讨了其作用机理，旨在为新疆紫草作为新型保肝药物提供实验依据。
       　　1   仪器与材料
　　
　　1.1  药品与试剂 新疆紫草(简称AEJ，新疆参茸药业有限责任公司，批号20040819；将其干燥根粉碎，经提取分离得到其脂溶性提取物AEJⅠ和水溶性提取物AEJⅡ；临用前用0.5 % 羧甲基纤维素钠配制成所需浓度的混悬液备用)；联苯双酯滴丸(规格1.5 mg/丸，北京协和制药厂，批号04040109；临用前用0.5 % 羧甲基纤维素钠配制成所需浓度的混悬液备用）；四氯化碳(CCl4，分析纯，上海华兴化学试剂厂，批号04040109；临用时配成0.1 % CCl4橄榄油溶液)；超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽过氧化物酶（GSHPx）和丙二醛（MDA）试剂盒（均购于南京建成生物工程研究所）。
       1.2  动物昆明种小鼠，♀♂各半，体重（20±2）g，由新疆医科大学实验动物中心提供。
       1.3  仪器 WH861旋涡混合器（上海环球物化仪器厂）；LD52A低速离心机（北京医用离心机厂）；DY891型电动玻璃匀浆机（宁波新芝生物科技股份有限公司）；AEROSET型全自动生化分析仪（美国雅培公司）；721型分光光度计（上海第三分析仪器厂）。
       　2  方法
       2.1  动物分组与处理 取80只昆明种小鼠，按体重、性别随机分成8组，每组10只，即正常对照组、模型组、溶剂对照组、阳性对照组(即联苯双酯组，0.2 g・ kg1・ d1)、AEJI低剂量组（0.4 g・ kg1・ d1）、AEJⅠ高剂量组（0.8 g・kg1・d1）、AEJⅡ低剂量组（2 g・kg1・d1）和AEJⅡ高剂量组（4 g・kg1・d1）。正常对照组和模型组给予蒸馏水，溶剂对照组给予0.5 % 羧甲基纤维素钠。以上各组均灌胃给药，连续7 d，灌胃容积为20 ml・kg1・d1。
       2.2  动物模型的建立［4］第6 天给药后1 h，除正常对照组外，其余各组均腹腔注射0.1 % CCl4橄榄油溶液10 ml・ kg1，正常对照组腹腔注射等容积的橄榄油。随即禁食不禁水，24 h后称重，采集血和肝脏、脾脏标本，作相关检测。
       2.3  检查项目及方法
       2.3.1   肝脏、脾脏系数的检测  小鼠取血后立即断颈椎处死，剖腹取肝脏、脾脏，用4 ℃生理盐水冲洗，滤纸吸干，称重，计算肝脏、脾脏系数。脏器重量(g) / 体重(g) × 100 %  =  脏器系数(%)
       2.3.2  生化指标的检测  实验结束时，每鼠摘眼球取血，3 500 r・min1离心10 min ,分离血清，用全自动生化分析仪检测血清ALT、AST的活性；取肝右叶相同部位的一小块肝组织，以4 ℃生理盐水制成10% 肝匀浆，2 000 r・min1离心10 min,取上清液按试剂盒说明书测定肝组织SOD，GSHPx的活性及MDA的含量。
       2.3.3  肝脏病理组织学检查取每只小鼠肝左叶相同部位的一小块肝组织，用10 % 甲醛溶液固定，石蜡包埋切片，HE染色，光镜下观察肝脏病理组织学改变。
       2.4  统计学处理用SPSS10.0软件统计分析，计量资料数据以±s表示，组间差异显著性检验采用单因素方差分析。
       　　3  结果
       3.1  新疆紫草提取物对小鼠急性CCl4性肝损伤肝脏、脾脏系数的影响  与正常对照组比较，CCl4肝损伤模型组小鼠肝脏系数明显增加（P<0.01），脾脏系数虽有增加，但其差异无统计学意义（P>0.05）；与模型组比较，AEJ虽有降低肝脏、脾脏系数的趋势，但其差异无统计学意义（P>0.05）。结果见表1。
       3.2  新疆紫草提取物对小鼠急性CCl4性肝损伤血清ALT，AST活性的影响  与正常对照组比较，CCl4肝损伤模型组小鼠血清ALT，AST活性显著升高（P<0.01）,说明造模成功；与模型组比较，溶剂（0.5 % 羧甲基纤维素钠）对照组并不能改变这种情况（P>0.05），AEJI，AEJII各剂量组均可明显降低小鼠血清ALT，AST的活性，其差异具有统计学意义（P<0.01）。结果见表2。
       3.3  新疆紫草提取物对小鼠急性CCl4性肝损伤肝组织SOD、GSHPx 活性和MDA含量的影响与正常对照组比较，CCl4肝损伤模型组小鼠肝组织SOD、GSHPx活性显著降低（P<0.01），MDA含量显著增加（P<0.01）；与模型组比较， AEJ-I高剂量组能使肝组织SOD和GSHPx活性升高（P<0.05）、MDA含量降低（P<0.05）；AEJ-I低剂量组可以升高GSHPx活性（P<0.05），而对肝组织其它指标均无明显影响（P>0.05）；AEJ-II高剂量组能降低MDA含量（P<0.05），而对肝组织其它指标AEJII各剂量组影响均不明显（P>0.05）。结果见表3。
