文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【关键词】  益气活血复方；,,自发性高血压大鼠；,,,左室肥厚；,,形态结构
       摘要：目的探讨益气活血复方对自发性高血压大鼠（spontaneously hypertensive rats, SHR）左室肥厚(left ventricular hypertrophy, LVH)及左室心肌形态结构的影响。方法雄性14周龄SHR 50只，随机分为复方高剂量组（SHRY1）、复方中剂量组（SHRY2）、复方低剂量组（SHRY3）、模型对照组（SHRC）、硝苯地平组（SHRX）。监测尾动脉收缩压（systolic blood pressure, SBP），每4周1次，8周后取材。测算心脏重量指数（heart weight index, HWI）、左室质量指数（left ventricular mass index, LVMI）；光镜、透射电镜观察左室心肌细胞形态结构的改变。结果（1）与SHRC组比较，灌胃4，8周后，各治疗组SBP显著降低（P＜0.01）；（2）与SHRC组比较，灌胃8周后，SHRY1、SHRY2及SHRX组HWI、LVMI均明显降低（P＜0.05或P＜0.01）；（3）光镜观察发现：SHRC组心肌纤维增粗或萎缩、断裂或排列紊乱，部分心肌细胞核肥大或固缩；透射电镜观察发现：SHRC组可见部分心肌细胞核膜皱缩，核染色质凝聚、趋边，偶见核固缩，部分心肌细胞线粒体明显肿胀。与SHRC组比较，SHRY1组上述病变明显减轻；SHRY2、SHRX组病变有所改善；SHRY3组病变改善不明显。结论 益气活血复方、硝苯地平均能降低SBP、HWI、LVMI，减缓SHR左室肥厚形成、发展过程中左室组织结构的破坏。
       关键词：益气活血复方；  自发性高血压大鼠；   左室肥厚；  形态结构
       Effects of Yiqihuoxue Decoction on the Morphological Structure of Myocardial Cells in Left Ventricle of Spontaneously Hypertensive Rats
       ZHANG Chun,  CHEN  Liguo,  DAI Yong ,  HU Xiaoqin, ZHENG Peie
       (The First Affiliated Hospital, Jinan University Guangzhou, Guangdong 510632, China;  Medical College, Jinan University Guangzhou, 510632, China; Nanhai District Hospital of Traditional Chinese Medicine, Foshan, Guangdong 528200,China)
       Abstract：ObjectiveTo explore the effects of Yiqihuoxue decoction on left ventricular hypertrophy and the morphological structure of myocardial cells in left ventricle of spontaneously hypertensive rats(SHR). MethodsFifty fourteenweekold male SHR were divided randomly into 5 groups: SHRY1(treated with high dose of Yiqihuoxue decoction), SHRY2(treated with moderate dose of Yiqihuoxue decoction), SHRY3(treated with low dose of Yiqihuoxue decoction), SHRC(untreated), SHRX(treated with nifedipine). The systolic blood pressure(SBP) was measured before and during treatment every four weeks. After 8 weeks of treatment, all rats were killed. Heart weight index(HWI), left ventricular mass index(LVMI) were calculated. The morphological and structural changes of myocardial cells in left ventricle of SHRs were observed with light microscope and transmission electron microscope(TEM). Results(1) After 4 or 8 weeks" treatment,  compared each treatment group with SHR-C,the SBP decreased significantly(P＜0.01).  (2)After 8 weeks" treatment, compared SHRY1, SHRY2 and SHRX with SHRC respectively, both HWI and LVMI decreased significantly(P＜0.05 or P＜0.01). (3) The results under light microscope were:in SHRC, cardiac muscle fibers were swollen, decreased, disrupted or disorganized arrangement, as well as some hypertrophic nuclear or pyknosis of myocardial cells. The results under TEM were: in some left ventricular tissues obtained from SHRC group, nuclear membrane shrank and nuclear chromatin condensed and congregated under nuclear membrane like speckle, abutting against the nuclear envelope; and pyknosis was observed by chance. Mitochondria of some myocardial cells were markedly swollen with some disorganized or disrupted mitochondrial cristae which displayed like uneven vacuole. Compared with SHRC,the above-mentioned pathological changes of SHRY1 were less obvious; the pathological changes ameliorated slightly in SHRY2 and SHRX; but there was no significant improvement in SHRY3. ConclusionYiqihuoxue decoction and nifedipine can reduce the SBP, HWI, LVMI and slow down the damages of left ventricle in SHRs during the process of LVH.
