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       【关键词】  远志；,,蜜炙；,,远志总皂苷；,,远志皂苷元；,,比色法；,,浸出物；,,薄层鉴别
       摘要：目的比较远志蜜炙前后总皂苷和浸出物的含量；初步比较远志蜜炙前后化学成分的异同。方法以远志皂苷元为对照品，采用香草醛-高氯酸显色法于560 nm波长处分别测定生远志和蜜远志中远志总皂苷的含量；采用药典方法测定和比较远志蜜炙前后70％乙醇浸出物的含量；采用薄层鉴别方法比较生远志和蜜远志正丁醇提取部位化学成分的异同。结果生远志中的远志总皂苷含量为2.096%、蜜远志中的远志总皂苷平均含量为2.207% ；蜜远志的浸出物为50.50％，生远志的浸出物为36.53％。生远志正丁醇部位色谱和蜜远志正丁醇部位色谱基本一致：紫外灯（365 nm）下二者在相应位置呈相同颜色荧光，香草醛硫酸乙醇溶液显色后二者在相应位置的几个斑点均呈紫罗兰色，且远志皂苷元对照品斑点呈紫罗兰色，而在与其相应位置生远志供试品和蜜远志供试品均未检视到相应斑点。结论 远志蜜炙后化痰止咳作用增强的原因在于蜜炙能增加总皂苷的溶出和有效成分的浸出量，蜜炙对远志化学成分的影响在于量变而非质变。
       关键词：远志；  蜜炙；  远志总皂苷；  远志皂苷元；  比色法；  浸出物；  薄层鉴别
       Comparative Study on Contents of Radix Polygala and the Prepared
       XIA Houlin, DONG Min, SHENG Yan, WU Xi, TAN Ling, ZHOU Xiaomei, WANG Jian
       (Chengdu College of Traditional Chinese Medicine & Pharmacology, Chengdu 610075, China)
       Abstract：ObjectiveTo compare the contents of total onjisaponins and eluate between the crude and the prepared,and compare the chemical constituents between them.MethodsThe contents of total onjisaponins were determined with colorimetry of vanillin-perchloric acid method and detected at 560nm.The 70% ethanol eluate was determined and compared with pharmacopoeia method.The similarities and differences of the n-butanol extractant between the crude and the prepared was compared by TLC.ResultsThe average content of total onjisaponins of the crude was 2.096%, and of the 5 batches prepared was 2.207% ; The average content of eluate of the crude was 36.53%, and of the 5 batches prepared was 50.50%.The TLC of them were concordance.They presented the same color fluorescence in the corresponding position at the ultraviolet light(365nm). After the vanillic aldehyde sulphuric acid ethanol solution developed, violet color spots presented at the same place. Reference substance of Polysaccharide presented violet color ,but in the corresponding position the crude and the prepared didn"t show the spots . It proves that the chemical constituents of Polygala Root may not have changed after stir-baked with honey.ConclusionBy stir-baking with honey which can increase the elution of the total onjisaponins and the effective contents may result in the enhance of effect of the Polygala Root, and it can only affect the contents of the onjisaponins but not change the structure of the compounds.
