气相色谱法测定复方牙痛酊中乙酸龙脑酯和樟脑的含量
作者：伍庆
作者单位：贵州师范大学分析测试中心，贵州 贵阳 550001；
《时珍国医国药》 2007年 第10期
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【摘要】
目的采用毛细管气相色谱法同时测定复方牙痛酊中樟脑和乙酸龙脑酯的含量，建立复方牙痛酊质量控制体系。方法 以水杨酸甲酯为内标，石英毛细管柱OV1701（30 m×0.32 mm，0.25 μm）为固定相，氮气为载气，FID检测器。结果在该色谱条件下，乙酸龙脑酯和樟脑分别在0.0295～0.295 mg·ml-1，0.012 72～0.127 2 mg·ml-1的浓度范围内线性关系良好（r＞0.999 5）；平均回收率分别为97.2 %，98.1%，RSD分别为2.35%，2.14%（n=6）。结论该方法简单、灵敏、快速、回收率和重现性好，可以作为复方牙痛酊的质量控制标准。
【关键词】 气相色谱法 复方牙痛酊 乙酸龙脑酯 樟脑
Quantitative Determination of Bornyl Acetate and Camphor in Fufangyatongding by Gas Chromatography
WU Qing ZHOU Ning,ZHANG Mingshi，WANG Xingning，FENG Zexi, YU Li，ZOU Jing
1.Center of Analysis and Test, Guizhou Normal University, Guiyang 550001 ,China；
2.Guizhou Provincial Laboratory for Mountainous Environment（GLE）, Guiyang Guizhou 550001,China；
3.Guizhou Tongjitang Pharmaceutical Co. Ltd, Guiyang 550005, China
Abstract:ObjectiveThis paper reports a GC method for determination of bornyl acetate and camphor in Fufangyatongding by gas chromatography. MethodsMethyl salicylate has been used as the internal standard substance in internal standard method.The GC system consisted of Capillary column，OV-1701（30 m×0.32 mm×0.25 μm）as the stationary phase，nitrogen as the carrier gas，and FID as the detector.ResultsBoth bornyl acetate and camphor got a good linearity between 0.0295～0.295 mg·ml-1，0.01272～0.1272 mg·ml-1 under the chromatographic condition. The mean recovery of bornyl acetate and camphor were 97.2%，98.1% ，and RSD were 2.35%,2.14% （n=6）. ConclusionThe method is simple, sensitive and rapid with satisfactory recoveries and reproducibilities.
Key words:Gas chromatography； Fufangyatongding； Bornyl acetate； Camphor
复方牙痛酊由贵州产宽叶缬草、红花、樟木等纯天然药物组成的苗药，具有祛风除湿、活血散瘀、消肿止痛等功效，用于牙龈炎、龋齿引起的牙痛或牙龈肿痛。宽叶缬草具有镇静、镇痛、降压、解痉等作用，其主要活性成分是乙酸龙脑酯［1］，而樟木中主要含樟脑。目前缺少复方牙痛酊中多指标质量控制标准［2～4］。为了有效控制产品质量，保证临床用药的安全、有效，本文采用气相色谱法对其主要活性成分含量进行了研究，为制订该品种的质量标准提供依据。
1 试剂和药品
樟脑和乙酸龙脑酯对照（中国药品生物制品检定所，批号7472006106和759200102），其他所用试剂均为分析级，复方牙痛酊及其阴性样品均由贵州同济堂制药厂提供（样品批号分别为20060901，20060902，20060903，20060904，20060905）。
2 方法与结果
