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       【摘要】 
       目的观察脑康灵胶囊对脑缺血/再灌注损伤的保护作用，并对其机制作初步探讨。方法采用大鼠大脑中动脉缺血2 h/再灌注22 h模型,神经病学评分，脑梗塞范围及脑组织水含量变化，观察脑康灵胶囊抗脑缺血/再灌注损伤的效应；通过测定大鼠脑组织中一氧化氮合酶（nitric oxide synthase,NOS），超氧化物歧化酶（superoxide disumtase,SOD）活性及丙二醛（malondialdehyde,MDA）含量的变化以探讨药物作用的机制。结果脑康灵胶囊可降低大鼠脑缺血/再灌注后神经病学评分及梗塞范围，降低脑组织MDA，NOS含量及升高SOD活性。结论脑康灵胶囊对脑缺血/再灌注损伤有保护作用，其作用机制与抑制NOS活性、抗脂质过氧化、提高SOD活性有关。
       【关键词】  脑康灵胶囊 脑缺血/再灌 脑缺血保护
       Abstract:ObjectiveTo observe the protective effects of Naokangling Capsule on cerebral ischemia/reperfusion injury in rats.MethodsThe rat model of middle cerebral artery ischemia 2h/reperfusion 22h was established.The neurological scale, cerebral infracted volume, cerebral water content, activities of NOS and SOD were measured. ResultsThe average neurological scote,cerebral infracted volume,cerebral water content,activity of NOS,content of MDA in Naokangling Capsule group significantly decreased. Meanwhile, the activity of SOD significantly increased compared with control group. ConclusionNaokangling Capsule may protect cerebral ischemia/reperfusion damage, and the mechanism might be related with inhibiting the activity of NOS, lipoperoxidation and increasing the avtivity of SOD.
       Key words:Naokangling capsule;  Ischemia/reperfusion;  Cerebral ischemia protection
        目前的研究表明脑缺血损害的机制包括细胞内钙超载，兴奋性氨基酸的毒性作用，自由基损害与凋亡等。脑康灵主要成分由中药夏天无和钩藤生物碱等组成，前者为罂粟科植物伏生紫堇Corydalis decumbens（Thunb.）Pers的干燥块茎，具有活血祛淤作用；后者为常用中药钩藤Uncaria rhynchophylla Jackson的茎叶，有活血通络等功效，主要成分有钩藤碱和异钩藤碱。实验采用灌胃给药，观察脑康灵胶囊对动物脑缺血损伤的影响，为临床脑缺血寻找新型有效的治疗药物。
       １  材料与仪器
       1.1  药品与材料脑康灵胶囊由本校药物化学教研室制成，0.3 g/粒，主要成分为夏天无及钩藤总碱等。尼莫地平（nimodipine,Nim）系山东新华制药股份公司产品(批号050625)，MDA，SOD，NOS，蛋白含量测定试剂盒购于南京建成生物工程公司。
       1.2  仪器BI-2000图象分析系统，成都泰盟公司；JY92-11超声细胞粉碎机，宁波新芝科器研究所。
       1.3  动物SD雄性大鼠，体重230 ～ 270 g，购于中科院上海实验动物中心（清洁级）。
       2  方法
       2.1  制模及给药参照Nagasave法［1］制模。大鼠苏醒后按Bederdson神经病学评分达3分［2］，脑内蛛网膜下腔无出血作为模型成功的标准，选入实验组。已制模大鼠126只，随机分为6组:假手术组，生理盐水组，尼莫地平2 mg/kg组，脑康灵 20，40,60 mg/kg组，每组21只。制模型前灌胃给药1 ml/100 g体重，2次/d，共5次，最后1次给药后30 min制模,制模后12 h再给药1次，各组动物于缺血2 h/再灌注22 h后再进行神经病学评分。
