北刘寄奴药材质量的评价方法
作者：张宏武
作者单位：中国医学科学院中国协和医科大学药用植物研究所，北京 100094
《时珍国医国药》 2007年 第10期
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【摘要】
目的建立北刘寄奴药材质量的评价方法。方法用高效液相色谱（HPLC）法测定了市售北刘寄奴9个样品中木犀草素的含量。结果北刘寄奴中木犀草素的含量与茎梗、叶、花的相对比例有 一定相关性，茎梗所占比例大的药材，其木犀草素的含量较高。结论该方法快速简便，稳定可靠，控制药材中茎梗、叶和花的比例，可保证北刘寄奴药材质量的稳定性。
【关键词】 阴形草 木犀草素 高效液相色谱法
Evaluating Method for the Quality of Bei LiuJiNu
ZHANG Hongwu, ZOU Zhongmei, XU Lizhen
Institute of Medicinal Plant Development, Chinese Academy of Medical Sciences & Peking Union Medical College, Beijing, 100094, China
Abstract:ObjectiveTo set up a method for evaluating the quality of Bei LiuJiNu (the whole herb of Siphonostergia chinensis Benth).MethodsRP-HPLC was used to determine the content of luetolin in Siphonostergia chinensis collected from markets in the north of China.ResultsThe assay was successfully applied to determination of luteolin in Bei liujinu. The significant difference in the content of luteolin was observed from different samples. The herbs with higher proportion of stems contain higher content of luteolin.ConclusionThis method was proved to be rapid, precise and reliable enough to be applied for the quality control of Bei liujinu. The coincidence in the quality of Bei liujinu can be obtained by controlling the proportion among stems, leave and flowers in herbs.
Key words:Siphonostergia chinensis Benth; Luteolin; HPLC
北刘寄奴为玄参科植物阴形草Siphonostergia chinensis Benth 的带果穗和花的全草。刘寄奴为临床常用中药，具有破血通经、敛疮消肿的功效，广泛用于经闭、产后淤血、跌打损伤、金疮出血、水火烫伤、痈肿等病症［1］。市售商品中北方地区主要为阴形草（习称北刘寄奴），南方地区主要为菊科植物奇蒿 Artemisia anomala S. Moore（习称南刘寄奴）［2］。除此之外，各地区还有多种植物做“刘寄奴”入药，共涉及9科32种植物，因此导致市场上刘寄奴药材品种相当混乱，质量参差不齐。现代研究表明，各植物所含化学成分差异较大，缺乏同作为“刘寄奴”使用的依据。我们对阴形草的化学成分进行了系统研究，发现其含有较多的黄酮类成分，如木犀草素、木犀草苷等［3,4］。其中木犀草素对多种实验性炎症模型有明显的抑制作用［5］，为了建立有效评价北刘寄奴质量的方法，我们首次采用反相高效液相色谱法，以乙腈-水-磷酸为流动相，建立了测定北刘寄奴中木犀草素含量的方法，该方法快速简便，稳定可靠，并通过对北方地区9个样品的分析，研究了药材中茎梗所占比例对木犀草素含量的影响。
1 仪器与试药
1.1 仪器Waters 996-600高效液相色谱仪，996二极管阵列检测器， Empower色谱工作站。