2.1 仪器条件GC14C气相色谱仪（日本岛津），HW2000色谱工作站（上海千谱），石英毛细管柱OV1701（30 m×0.32 mm，0.25 μm）（自制），FID检测器，载气N2，程序升温（70℃ 2min ，10℃·min-1，250℃，10 min），进样口/检测器温度250℃。
2.2 溶液的制备
2.2.1 对照储备液的制备
精密称乙酸龙脑酯，樟脑对照品适量，置25.0 ml容量瓶中，以无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得浓度为0.589 9 mg·ml-1，0.254 3 mg·ml-1的储备液。
2.2.2 内标溶液的制备
取水杨酸甲酯适量，加无水乙醇制成含水杨酸甲酯2.776 5 mg·ml-1的内标溶液。
2.2.3 对照品溶液的配制
精密量取乙酸龙脑酯、樟脑的对照品储备液和内标液各1 ml，置10 ml的量瓶中，加无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得含乙酸龙脑酯、樟脑、内标物分别为0.05899 ，0.02543 ，0.27765 mg·ml-1的对照品溶液。
2.2.4 供试品溶液的制备
精密量取复方牙痛酊溶液2 ml ，内标溶液1 ml，置10 ml的量瓶中，以无水乙醇稀释至刻度，加入0.5 g无水硫酸钠摇匀，离心分离，即得供试品溶液。
2.2.5 阴性实验取供试品溶液、对照品溶液与阴性溶液（分别取缺樟木、宽叶缬草的处方药材与基质，按工艺方法制成樟木、宽叶缬草的阴性样品，按2.2.4项的方法制备），注入气相色谱仪。结果表明，阴性样品在对照品相应位置上无色谱峰。见图1～4。
2.3 线性关系考察精密吸取0.5，1，2，3，4，5 ml对照储备液溶液于10 ml容量瓶中，精密加入1 ml内标溶液并用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，进样量2 μl，由对照品的进样量和对照品峰面积与内标物峰面积之比进行回归。乙酸龙脑酯的回归方程为：Y=0.295 4X+0.003 98，r=0.999 8，樟脑的回归方程为：Y=0.163 1X+0.001 768，r=0.999 8，实验数据表明乙酸龙脑酯在0.029 49～0.294 95 mg·ml-1，樟脑在0.012 72～0.127 2 mg·ml-1的浓度范围内线性关系良好。
2.4 精密度实验对同一供试品溶液连续测定6次，样品中乙酸龙脑酯的峰面积与内标的峰面积之比平均值为0.363，RSD=0.9%；样品中樟脑的峰面积与内标的峰面积之比平均值为0.135，RSD=0.5%。
2.5 重复性实验对同一批样品从取样开始重复测定5次，测得的乙酸龙脑酯平均值为0.061 2，RSD=1.0%；樟脑的平均值为0.013 1，RSD=1.2%。
2.6 加样回收率实验精密吸取已测含量同一批号的复方牙痛酊6份，每份0.5 ml，精密加入样品含量的80%，100%，120%的乙酸龙脑酯、樟脑对照品溶液和1ml内标溶液，测定含量并计算回收率。结果见表1。表1 回收率实验结果（略）
2.7 样品测定按“2.2.4”的方法对5批样品进行含量测定，精密吸取供试品溶液及标准对照品溶液各2 μl注入气相色谱仪。按内标法以峰面积计算，即得。结果见表2。 表2 样品中乙酸龙脑酯和樟脑含量测定（略）
3 讨论
3.1 内标物的选择本文曾用萘、联苯、水杨酸甲酯、邻苯二甲酸二丁酯、醋酸异戊酯进行内标物的选择，萘、邻苯二甲酸二丁酯、醋酸异戊酯在10 min之内就出峰，联苯30 min之后才出峰。而水杨酸甲酯和乙酸龙脑酯、樟脑的沸点相似，出峰相近，且峰之间完全分离、无干扰峰，所以本文选用水杨酸甲酯做内标。
3.2 色谱温度程序的选择采用程序升温气相色谱法分析测定本品中乙酸龙脑酯和樟脑的含量。因本品是中药复方制剂,成分复杂。采用适当的升温速度(8℃·min-1) , 使柱温由70℃升温至250 ℃，并维持20 min， 乙酸龙脑酯、樟脑及内标成分在30 min内即可流出，而样品溶液中其它杂峰在40 min内完全流出。
3.3 供试品溶液的前处理的方法选择由于复方牙痛酊含一定量的水分，直接进样会对色谱柱造成损坏，通过对无水硫酸钠实验考察，发现适量无水硫酸钠加入可除去水分，且不影响含量测定结果。
本法具有样品预处理简单,方法回收率稳定,重现性好等特点,可以作为复方牙痛酊中乙酸龙脑酯和樟脑的含量测定方法。
【参考文献】
［1］谷 力，谷臣华. 武陵山区缬草属种类和优良种及其化学成分的研究［J］.林产化学与业，2002，9（22）：25.
［2］ 伍 庆，余 励，周 宁，等. GC-MS法在黔产宽叶缬草质控中的应用［J］.分析测试学报，2004，9（23）：101.
［3］李昌阳，汪绍武，许建光.四川引种阳春砂仁的检定.Ⅱ.挥发油的气相色谱法鉴定［J］.药物分析杂志，1987，7(2)：116.
［4］刘 杰，邱保国，都恒青，等.气相色谱法测定开胃消食口服液中乙酸龙脑酯的含量［J］.中成药，2002，24（1）：23.