       Key words：Yiqihuoxue decoction;  Spontaneously hypertensive rats;  Left ventricular hypertrophy;  Morphological structure
   
　　左室肥厚（LVH）是心肌细胞肥大所致的心脏扩大及左室重量增加，多发于高血压病中晚期，其机理目前尚未完全阐明。中医学认为，高血压LVH的可能机制在于久病气虚血淤，本虚标实。据此，本研究选择益气活血法作为防治LVH的主要治法，自拟益气活血复方，旨在探讨不同剂量益气活血复方对自发性高血压大鼠LVH及左室心肌形态结构的影响。
       　　1  材料与方法
       1.1  药物益气活血复方由人参、黄芪、当归、川芎、赤芍、丹参、葛根、降香等组成（广州二天堂医药公司提供），加水煎成200 ％浓度（即1 ml药液含2 g生药）。硝苯地平，10 mg/片（广东华南制药厂生产，批号：040602）。
       1.2  动物及分组  清洁级雄性14周龄SHR大鼠50只，体重(257±12) g，购自上海斯莱克实验动物有限责任公司。普通饲料喂养，避免噪音及其他干扰，观察期为8周。SHR随机分为5组，即复方高剂量组（SHRY1）、复方中剂量组（SHRY2）、复方低剂量组（SHRY3）、模型对照组（SHRC）、硝苯地平组（SHRX），每组10只。按体表面积法［1］换算：大鼠复方每日用量为13 g/kg体重，硝苯地平每日用量为5.4 mg/kg体重。以复方换算剂量为SHRY2组给药剂量，SHRY1、SHRY3组分别为其3、1/3倍；SHRX组按大鼠换算剂量灌胃。即：SHRY1、SHRY2、SHRY3、SHRX组分别予以39 ，13，4.3 ，5.4 mg/kg・d药物灌胃；SHRC组予等体积蒸馏水灌胃。动物禁食12 h后灌胃，1次/d。将药物按不同剂量以蒸馏水稀释，最终每只动物均予5 ml液体灌胃。干预8周间，每周称重1次，根据体重调整药量。
       1.3  指标检测
       1.3.1  SBP测定大鼠40 ℃预热10 min后，用RBP1 B型大鼠尾压心率测定仪（中日友好临床医学研究所研制）测量大鼠清醒、安静状态时尾动脉SBP，连续测量3次，每次间隔约1 min，取其均值作为该SHR的SBP（kPa）。实验前测压1次，以后每4周测压1次。
       1.3.2   HWI、LVMI测定将禁食12 h的SHR用3 ％戊巴比妥钠行腹腔注射（30 mg/kg），麻醉后再次称重，开胸取心，冲洗血污，滤纸吸干水份后，称取心脏重量。沿房室交界处去除心房、大血管及右心室游离壁，将左室游离壁和室间隔准确称重，作为左心室重量。心脏重量、左心室重量与动物体重的比值分别作HWI（mg/kg），LVMI（mg/kg）。
       1.3.3  光镜标本制备  取左室游离壁水平轴中部心肌约1.5 cm × 0.8 cm × 0.4 cm，立即置于4％多聚甲醛液（pH 7.4、4℃）固定24 h以上，常规石蜡包埋，切片（4 μm）HE染色，光镜观察。
       1.3.4  电镜标本制备 每组随机取2只SHR，取其左室游离壁中部心肌约2 mm × 3 mm × 5 mm，立即置于2.5 %戊二醛固定液1 h，在垫有冰块的平皿上迅速切取成约1 mm×1 mm×1 mm的组织块，置于新鲜的2.5 %戊二醛固定液4 h以上，低温保存。0.1 mol/L磷酸缓冲液洗涤3次后，加入1 ％锇酸固定液，4 ℃下固定1.5 h。常规乙醇、丙酮逐级脱水，Epon 812树脂平板定向包埋。用Reichert Jung Ultracut E 超薄切片机先切约1.0 μm半薄切片，1 ％甲苯胺兰染色，光镜观察定位，再行超薄切片。超薄切片醋酸双氧铀硝酸铅双重染色，JEOL100CXⅡ/T透射电镜观察、摄片。
       1.4  统计学处理所有计量资料均采用 ±s表示，对来自同一整体的数据进行正态性检验。组间比较，采用单因素方差分析；组内比较，采用t检验。取检验水准α=0.05，运用SPSS 11.5统计软件进行统计学分析。
       　2   结果
       2.1  各组SBP、HWI、LVMI比较  随着周龄增加，SHRC组SBP逐渐升高（P＜0.05或P＜0.01）。灌胃4周、8周后，与SHR-C比较，各治疗组SBP均明显降低（P＜0.01）。灌胃4周后与治疗前比较，SHRY1、SHRY2、SHRX组SBP均降低（P＜0.05或0.01）。灌胃8周后与治疗前比较，各治疗组SBP均明显降低（P＜0.01）。灌胃8周后，SHRY1、SHRY2、SHRX组HWI、LVMI均较SHRC组降低（P＜0.05或P＜0.01）。结果见表1。