1.2 药材北刘寄奴药材分别于200207～200302采购于北京、沈阳、大连、包头等不同地区的药店，经本所郭宝林博士鉴定，均为玄参科植物阴形草Siphonostergia chinensis Benth的带果穗和花的全草。
1.3 药品与试剂
木犀草素对照品购于中国药品生物制品检定所（供含量测定用）；乙腈为色谱纯；磷酸为分析纯；水为重蒸水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件色谱柱：Waters SunFire C18 (4.6 mm×150 mm, 5 μm)；流动相：乙腈-0.2%磷酸（30∶70）；流速: 1 ml/min；检测波长：349 nm；柱温：30℃；进样量：10 μl。
2.2 对照品溶液的制备精密称取木犀草素对照品适量，加少量甲醇溶解后，用流动相稀释成每毫升含木犀草素1.005 mg的对照品溶液。色谱图见图1。
2.3 供试品溶液的制备取北刘寄奴干燥全草粉末（过60目筛）精密称定2.5 g，用95%乙醇回流提取3 h，过滤，挥去提取液，残渣用流动相定容至10 ml量瓶中，摇匀，微孔滤膜过滤，续滤液即为供试品溶液。色谱图见图2。
2.4 线性关系的考察精密量取对照品溶液0.4，0.6，0.8，1.0，1.2，1.4 ml分别置于10 ml量瓶中，用流动相稀释至刻度，摇匀。依次吸取上述各对照品溶液10 μl进样，按“2.1”项下色谱条件测定。以木犀草素峰面积为纵坐标，木犀草素浓度为横坐标，绘制标准曲线。结果表明，木犀草素在0.402～1.206 μg范围内呈良好的线性关系，回归方程为：Y=4.70×106 X－3.65×105，r= 0.999 6(n=6)。
2.5 精密度实验精密吸取对照品溶液10 μl, 按“2.1”项下色谱条件测定连续测定5次，以木犀草素峰面积计算，RSD为0.58%。
2.6 稳定性实验取北刘寄奴药材粉末，精密称重，按“2.3”项下制备供试液，精密量取供试液10 μl，按“2.1”项下色谱条件分别在0，1，2，3，4，5，6，7 h进样，测定木犀草素峰面积积分值，RSD为0.7%，表明样品在6 h内稳定。
2.7 重现性实验取同一批北刘寄奴药材粉末，精密称重5份，分别按“2.3”项下制备各供试液，精密吸取10 μl，按“2.1”项下色谱条件测定木犀草素峰面积，RSD为0.74%。
2.8 回收率实验精密称取已知木犀草素含量的北刘寄奴药材样品5份，分别加入一定量的木犀草素对照品，按“2.3”项下制备供试液，精密吸取10 μl，按“2.1”项色谱条件下测定木犀草素的含量，计算平均回收率为98.24%，RSD为0.89%。结果见表1。表1 木犀草素回收率实验结果（略）
2.9 市售北刘寄奴药材中木犀草素含量的测定分别对9批市售刘寄奴药材按上述含量测定方法进行测定，用外标法计算其木犀草素的含量。结果见表2。表2 9种市售北刘寄奴药材中木犀草素的含量测定（略）
3 讨论
3.1 波长的选择取木犀草素对照品溶液，在200～400 nm波长扫描，结果表明，木犀草素在349 nm处有最大吸收，故确定检测波长在349 nm。
3.2 提取方法的选择
分别采用甲醇超声提取30 min，95%乙醇回流提取3 h提取方式对北刘寄奴进行比较测定，结果表明，95%乙醇回流提取3 h效果较好，故选择95%乙醇回流提取方法。
3.3 影响木犀草素含量的因素市售北刘寄奴药材中木犀草素含量差异较大，从9批样品分析结果我们发现，药材中木犀草素的含量与茎梗、花的相对比例有一定的相关性，当茎梗比例大，而花所占比例小时，其木犀草素的含量较高。如木犀草素含量较高的2批药材（0.962 1 mg/g， 0.946 6 mg/g）， 其茎梗含量分别为66.7%和56.7%，花分别为8.31%和11.38%。而木犀草素含量为0.101 2 mg/g的药材，其茎梗类仅占26.3%，因此，通过研究不同采集期药材所含的化学成分与临床疗效的相关性，确定最佳采集时间，固定药材收购季节，使入药各部位的比例相对固定，可保证 其所含化学成分的一致性，从而有效控制其质量及疗效。
【参考文献】
［1］黄林芳，周天达.刘寄奴及其混淆品理化鉴定［J］.时珍国医国药，2000，11（7）：624.
［2］中国医学科学院药用植物研究所.中药志，第四册［M］.北京：人民卫生出版社，1988：42.
［3］张 达，姜宏良，杨学东，等.刘寄奴中黄酮类化学成分的研究［J］.中草药，2002，33（11）：974.
［4］姜宏良，杨学东，张 达，等.中药北刘寄奴的化学成分研究［J］.中国药学杂志，2003，38（2）：97.
［5］戴利明, 程 红, 李卫平，等.木犀草素对实验性炎症的影响［J］.安徽医学院学报, 1985，20（1）：1.