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       【摘要】 
       目的优选夏枯草的最佳提取条件。方法 以齐墩果酸含量为指标，采用L3(34)正交实验，对影响超声提取的因素（乙醇浓度、乙醇用量、提取时间）进行优选。结果最佳提取条件为乙醇浓度90%，用量20倍，时间40 min。结论 优选夏枯草提取工艺稳定、可行。
       【关键词】  夏枯草 正交实验 齐墩果酸
       Studies on the Orthogonal Experiment for Optimization of Extraction Procedure of Prunella vulgaris L.
       YANG Hui，GUO Weiying，ZHAO Yong, ZHANG Biao
       1.Pharmaceutical College of Liaoning Medical University，Jinzhou，121001, China；
       2.Jinzhou Police Station，Jinzhou，121000, China
       Abstract：ObjectiveTo optimize the extraction process of Prunella vulgaris L..MethodsThe extraction process of Prunella vulgaris L was optimized by L3(34) orthogonal test with Caryophyllin as index, and with concentration of alcohol, amount of alcohol and extraction time. ResultsThe optimal extraction technology was 90% alcohol, 20 times the amount of herb material with 40 mins. ConclusionThe optimal extraction process is steady and reliable.
       Key words：Prunella vulgaris L.；  Orthogonal test；  Caryophyllin
        夏枯草为唇形科植物夏枯草Prunella vulgaris L.的干燥果穗，我国各地均产，主产于江苏、浙江、安徽、河南等地［1］。夏枯草临床应用广泛，《中国药典》中载有“清火，明目，散结，消肿”［2］之功效，现代研究表明夏枯草还具有降血脂、降血糖、免疫抑制以及抗肿瘤等作用［3］。夏枯草中含有丰富的三萜类化合物，其中以齐墩果酸（oleanolic acid）和熊果酸（ursolic）的含量最高。现采用正交实验法，以齐墩果酸为指标，对夏枯草的提取条件进行优化选择，为夏枯草的生产和应用提供依据。
       1  仪器与试药
        日立高效液相色谱仪，DAD检测器，EZChrom Elite色谱工作站；KQ-100A型超声波清洗器；电子天平。
        夏枯草对照药材及齐墩果酸对照品（中国药品生物制品检定所）。
        甲醇为色谱纯，其它试剂为分析纯。
       2  方法与结果
        夏枯草对照药材粉末，60℃干燥至恒重，备用。
       2.1  提取方法选择实验
       2.1.1  浸渍法 
       取夏枯草药材粉末1 g，加95%乙醇20 ml，浸渍24 h，时时摇动，滤过，浓缩干燥。
       2.1.2  加热回流法
        
       取夏枯草药材粉末1 g，加95%乙醇20 ml，加热回流2 h，滤过，浓缩干燥。
       2.1.3  超声法 
       取夏枯草药材粉末1 g，加95%乙醇20 ml，超声30 min，滤过，浓缩干燥。
        取上述夏枯草提取物样品，分别测定齐墩果酸含量，结果见表1。可见，3种提取方法中，以超声法提取所得齐墩果酸含量最高，故选用超声法对夏枯草药材进行提取。表1  3种提取方法的比较（略）
       2.2   提取条件的正交实验以乙醇浓度（A）、乙醇用量（B）、提取时间（C）为考察因素，每个因素各取3个水平。见表2。表2  实验因素水平（略）
       2.3  正交实验样品中齐墩果酸的含量测定
       2.3.1  色谱条件 
       色谱柱为Hypersil C18（10 μm，4.6 mm×250 mm）；流动相为甲醇-水-冰醋酸（88∶12∶0.1）；流速1 ml/min；柱温25℃；检测波长210 nm。
       2.3.2  对照品溶液的制备 
       精密称取齐墩果酸对照品适量，置10 ml容量瓶中，加流动相溶解并稀释至刻度，制成含齐墩果酸5 mg/ml的溶液，作为对照品溶液。
       2.3.3  标准曲线的绘制 
       精密量取齐墩果酸对照品溶液0.5，1，2，3，4，5 ml分别加流动相定容至10 ml。在上述色谱条件下重复进样3次，10 μl/次，测定峰面积积分值，以峰面积积分平均值Y和浓度C进行线性回归，得回归方程为：Y=19 998 014.3C-54 553.97，r=0.999 9，齐墩果酸溶液在0.25～2.5 mg/ml范围内线性关系良好。
       2.3.4  精密度实验 
       精密吸取同一份对照品溶液，连续重复进样5次，测定结果RSD为0.09%（n=5）。
       2.3.5  重复性实验 
       按同一批夏枯草对照药材，依法重复提取并测定5次，测定结果RSD为1.67%（n=5）。
       2.3.6  稳定性实验 
       同一份供试品溶液分别于0，2，4，8，12 h进样，测定结果RSD为1.42%（n=5），表明供试品溶液在12 h内稳定。
       2.3.7  样品含量测定
        
       在平行操作条件下，按L3(34)正交设计实验，分别测定，结果见表3。方差分析见表4。表3  正交实验结果（略）表4  方差分析（略）
       3  讨论
        通过比较浸渍法、加热回流法、超声法3种提取方式，以超声法提取所得齐墩果酸含量最高，故选用超声法作为夏枯草的提取方法。
        本文以乙醇为溶媒，以齐墩果酸含量为指标，通过正交设计实验方法研究超声提取法提取夏枯草的工艺条件，并对影响提取较大的乙醇浓度、乙醇用量、超声时间等因素进行考查，筛选出最佳的提取工艺条件为乙醇浓度90%，用量20倍，时间40min。
        本提取工艺方法简便，节省时间，提取率高，为夏枯草的生产和应用提供了参考依据。
       【参考文献】
         　　［1］郑汉臣，蔡少青.药用植物学与生药学［M］.北京：人民卫生出版社，2004：389．
       
       ［2］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：197.
       
       ［3］孙维广，廖慧丽，叶志明，等.夏枯草化学及药理研究概况［J］.中国中医药信息杂志，2003，10（8）：86.