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       【关键词】  白芷
        摘要：目的：研究白芷总香豆素（AGC）药理作用。方法：运用柱层析方法，首次从白芷中提取总香豆素，并对白芷总香豆素类成分进行了抗炎、镇痛和解痉实验。结果：首次发现总香豆素类成分具有明显的镇痛和解痉作用，能明显对抗热板、冰醋酸所致小鼠疼痛及BaCl2所致兔肠平滑肌痉挛。结论：可为白芷临床应用提供依据。
        关键词：白芷；香豆素；镇痛；解痉
        Pharmacological Effect of the Total Coumarins in Radix Amgelicae dahuricae
        WANG Mengyue1，2, JIA Minru1*, MA Yuying1, SUN Jiamin1, TANG Shengwu2, JIANG Guihua1, XIONG Ying1
        (1.Pharmacy School,Chengdu University of Traditional Chinese Medicine,Chengdu, 610075, China; 2.Pharmacy School, hanghai Jiaotong University, Shanghai,200030, China)
        Abstract:Objective:To study the pharmacological effect of the total coumarins of Baizhi.Methods:The total coumarins of Baizhi was extracted by column chromatograph and pharmacologic effects have been screened by anti-inflammation, analgestic and anti-spasticity experiments.Results:The total coumarins have obvious analgestic effect and they can decrease the mice"s pain caused by hot board and actic acid. The total coumarins also have distinct anti-spasticity effect. They can significantly reparess rabbit intestine"s spasm caused by BaCl2.Conclusion:The pharmacological effect research can provide scientific basis for Baizhi clinical using.
        Key words:Angelica dahurica;Coumarin;Analgesic;Anti-spasticity
        白芷为一常用中药，用于鼻渊头痛、风湿痹痛等病的治疗。主要成分为香豆素类和挥发油类成分［1］。挥发油成分研究报道较多，但挥发油在白芷中含量很低，香豆素在白芷中含量远较挥发油类高，据笔者研究，可达1%左右［2］，且白芷含有的一些香豆素成分具有抗菌［3］、抗肿瘤［4］等多种药理作用，但目前对于白芷总香豆素成分的药理作用研究，尚未见有报道。因此我们从白芷中提取了白芷总香素(AGC)，对总香豆素类的药理作用进行了研究，并与白芷挥发油的药理作用进行了比较，现报道如下。
           1实验材料与仪器
        1.1实验动物昆明种小鼠(一级)，体重(20±2)g，由成都中医药大学医学实验动物中心提供(动物合格证：川实动管6号)；实验用兔(品种：新西兰)，体重(2.0～2.5)kg，由成都市输血所提供(动物合格证：川实动管99－11号)。
        1.2药物氢化可的松注射液，晋卫药准字(1996)第044057，批号：200201123，山西晋新双鹤药业有限责任公司。硫酸罗通定注射液，粤卫药准字(1996)第501125号，产品批号020408，广东博罗先锋药业集团有限公司，使用前用生理盐水配成4 mg/ml备用。100 μg/ml乙酰胆碱(Ach液)、100 mg/ml氯化钡液、台氏液(新鲜配制)。
        1.3仪器BL－410生物机能实验系统。
        1.4统计学处理数据以±s表示，应用SPSS10.0编译软件进行方差分析。
           2实验方法与结果
        2.1白芷总香豆素的制备取白芷乙醇浸膏30 g，行硅胶柱层析，以石油醚，石油醚－醋酸乙酯梯度洗脱，检查流分，收集挥发油显色反应呈阴性而香豆素反应呈阳性流分，合并，回收溶剂，加入1%的吐温－80生理盐水溶液，超声溶解，配成0.5%浓度的总香豆素(AGC)溶液备用。
        2.2总香豆素的抗炎作用研究
        2.2.1对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响取雄性小鼠40只，随机分为4组，每组10只。按下表剂量腹腔注射给药，给药30 min后，用二甲苯0.1 ml均匀涂布于各鼠右耳的正反面，再过30 min后处死，用6 mm打孔器在两耳同一部位扎下左右耳片，精密称重，以右耳的重量减去左耳的重量作为耳廓炎性肿胀度。计算右耳廓肿胀度及抑制率，结果见表1。
        表1白芷总香豆素对二甲苯致小鼠耳廓肿胀的影响(±s)（略）
        由上述结果可以看出，白芷香豆素高低剂量均无显著的抗炎活性，不能明显抑制二甲苯所致的小鼠急性耳廓肿胀。
        2.2.2白芷总香豆素对小鼠腹腔毛细血管透性的影响取昆明种小鼠40只，雌雄各半，随机分为4组，每组10只。按下表剂量腹腔注射给药。给药1 h后，尾静脉注射1%伊文斯兰液0.1 ml・(10 g)－1，立即腹腔注射0.6%醋酸0.2 ml/只，20 min后，处死小鼠，剪开腹腔，用5 ml生理盐水冲洗腹腔数次，收集洗涤液，离心(1 000 r/min)5 min，取上清液用7530型分光光度计在590 nm处测定吸收度(OD值)。结果见表2。