       表1  新疆紫草提取物对小鼠急性CCl4性肝损伤肝脏、脾脏系数的影响（略）
       与正常对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；n=10
       表2  新疆紫草提取物对小鼠急性CCl4性肝损伤血清ALT，AST活性的影响（略）
       与正常对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01;与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01;n=10
       表3  新疆紫草提取物对小鼠急性CCl4性肝损伤肝组织SOD，GSHPx 活性和MDA含量的影响（略）
       与正常对照组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01;与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01;n=10
       3.4  肝脏病理组织学检查  正常对照组小鼠肝细胞结构正常，未见病理改变；模型组及溶剂对照组小鼠肝细胞有较多点状坏死和灶性坏死，肝细胞肿胀较明显，呈水样改变，间质及汇管区有不等量的炎细胞浸润；AEJI、AEJII组小鼠肝脏病变明显减轻，有散在的点状坏死和少量灶性坏死，汇管区炎细胞浸润减少，水样变性基本消失，大部分肝细胞结构正常，提示新疆紫草具有保护肝细胞膜、促进肝组织修复的作用。
       　　4  讨论
       建立实验性肝损伤模型，是筛选保肝药所必需的，对研究肝病的发病机制和保肝药物的作用原理亦很重要。体内模型特别是化学性肝损伤模型，是目前国际上常用的肝损伤模型，具有操作简便，模型病理模拟性、重复性好等优点。其中，CCl4是经典的化学性肝损伤动物模型的毒剂，在整体或离体被广泛用于肝坏死及肝损伤的研究，此模型指标明确、重复性好，能准确反映肝细胞的功能、代谢及形态变化。血清转氨酶是肝细胞损害的敏感标志，在一定程度上反映了细胞损害和坏死程度，而血清ALT，AST的活性反映肝损害程度更具有特异性。自由基和脂质过氧化在肝损伤中起着十分重要的作用。SOD可以催化超氧化物自由基，并清除自由基，以维持体细胞不受自由基损害。GSHPx是内源性抗氧化系统的重要组成部分，在人体的各组织中以肝脏的GSHPx活性最高。GSHPx在保护肝细胞免遭过氧化损害中起重要作用。MDA是脂质过氧化的最终产物，可严重破坏细胞膜的结构，导致细胞肿胀、坏死。因此，SOD， GSHPx活性的降低和MDA含量的增加可以间接反映脂质过氧化损害的程度。本实验结果表明，CCl4可使小鼠血清ALT，AST的活性显著升高，抗氧化酶SOD，GSHPx活性降低，脂质过氧化物MDA含量增加，表明CCl4引起肝损伤的机制与抗脂质过氧化有关。对CCl4引起的肝损伤动物模型，AEJ-I，AEJII组均可明显降低小鼠血清ALT，AST的活性； AEJ-I高剂量组能使肝组织SOD和GSHPx活性升高、MDA含量降低，AEJI低剂量组可以升高GSHPx活性， AEJII高剂量组能降低MDA含量。提示新疆紫草可能通过清除自由基、保护细胞膜和抗脂质过氧化而发挥肝细胞保护作用。病理组织学检查是衡量肝损伤的一个较为直观的指标，能较客观地反映肝损伤的程度。新疆紫草两种提取物均可不同程度地改善CCl4所致小鼠肝脏病理性损伤，提示对肝细胞有一定保护作用。综上分析，无论从肝脏的生化指标还是病理组织学检查，从新疆紫草中所得到的两种不同提取物对CCl4所致的肝损伤均具有保护作用。提示新疆紫草在肝病治疗中具有良好的应用前景，其确切机制有待进一步研究。我们将进一步深入探讨新疆紫草的提取分离方法，研究其保肝作用及其它药效活性，为进一步开发利用新疆的紫草资源提供基础资料,为研制和开发新药做准备。
       　　参考文献：
       ［1］   方文贤，宋崇顺，周立孝.医用中药药理学［M］.北京：人民卫生出版社，1998：5.
       ［2］  卢贺起，丁家欣，魏雅川.紫草的实验研究进展［J］.中国中医药信息杂志，1998，5(1):20.
       ［3］  葛  峰，王晓东，王玉春.药用紫草的研究进展［J］.中草药，2003，34(9):附7.
       ［4］  徐淑云，卞如濂，陈  修.药理实验方法学［M］.北京：人民卫生出版社，2002：1346.
       (新疆医科大学药学院，新疆 乌鲁木齐  830054；新疆医科大学第一附属医院，新疆 乌鲁木齐  830054)