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       【摘要】 
       目的建立开口箭中总皂苷含量测定方法。方法采用比色法：香草醛-冰醋酸溶液为发色体系，检测波长为（458 ±2）nm。结果标准曲线在0.10～0.40 mg范围内(r = 0999 7)线性关系良好。平均回收率97.2%，方法的变异系数为4.57%，测得开口箭70%乙醇提取物中总皂苷平均含量为13.51%。结论方法简便，准确，重现性好，可用于开口箭总皂苷含量测定。
       【关键词】  开口箭总皂苷 开口箭 比色法
       Abstract:ObjectiveTo set up an assay method for the determination of total saponin in Tupistra chinensis Bak.MethodsThe samples were determined by spectrophotometry. The detective wavelength was (458 ±2)nm. ResultsThe calibration curve was linear in the range of 0.1～0.4 mg and the average recovery was 97.2%(RSD＜4.57%).ConclusionThe method is reliable,accurate. It can be used for the quality control of the total saponin in Tupistra chinensis Bak.
       Key words:Total saponin；  Tupistra chinensis Bak.；  Spectrophotmetry;  Spectrophotometry
        开口箭Tupistra chinensis Bak.系百合科（Liliaceae）铃兰族开口箭属植物。其原植物又名开喉箭、万年青，为多年生常绿草本，以其根状茎入药，作为药用又名岩七、竹根七、竹节参、竹根七、竹节七、牛尾七等。医学古籍记载，开口箭味甘微苦，性寒，主治劳热咳嗽、跌打损伤、风湿痹痛、月经不调等症。土家族民间用其漱口液治疗咽喉炎、扁桃体炎，疗效显著［1］。我国开口箭属植物约占全世界的70%, 分布于陕西、甘肃、湖北、四川、云南、贵州等省。主产于湖北三峡库区及神龙架林区，栽培面积大，产量高，资源十分丰富。
        本实验室对神农架产开口箭Tupistra chinensis Bak.的生药学、化学成分和药理活性进行了研究，结果表明开口箭正丁醇提取物对Hela，K562，A2780a等具有很好的抑制作用，细胞毒活性好，抗炎活性也很好。也曾报道了“开口箭中甾体皂苷元的含量测定”［2］。本文进一步探索建立了香草醛-冰醋酸-高氯酸-比色法测定开口箭中总皂苷含量的方法。
       1  材料与仪器
       1.1  材料
       开口箭根茎，采自湖北省神农架林区，其原植物标本于200207采自同一地区，经三峡大学化学与生命科学学院陈发菊副教授鉴定为Tupistra chinensis Bak.，原植物及药材现保存于本实验室（编号TC200207SNJ）。总皂苷对照品，本实验室自开口箭分离纯化的皂苷单体3-O-b-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-b-D-吡喃葡萄糖基-(1→2)-b-D-吡喃葡萄糖基(25R)-5(6)-烯-呋甾-3b, 22a, 26-三羟基26-O-b-D-吡喃葡萄糖苷。含量>98%（HPLC测定）。其他试剂均为分析纯。
       1.2  仪器S3100 紫外分光光度计（韩国Scinco 公司），BP211D型电子天平（德国Sartorius公司）。
       2  方法
       2.1  对照品、供试品溶液的制备
       2.1.1  对照品溶液的制备精密称取经干燥至恒重的开口箭总皂苷对照品0.005 0 g ，加甲醇溶解定容至5 ml，制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。
       2.1.2  供试品溶液的制备精密称取开口箭粉末0.70 g（60目筛，50℃干燥4 h）置圆底烧瓶中，加入25 ml 70%乙醇溶液，浸泡过夜，60℃回流提取两次，2 h/次, 减压抽滤，滤液合并，置蒸馏烧瓶中，在旋转蒸发仪上减压浓缩，除尽溶剂后，加少量甲醇溶解，定容至25 ml，过滤，取续滤液作为供试品溶液。