       2.2  脑梗塞范围测定实验各组随机取大鼠7只断头取脑，冠状切分脑组织成5片，TTC染色测量梗塞面积［3］。取出后置10%福尔马林液中避光保存，用BI-2000图象分析系统测出截面上梗塞区域占全部面积的百分比。
       2.3  脑含水量测定每组再随机取7只大鼠断头取脑，正中矢状切分左右大脑后分别称湿重，100℃烤箱烘烤至恒重（即干重），计算脑含水量（%）=（湿重－干重）/湿重×100%。
       2.4  脑组织NOS，SOD，MDA含量测定每组剩余7只大鼠断头取脑，称重，按1∶10加NS，超声细胞粉碎制成10%组织匀浆，冷冻离心20min（0℃，15 000 r/min），取上清液置-84℃低温冰箱中保存。采用黄嘌呤氧化酶法测定SOD，硫代巴比妥酸法测定MDA，比色法测定NOS。
       2.5  统计学方法数据的收集和处理实验结果均以±s表示，两小样本均数经方差齐性检验，采用t检验。
       3  结果
       3.1  脑康灵胶囊对大鼠脑缺血再灌注损伤神经病学评分、脑梗塞范围及含水量的影响大鼠脑缺血2 h/再灌注22 h后，假手术组大鼠神经病学评分均为0分，无脑梗塞；脑康灵胶囊20，40，60 mg/kg与生理盐水组比较，均可明显降低脑缺血/再灌后神经病学评分，脑缺血范围和脑水含量且呈剂量依赖性。结果见表1。表1  脑康灵胶囊对大鼠神经学评分及脑缺血/再灌脑梗塞区域和脑含水量的影响(略)
       3.2  脑康灵胶囊对大鼠缺血再灌注脑组织中NOS，SOD，MDA的影响与假手术组比较，生理盐水组NOS活性及MDA含量显著升高，SOD活性降低；脑康灵胶囊给药各组与生理盐水组比较，明显降低NOS活性和MDA含量，升高SOD活性。结果见表2。表2  脑康灵胶囊对NOS，SOD活性和MDA含量的影响(略)
       3  讨论
        脑缺血损伤机制复杂，相关因素很多，其中细胞内钙超载被认为是主要环节。缺血/再灌状态下产生的OH-，H2O2，NO等自由基在局部大量聚集，体内SOD活性减低，自由基诱导细胞膜脂质过氧化而使细胞膜受损，最终细胞死亡。缺血/再灌后脑细胞内钙积聚，Ca2+与钙调蛋白（CaM）结合而激活NOS，同时脑缺血/再灌后NOS的表达也增加，导致NO的生成增加。生理水平的NO与学习记忆及神经突触的可塑性有关，而过量的NO可产生神经毒性。文献报道夏天无总碱及从总碱中提取的有效成分具有舒张脑血管，增强小鼠对低压缺氧的耐受力，尚具有中枢抗胆碱脂酶等作用［4，5］。大量研究已表明钙通道阻滞剂对脑缺血有保护作用，钩藤生物碱具有抑制45Ca转运、舒张血管及对豚鼠心房产生负性变时和变力等钙拮抗剂特征［6］。我们将两种生物碱制成胶囊，实验采用大鼠大脑中动脉缺血/再灌注模型，结果显示脑康灵胶囊20，40，60 mg/kg组均能明显降低大鼠脑缺血再灌后神经病学症状及减少脑梗塞范围，降低NOS活性和MDA含量，并升高SOD活性。表明脑康灵胶囊抗脑缺血损害的作用与减少自由基产生，阻断与NOS表达有关的信号传导途径，抑制脂质过氧化有关。
       【参考文献】
         　　［1］Nagasava H, Kogure K. Correlation between cerebral blood flow and histologic changes in a new rat model of middle cerebral artery occlusion［J］.Stroke,1989,20(8):1037.
       
       ［2］Bederson JB, Pitts LH, Tsuji M, et al. Rat middle cerebral artery occlusion:evaluation of the model and development of a neurolofic exemination［J］.Stroke,1986,17(3):472.
       
       ［3］张均田.现代药理实验方法,第1版［M］.北京：人民卫生出版社，1998：1241.
       
       ［4］徐丽华，顾振纶，蒋小岗,等.夏天无总碱中抗胆碱酯酶活性成分的研究［J］.药学学报，2002，37（11）:902.
       
       ［5］李 斌, 吴 芹, 石京山, 等.普鲁托品对大鼠主动脉血管平滑肌细胞内游离钙浓度和蛋白激酶C活性的影响［J］.生理学报，2005,57(2):240.
       
       ［6］朱 毅，刘国雄，黄燮南,等.钩藤碱和异钩藤碱对豚鼠心房的负性变时和变力作用［J］.中国药理学与毒理学杂志，1993,7（2）：117.