        表2白芷总香豆素对小鼠腹腔毛细管血管通透性的影响(±s)（略）
        由表2可知，白芷总香豆素高、低剂量组均无明显的抗炎活性，对醋酸所致小鼠腹腔毛细血管通透性增高无明显抑制作用。
        2.3总香豆素成分的镇痛作用
        2.3.1醋酸扭体法将40只小鼠(雌雄各半)，随机分为4组，每组10只，称重并编号。阴性对照组腹腔注射0.2 ml/20 g(体重)生理盐水，阳性对照组腹腔注射0.2 ml/20 g(体重)。在给药30 min后腹腔注射0.6%醋酸溶液0.2 ml/只。观察并记录注射醋酸溶液后20 min内出现扭体反应的次数。实验完毕，计算药物镇痛百分率。结果见表3。
        可见白芷总香豆素高低剂量均有明显的镇痛作用，能明显减少冰醋酸所致的小鼠扭体次数，高剂量组还能明显延缓小鼠扭体的出现。
        表3白芷总香豆素类成分对醋酸所致小鼠疼痛的影响（略）
        2.3.2热板法选择对50℃热反痛觉反应在10～30 s者40只雌性小鼠，随机分为4组，每组10只。每只小鼠给药前及给药(按下表给予药物及剂量)后15，30，60，90 min测定痛反应潜伏期，计算痛阈提高率。结果见表4。
        表4白芷总香豆素对鼠热板致痛反应的影响(±s)（略）
        由表4可知，白芷总香豆素有明显的镇痛作用，在30 min内作用最强。
        2.4白芷总香素与挥发油镇痛作用的比较挥发油的制备：取白芷乙醇浸膏30 g，硅胶柱层析，石油醚、石油醚(30～60℃)醋酸乙酯(100∶1)洗脱，收集洗脱流分。薄层检测，合并不含香豆素的部分，水蒸气蒸馏。收集馏出黄色油状物(白芷挥发油AGEO)。挥发油中加入1%的吐温－80生理盐水溶液，超声溶解，配成0.5%溶液备用。
        2.4.1醋酸扭体法按2.3项下进行。结果见表5。
    由表5可知，香豆素与挥发油均具有明显的镇痛作用，但在相同剂量下二者之间并没有显著性差异。
        2.4.2热板法按2.3项下进行。结果见表6。
        由表6可知，香豆素与挥发油均具有明显的镇痛作用，在给药后30 min内作用最强。经检验二者相同剂量间没有显著性差异(P＞0.05)。
        表5白芷总香豆素类及挥发油对醋酸所致小鼠扭体的影响(±s)（略）
        表6白芷总香豆素及挥发油对小鼠热板法致痛反应的影响(±s)（略）
        2.5白芷总香豆素对家兔离体肠平滑肌的影响
        2.5.1实验方法调节离体器官恒温浴槽装置，取兔肠管，用台氏液冲洗干净，将肠管剪成2～2.5 cm小段。小段肠管两端穿线结扎，一端系于通气钩上，轻轻放入恒温麦氏液中，另一端连接BL－410生物机能实验系统。调节麦氏浴槽内肠肌张力，观察正常肠肌活动。待自主活动稳定后，记录一段正常舒缩曲线，然后依次向浴槽内滴加药液。每次加药液前均用台氏液冲洗肠肌3次，待舒缩恢复至用药前水平后再加下组试验药液，记录舒缩活动曲线。
        2.5.2实验结果
        2.5.2.1分别滴加0.5%香豆素乙醇液，0.2，0.4，0.6，0.8，1.0，1.2 ml，观察并记录舒缩曲线。结果不同剂量的香豆素对正常肠管的舒缩曲线均无明显影响。
        2.5.2.2滴加乙酰胆碱液0.4 ml，当肠肌收缩显著时加入0.5%香豆素乙醇液0.2～1.2 ml。结果香豆素液不能明显缓解乙酰胆碱引起的肠平滑肌痉挛。
        2.5.2.3加入氯化钡液0.2 ml，待收缩显著时加入0.5%香豆素乙醇液0.2～1.2 ml。待曲线稳定后再加等量氯化钡液。结果香豆素液能明显缓解氯化钡引起的兔肠平滑肌痉挛。
           3讨论
        白芷及其某些复方制剂在临床上广泛用于头痛、牙痛、三叉神经痛等多种疼痛的治疗，疗效显著。但目前白芷镇痛的有效成分尚无定论。本实验首次发现白芷总香豆素类成分具有镇痛作用，除能直接对抗由热、醋酸等物理、化学刺激引起的疼痛外，还能缓解由平滑肌痉挛引起的疼痛。为临床上用白芷治疗多种疼痛提供了一定依据。
        有研究发现白芷的挥发油成分具有明显的镇痛作用［5］，我们对总香豆素和挥发油的镇痛作用进行了比较研究，发现两者作用均明显，但之间并没显著差异。白芷镇痛的有效成分值得进一步研究。
    致谢：在实验过程中得到了成都中医药大学药学院黄国钧教授、钟世红同学的大力帮助，在此表示谢意。
           参考文献：
        ［1］王梦月，贾敏如.白芷的化学成分研究进展［J］.中药材，2002，25(6)：446449.
        ［2］王梦月，贾敏如，马逾英，等.不同入药部位及不同加工方法对白芷香豆素类成分含量的影响［J］.中药材，2004，27(11)：826828.
        ［3］Yongsoo Kown.Akio Kobayashi, Shin－Ichiro Kahyama, et al. antimicrobial constituents of Angelica dahurica roots［J］.Phytochemistry, 1997，44(5)：887889.
        ［4］Okuyama T.Studies on the antitumor－promoting activity of naturally occurring substances Ⅱ. inhibition of tumor promter－enhanced phospholipid metabolism by umbelliferous materials［J］.Chem. Pharm. Bull, 1990，38(4)：10841086.
        ［5］聂红，沈映君，吴俊梅，等.白芷挥发油的镇痛、镇静作用及身体依赖性研究［J］.中国新药与临床药理，2002，13(4)：221223.
        (1.成都中医药大学药学院，四川 成都610075；2.上海交通大学药学院，上海200030)