       Key words：Radix Polygala;  Stir-baking with honey;  Onjisaponins;  Polysaccharide;   Colormetry；  Eluate;  TLC
   
　　远志为远志科植物远志Polygala tenuifolia Willd. 或卵叶远志Polygala sibirica L.的干燥根［1］。本品始载于《神农本草经》，味苦、辛、性微温，归心、肾、肺经，具有安神益智、祛痰开窍、消肿散痈之功效。其化学成分主要有远志皂苷（Onjisaponin）A、B、C、D、E、F和G 7种齐墩果酸型三萜皂苷类；远志酮（Onjixanthone）Ⅰ和Ⅱ，1羟基3，6，7三甲基吨酮等吨酮类；哈尔满、1丁氧羰基β咔啉等生物碱类；糖及糖苷类和脂肪油类等［2］。中医炮制理论认为蜜炙远志能增强其化痰止咳的作用，历来就有“蜜炙甘缓而润肺”之说［3］。现代研究证实远志的化痰止咳作用的主要活性成分是远志皂苷［2］。近年来关于生远志化学成分研究的报道很多，但有关于远志蜜制前后总皂苷类成分含量的比较未见相关报道。本实验采用香草醛-高氯酸比色法测定远志蜜炙前后总皂苷类成分的含量［4］，初步研究蜜炙对远志中的总皂苷类成分的含量的影响，同时，测定并比较蜜远志和生远志的浸出物，旨在为蜜炙远志提供科学依据。探求蜜远志和生远志之间的相关性，为蜜炙远志的“解毒”作用提供物质基础研究［5］。
       　　1  器材
       8500MC分光光度计（无锡科达仪器厂）；电子天平（德国塞多利斯）。远志购自成都市场，经本校卢先明老师鉴定为远志Polygala tenuifolia Willd.的干燥根；蜜远志按《中国药典》2005版Ⅰ部炮制通则项下进行炮制（每100 kg远志用蜜量20 kg）。远志皂苷元对照品：中国药品生物制品检定所提供（批号为111572200301）。所用试剂均为分析纯。
       　　2  方法与结果
       2.1  对照品溶液的制备精密称取远志皂苷元对照品适量，加甲醇制成每毫升含0.2 mg。
       2.1.1  标准曲线的制备精密移取对照品溶液0.1，0.2，0.3，0.4，0.5 ml于5支15 ml具塞试管中，水浴挥尽溶剂，依次加入5%香草醛溶液0.4 ml，高氯酸1.6 ml，室温放置10 min后于60℃水浴加热15 min，取出立即冰水冷却2 min，加乙酸10 ml，摇匀，以相应试剂作空白，照紫外可见分光光度法［1］于560 nm处测吸光度。以远志皂苷元的量为横坐标，以吸光度为纵坐标，得回归方程为A=3.486 5X-0.011 2（A为吸光度，X为远志皂苷元量），r=0.999 5（n=5），线性范围为0.024 4~0.122 mg。
       2.1.2  稳定性实验精密移取对照品溶液、供试品溶液于15 ml具塞试管中，依法显色后每间隔10 min测定1次。结果表明吸光度在1 h内基本稳定。
       2.1.3  精密度实验对同一蜜远志供试品溶液依法平行测定5次， RSD为1.7%。
       2.1.4  重现性实验对同一批次蜜远志依法平行测定5次，RSD为3.9%。
       2.1.5  回收率实验取已知含量的蜜远志，加入对照品适量，依法测定，计算回收率。平均回收率为98.92%，RSD为3.8%（n=5）。
       2.2  样品总皂苷含量对同一批生远志及相应5批炮制的蜜远志依法进行总皂苷的含量测定，结果见表1（注：以下数据均以干燥品计）。5批蜜远志的总皂苷含量平均为2.207％，RSD=2.72(n=5)。经统计学检验可知蜜远志的总皂苷含量比生远志的总皂苷含量高。若将蜜远志中的蜜量按1/6扣除后，总皂苷含量平均为2.648％。
       表1  生远志、蜜远志总皂苷含量（略）
       2.3  浸出物的比较
       2.3.1  方法分别取生远志和蜜远志粗粉4 g，精密称定。置锥形瓶中加石油醚（30~60℃）40 ml，加热回流1 h。滤过。药渣用适量石油醚洗涤，弃去石油醚液，药渣挥干。置锥形瓶中，精密加入70％乙醇100 ml，密塞。称定重量。静置1 h后，连接回流冷凝管，加热至沸腾并保持微沸1 h，放冷后取下锥形瓶，再称定重量，用70％乙醇补足减失的重量，摇匀，用干燥滤器滤过，精密量取滤液25 ml置干燥至恒重的蒸发皿中，水浴蒸干后于105℃干燥3 h置干燥器中冷却30 min，迅速精密称定重量。以干燥品计算醇溶性浸出物的含量，并比较。