       表1  各组SBP、HWI、LVMI比较（略）
       与SHRC比较，#P＜0.05，# #P＜0.01；与SHRY3比较，●P＜0.05；与灌胃前比较，▲P<0.05，▲▲P<0.01；n=8
       2.2  各组SHR左室心肌形态结构比较
       2.2.1  心肌光镜检查结果 SHRC组心肌纤维增粗，间距缩小或心肌纤维萎缩，间距增大，部分心肌纤维断裂或排列紊乱。伴随明显大面积心肌水样变性，部分心肌细胞核肥大或固缩。细胞内容物呈颗粒状，断裂或融合，甚至有坏死，血管壁增厚。与SHRC组比较，SHRY1组上述病变明显减轻；SHRY2、SHRX组病变有所改善；SHRY3组病变改善不明显。见图1~5。
       2.2.2  心肌电镜检查结果  SHRC组可见凋亡心肌细胞。凋亡心肌细胞核核膜皱缩，染色质凝聚、趋边，在核膜下聚集呈斑块状；部分核仁消失，偶见胞核固缩。肌原纤维模糊、排列紊乱、部分溶解，以闰盘两侧为重。部分心肌细胞线粒体肿胀，嵴紊乱、断裂或溶解，内有大小不等的空泡区形成。与SHRC组比较，SHRY1组上述病变明显减轻；SHRY2、SHRX组病变有所改善；SHRY3组病变改善不明显。见图6~11。
       图1  SHRC组   (×400)（略）           
       图2  SHRY1组   (×400)（略）
       图3  SHRY2组  (×400)（略）       
       图4  SHRY3组   (×400)（略）
       图5  SHRX组   (×400)（略）
       图6  SHRC组   (×13000) （略）        
       图7  SHRC组   (×10000)（略）
       图8  SHRY1组  (×8000)（略）        
       图9  SHRY2组  (×13000)（略）
       图10  SHRY3组  (×10000) （略）        
       图11  SHRX组   (×8000)（略）
       　　3  讨论　
       近年研究表明［2~4］：高血压LVH与久病气虚血淤关系密切，益气活血法对左室重构有影响；钙通道阻滞剂（calcium channel blocker, CCB）能逆转高血压LVH。既往的实验研究［5］已证实：益气活血复方具有CCB样作用。高血压状态下，心肌压力负荷过重，为维持心脏功能，早期心肌纤维代偿性过度收缩，形态改变为肌节错位，随后出现心肌细胞代偿性增生，这种增生早期可提高心脏功能，维持心脏正常泵血。然而，随着代偿性增生的发展，心肌细胞与供其血液的毛细血管比例失调，导致心肌细胞能量供应相对不足［6］。线粒体作为心肌细胞的能量代谢中心，其结构与功能受损，表现为线粒体肿胀、嵴溶解，甚至出现部分肌纤维溶解现象［7］。益气活血复方选用人参、黄芪、当归补气养血；丹参、川芎、赤芍活血行气止痛；降香行气止痛、活血止血；葛根扩张冠状血管，减少外周阻力而降血压。研究发现：人参皂苷为人参的主要有效成分之一，人参皂苷Rb1能阻滞细胞膜上钙离子通道的活动，减轻细胞内钙离子的积聚而抑制细胞凋亡［8］；黄芪具有双向免疫调节、扩张血管、抗缺氧等功能；当归中阿魏酸有很强的抗氧化与清除氧自由基，降血脂及改善动脉粥样硬化，抗菌、抗血栓等作用［9］；黄芪、当归配伍具有较佳的抗血小板聚集作用［10~12］；丹参能拮抗心肌细胞Ca2+内流，具有CCB样作用［13］，并有拮抗血管紧张素Ⅱ(AngiotensinⅡ, AngⅡ)促心肌细胞肥大的作用［14,15］；川芎、赤芍合用可明显降低血清胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白，在抗氧化及保护血管内皮细胞功能方面，有协同作用［16］。本实验结果显示：益气活血复方、硝苯地平均能降低SBP、HWI、LVMI，减缓SHR左室肥厚形成、发展过程中左室组织结构破坏。两者防治、逆转LVH的可能机制为：① 扩张阻力血管，减轻心脏后负荷，心肌做功减少，LVH减轻。② AngⅡ通过刺激交感神经系统兴奋或组织局部AngⅡ直接促进心肌蛋白合成，使心肌细胞生长肥大而致LVH，AngⅡ的这些作用依赖于细胞内钙水平，需要钙离子介导。CCB通过减少胞内钙而阻断AngⅡ的作用，使LVH减轻。益气活血复方逆转LVH的具体途径、机制有待进一步研究。
       　　参考文献：
       ［1］  徐叔云. 药理实验方法学，第2版［M］.北京: 人民卫生出版社，1991：1535.