       2.2  测定方法适量供试品溶液置干燥具塞试管，60℃水浴挥干溶剂后，精密加入0.2 ml 5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8 ml 高氯酸，摇匀， 置60 ℃恒温水浴加热20 min，取出，立即置冰水浴中冷却15 min，加入5 ml冰醋酸，摇匀，同时做空白，于（458±2）nm波长处测定吸光度值。
       2.3  标准曲线的绘制与线性关系精密吸取对照品溶液0.10，0.15，0.20，0.25，0.30，0.35，0.40 ml，分别加入干燥具塞试管中，60 ℃水浴挥干溶剂, 依次加入0.2 ml 5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8 ml 高氯酸，置60℃水浴加热20 min，取出，立即置冰水浴中15 min，停止反应，加入5 ml冰醋酸，摇匀，于458 nm处测定吸光度，同时做试剂空白。以吸光度为纵坐标，以对照品质量为横坐标,绘制标准曲线, 得线性回归方程W = 0.063 1 + 0.283 5A，r=0.999 7，对照品在0.10～0.40 mg范围内线性关系良好。
       3  结果
       3.1  精密度及重现性实验精密吸取对照品溶液0.2 ml, 共6份，按“2.2” 项下方法自60℃水浴挥干起测定（见表1）。其RSD为 1.09 %，表明方法精密度良好。精密称取样品粉末0.07 g，共5份，按供试品溶液制备方法制备，精密吸取0.05 ml, 显色测定（见表2）。其RSD为4.58%，表明方法重现性良好。表1  精密度实验结果（略）表2  重现性实验结果（略）
       3.2  显色溶液稳定性实验精密量取对照品溶液和供试品溶液适量，分别按标准曲线的制备方法显色后放置, 于0 ，30 ，60，90，120 min测定吸收度值（见表3）。结果表明对照品和供试品在120 min内显色稳定。表3  显色后溶液稳定性实验结果（略）
       3.3  加样回收率实验精密称取已知总皂苷含量的开口箭粉末，共5 份, 加入对照品适量, 按照供试品溶液制备方法制备，显色测定。结果见表4, 平均回收率为 97.2%，RSD为2.26%。表4  加样回收率实验结果（略）
       3.4  样品含量测定精密吸取按供试品溶液0.05 ml, 按“2.2”测定方法项下操作，同时做空白，计算供试品中总皂苷含量。结果见表5。结果表明开口箭70%乙醇提取物总皂苷含量为135.1 mg/g，其百分含量为13.51%，RSD为4.57%。表5  样品中总皂苷含量测定结果（略）
       4  讨论
        经过对皂苷类含量测定文献的统计与分析，选定下列4 种显色剂：0.2 ml 5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8 ml 高氯酸、 0.5 ml 8%香草醛乙醇溶液和5.0 ml 72%硫酸试液、高氯酸、0.2 ml 5%香草醛-冰醋酸溶液和0.8 ml高氯酸；4种不同的显色温度：55，60，65，70℃；4种不同的显色时间：10，15，20，25 min；通过实验进行比较。发现用0.2 ml 5%香草醛-冰醋酸和0.8 ml 高氯酸作显色剂，显色温度为60℃，显色时间为20 min时，对照品溶液与供试品溶液在（458±2）nm波长处均有最大吸收。
        对照品溶液依法显色后，溶液的波长（400～700 nm）扫描图中，在458和554 nm两处均出现最大吸收峰，但供试品溶液的最大吸收峰分别在456 nm和580 nm处，表明供试品溶液在580 nm处的吸收峰有其它成分干扰，而在456 nm处的吸收峰无其它成分干扰，吸收稳定。
        供试品溶液制备时分别用水、甲醇、70%乙醇、95%乙醇作溶剂，进行比较，发现70%乙醇溶液浸泡开口箭粉末时其总皂苷溶出量最大。
        建立了开口箭总皂苷含量测定方法，采用5%香草醛-冰醋酸溶液为发色体系的比色法测定开口箭中总皂苷的含量，显色后溶液在120 min内稳定，标准曲线在0.10～0.40 mg范围内线性关系良好，方法的精密度和重现性好，RSD分别为1.09%和4.58%；加样平均回收率为97.2%，RSD为 2.26%；测得开口箭70%乙醇提取物中总皂苷平均含量为135.1 mg/g，其平均百分含量为13.51%，RSD为4.57%，方法操作简便，精密度及准确度高, 重现性及稳定性好,可用于开口箭药材的质量控制。
       【参考文献】
         　　［1］翟士辉. 土家族药开口箭漱口液临床应用治疗咽喉炎45例［J］.中国民族民间医药杂志，1999，(3):140.
       
       ［2］黄 丽，廖全斌，邹 坤，等.开口箭中甾体皂苷元的含量测定［J］.三峡大学学报（自然科学版），2003，25（6）:562.