       2.3.2  结果见表2。
       表2  生远志、蜜远志醇溶性浸出物含量（略）
       蜜远志的浸出物含量平均为50.50％，RSD=3.7％(n=5)。经统计学检验可知蜜远的浸出物含量明显比生远志的浸出物含量高。若将蜜远志中的蜜量按1/6扣除后，浸出物含量平均为60.6％。
       2.4  TLC比较取生远志粉末1 g，加石油醚（30~60℃）20 ml回流提取1 h，滤过，药渣和滤纸挥尽石油醚后，加95％乙醇20 ml回流提取1 h，趁热过滤，滤液水浴蒸干，残渣用水10 ml溶解，依次用水饱和醋酸乙酯提取2次（20，20 ml），水层再用水饱和正丁醇提取2次（20，20 ml），合并正丁醇层，水浴蒸干，残渣用5 ml甲醇使溶解，作为生远志供试品溶液。另取蜜远志粉末1 g，同法制成蜜远志供试品溶液。再取远志皂苷元对照品，加甲醇制成每毫升含0.5 mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法（附录Ⅵ B）试验，吸取上述3种溶液各4～6 μl,分别点于同一硅胶G薄层板（厚500 μm）上，以三氯甲烷甲醇水（65∶35∶10）10℃以下放置的下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5％香草醛硫酸无水乙醇溶液，在105℃加热至斑点显色清晰，分别置日光和紫外光灯（365 nm）下检视。结果见图1~2。
       1，2.生远志供试品  3.远志皂苷元对照品  4，5.蜜远志供试品 
       
　　图1  紫外光色谱（略）           
       图2   显色后可见光色谱（略）
       结论：由图1、2可知生远志供试品显色前荧光色谱、显色后可见光色谱与蜜远志色谱基本相符；由图2可知生远志供试品和蜜远志供试品对应的几个斑点均呈紫罗兰色；图1检视到远志皂苷元对照品的斑点，图2中远志皂苷元对照品斑点呈紫罗兰色，而在相应位置生远志供试品和蜜远志供试品均未检视到相应斑点。以上可以说明远志蜜炙后其TLC图谱并未发生改变，即说明蜜炙前后远志中的成分可能并未改变。
       　3  讨论
       3.1  以远志皂苷元为对照品来测定和计算生远志和蜜远志中总皂苷的含量，所得的结果是以远志皂苷元计算的相对含量，测定结果可作为评价远志蜜炙前后所含远志总皂苷含量变化的主要依据之一。
       3.2  本实验曾采用远志直接用甲醇提取的方法制备供试品溶液测定其远志总皂苷的含量，结果：生远志的总皂苷含量平均为4.223％，蜜远志的总皂苷含量平均为4.426％，RSD=4.22（n=5），结果说明蜜远志中总皂苷含量高于生远志。
       3.3  传统炮制理论认为蜜炙远志能增强其化痰止咳的作用，现代研究证实远志的化痰止咳作用的主要活性成分是远志皂苷，本实验证实了远志蜜炙后所含远志总皂苷有所增加，同时实验也证实了远志蜜炙后其70%乙醇浸出物含量增加，因此，临床主张使用炮制品是有其科学依据的。
       参考文献：
       ［1］  国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：附录VA.
       ［2］  叶质江.中药炮制学［M］.上海：上海科学技术出版社，1996.
       ［3］  姜  勇，屠鹏飞.远志研究进展［J］.中草药，2001，32(8)：759.
       ［4］  刘友平，万德光，刘  涛，等.分光光度发测定不同产地远志总皂苷的含量［J］.成都中医药大学学报，2000，23(2)：46.
       ［5］  江  林，顾琼珠，何廷能，等.树脂吸附分离-比色法测定三七总皂苷含量［J］.云南中医学院学报，1995，18（2）：11.
       ［6］  王  建，吴晖晖，武  云，等.生远志及其总皂苷与蜜远志的急性毒性比较研究［J］.中药药理与临床，2004，20（6）：21.
       基金项目：国家自然科学基金资助项目（No.30371778）
       (成都中医药大学药学院，四川，成都  610075)