       ［2］  汪  何，严序炳，李爱华，等. 益气活血祛痰法对老年性左心室肥厚的逆转作用［J］.广州中医药大学学报， 2002，19(1): 17.
       ［3］  潘  毅，邓中炎， 严  灿. 心肌康逆转高血压左室肥厚的临床研究［J］.中国中医药科技，2001，8(4): 213.
       ［4］  张洪梅，高孝斗，许华强，等. 国产硝苯地平控释片治疗高血压并左室肥厚的临床研究［J］.临床荟萃， 2003，18(1): 5.
       ［5］  陈利国， 孙兆贵，王  蕾，等. 血瘀证与血管内皮细胞内游离钙浓度关系的实验研究［J］.山东中医药大学学报，2001， 25(1): 55.
       ［6］  刘治全，牟建军.  高血压病诊断治疗学［M］. 北京： 北京大学出版社，1998：49.
       ［7］  Weiss JN,  Korge P,  Ping P,  et al. Role of mitochondrial permeability transition in myocardial disease［J］. Circ Res, 2003,  2293(4): 292.
       ［8］  李泰平. 人参皂苷药理活性的研究进展［J］.生物学教学，2003，28(4): 1.
       ［9］  王  芳，李  东. 当归的化学及药理研究进展［J］.中国药房， 2003，14(10): 630.
       ［10］  滕佳林，邹积隆，夏丽英， 等. 黄芪配伍当归益气活血作用研究(一)不同配伍比例对“血瘀”大鼠血小板聚集的影响［J］.中药药理与临床，2003，19(4): 1.
       ［11］  滕佳林，邹积隆，张  静. 黄芪配伍当归益气活血作用研究(二)不同配伍比例对“血瘀”大鼠全血及血浆比粘度的影响［J］.中药药理与临床，2003，19(6): 9.
       ［12］  滕佳林，夏丽英，孙敬昌. 黄芪配伍当归益气活血作用的实验研究(三)对气虚血瘀模型大鼠白细胞粘附性及粘附分子表达的影响［J］.中药药理与临床， 2003，20(1): 4.
       ［13］  肖  准，彭文珍， 王正荣. 丹参抑制牵张诱导的心肌细胞NFκB激活的观察［J］.华西药学杂志，2000，15(4): 257.
       ［14］  郭自强，牛福玲，朱陵群，等. 丹参素对血管紧张素Ⅱ致心肌肥大的影响［J］.北京中医药大学学报，2000， 23(suppl): 30.
       ［15］  程俊彦，熊  玮，郑  智，等. 丹参逆转自发性高血压大鼠左室肥厚及其对血管紧张素Ⅱ受体1表达的影响［J］.中国中西医结合急救杂志，2004，11(2): 99.
       ［16］  梁日欣，黄璐琦， 刘菊福，等. 药对川芎和赤芍对高脂血症大鼠降脂、抗氧化及血管内皮功能的实验观察［J］.中国实验方剂学杂志，2002，8(1): 43.
       基金项目：广东省中医药局立项课题（No.1050116）
       (暨南大学附属第一医院，广东 广州   510632；暨南大学医学院，广东 广州  510632；广东省佛山市南海区中医院  528200）