河北香菊总黄酮的富集与含量测定
作者:张晓媛
作者单位:河北医科大学药学院, 河北 石家庄 050017;
《时珍国医国药》 2007年 第10期
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【摘要】
目的测定香菊总黄酮含量。方法采用大孔吸附树脂富集,60%乙醇洗脱,得总黄酮,采用紫外分光光度法进行含量测定。结果操作简便,总黄酮的平均含量为37.35%。结论富集率较高且稳定,测定方法准确可靠。
【关键词】 河北香菊 总黄酮 富集
Concentration and Determination of the Flavonoid of Hebei Balmy Chrysanthemum
ZHANG Xiaoyuan, HUANG Yuan, ZHAO Ding, LIU Weina, ZHANG Xia, DUAN Lihua
1. School of Pharmacy, Hebei Medical University, Shijiazhuang 050017, China;
2. Hebei Chemical & Pharmaceutical Vocational Technology College, Shijiazhuang 050026, China
Abstract:ObjectiveTo determine the flavonoid. MethodsUsing macroporous resin column chromatogram, to get 60% ethanol fraction. Using UV spectrum to determine the flavonoid of this part. Results The mean content of the flavonoid was 37.35%. Conclusion The rate of concentration is high and stable, the method of determination is reliable.
Key words:Hebei balmy chrysanthemum; Flavonoid; Concentrate
菊花作为药食同源中药,具有疏风清热,平肝明目,解毒,降压之功效[1]。屈原的离骚就有“夕餐秋菊之落英”之句。菊花因其清爽的口感在中国文化中很受欢迎,在人们日常生活中广泛用作保健茶饮。有研究表明[2],菊花挥发油解热,总黄酮降压,是其疏风清热、平肝明目的物质基础。河北香菊是河北省农科院培育的药用菊花新品种,是目前国内唯一浓香型菊花,其挥发油及总黄酮含量均明显高于其它同类产品,营养保健价值及药用价值均很大,开发前景广阔。故本文对河北香菊总黄酮的富集工艺进行了研究,并采用紫外分光光度法进行了总黄酮含量测定。为河北香菊药用及营养保健价值的进一步开发利用提供科学依据。
1 材料与方法
1.1 材料
紫外分光光度计(日本岛津UV-2201); D101型大孔吸附树脂(天津市友昌工贸有限公司);甲醇(分析纯,天津永大试剂公司);金合欢素-7-O-β-D-葡萄糖苷对照品为本实验室自制(纯度为99.2%);河北香菊为河北省农科院药植所提供。
1.2 方法[3,4]
1.2.1 对照品溶液的制备精密称取金合欢素-7-O-β-D-葡萄糖苷对照品5.06 mg,置于50 ml容量瓶中,加入甲醇使之溶解,稀释至刻度摇匀,即得对照品溶液。
1.2.2 测定波长的选择取对照品溶液2 ml置于25 ml容量瓶中,定容,摇匀。将溶液加入比色皿中,于200~800 nm波长范围内进行全波长扫描,分别于328,269.3,208 nm有吸收峰。用同样的方法测得供试品溶液分别于328,208 nm有吸收峰。
1.2.3 标准曲线的绘制精密吸取上述对照品溶液1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5 ml分别置于25 ml容量瓶中,定容,摇匀,置于比色皿中,于选定的波长下测定吸收值A。用最小二乘法得回归方程,并测定线性范围。
1.2.4 总黄酮的富集称取一定质量干燥河北香菊,加入8倍量70%乙醇,于80℃下热回流1.5 h,滤出溶液后,再加入7倍量70%乙醇,于80℃下热回流1.5 h,合并滤液并适当浓缩,将上述浓缩液,滴加到大孔吸附树脂色谱柱上用蒸馏水洗脱,直至流出液Molish反应呈阴性,再用3 000 ml 60%乙醇洗脱(约10个柱体积),收集洗脱液,回收溶剂,并进一步浓缩至干膏,即得70%乙醇提取物经大孔吸附树脂60%乙醇洗脱部位(简称60%乙醇部位)。如此制得3批此干膏。
精确称取上述干膏4.5 mg,用甲醇制成25 ml溶液,从中精确吸取2.0 ml置于25 ml容量瓶中,用甲醇定容,即得供试品溶液。
1.2.5 方法学验证
精密度实验:精密吸取对照品溶液2.0 ml置于25 ml容量瓶中,以甲醇定容。于选定波长下,重复5次测定其吸收值。
回收率实验:精密称取已恒重的上述干膏5份,每份4 mg左右,分别精密加入1 mg左右对照品,按“1.2.4”项方法制备溶液,在选定的波长下测定吸收值,计算平均回收率及RSD。
重复性实验:精密称取“1.2.4”项制备干膏4.5 mg。按“1.2.4”项制备供试品溶液于选定波长下重复5次测定吸收值 。
稳定性实验:取同一供试品溶液分别于0,2,4,8,12,24,48 h测定吸收值。
样品含量测定:精密称取3批,每批3份,按1.2.4项制备的60%乙醇部位干膏,共9份,每份约4.5 mg,并按1.2.4项制备供试品溶液,于选定波长下测定吸收值,计算含量。
2 结果
2.1 测定波长的选择
对照品和供试品的共有吸收峰328 nm为检测波长。
2.2 标准曲线和线性范围以对照品质量浓度(X,μg/ml)为横坐标,以吸收值(Y)为纵作标,绘制标准曲线,进行线性回归分析,得回归方程为Y=0.039 60+0.049 51X,r=0.999 2,线性范围2.048~16.192 μg/ml。
2.3 精密度实验
取某一浓度对照品溶液,重复测定5次,RSD值为0.36%。
2.4 加样回收率实验加样回收率实验结果表明,金合欢素-7-O-β-D-葡萄糖苷对照品的平均回收率为98.32%,RSD为0.57%。结果见表1。表1 加样回收率实验结果(略)
2.5 重复性实验
重复性实验结果表明,第3批干膏中总黄酮含量为38.10%,RSD为0.13%。
2.6 稳定性实验 稳定性实验结果表明,样品溶液在48 h内稳定性良好,RSD值为0.67%。
2.7 样品含量的测定3批60%乙醇部位干膏总黄酮含量分别为36.90%,37.28%,37.88%。平均值为37.35%,RSD值分别为0.21%,0.50%,0.89%。结果见表2。表2 样品中总黄酮的含量测定结果(略)
3 结论
本文探讨了60%乙醇部位总黄酮的富集工艺。结果发现,利用大孔吸附树脂富集,60%乙醇洗脱10个柱体积,所得总黄酮含量稳定且富集率较高,降压效果显著。该方法可以推广使用;本文采用紫外分光光度法测定了60%乙醇部位总黄酮含量,该方法精密度高,重现性好,测定结果准确,为此部位的进一步开发利用提供基础性研究。
【参考文献】
[1]贾凌云,孙 毅,王春阳,等.菊花总黄酮提取工艺研究[J].中药材,2003,26(1):36.
[2]戴 敏,刘青云,李道中,等.菊花解热、降压作用的物质基础[J].中药材,2001,24(7):505.
[3]刘金旗,吴德林,王 兰,等.菊花中木犀草素-7-O-β-D-葡萄糖苷的含量测定[J].中成药,2001,23(1):53.
[4]彭少平,李 竣,芦金清.正交设计研究金菊花总提物及总黄酮提取工艺[J].湖北中医学院学报,2002,4(2):29.