文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的观察从广西藤茶中提取出的一有效部位TTF抗鸭乙型肝炎病毒的作用。方法选1日龄北京雏鸭，人工感染鸭乙型肝炎病毒（DHBV）动物模型，应用斑点杂交法观察TTF对鸭血清鸭乙型肝炎病毒DNA(DHBV-DNA)的影响。结果DHBV感染鸭在感染后第7天口服TTF药物治疗，75～150 mg/kg组2次/d，10 d对鸭血清DHBV-DNA水平有一定的抑制效果；300 mg/kg组，对感染鸭血清DHBV-DNA水平的抑制作用显著，停药3 d未见明显的反跳现象。结论TTF可明显抑制DHBV-DNA复制，提示TTF有抗HBV的作用。
       
       【关键词】  藤茶 鸭乙型肝炎病毒(DHBV) 鸭乙肝动物模型
       Abstract:ObjectiveTo investigate the anti-HBV effect of TTF.Methods1-day old Beijing ducklings were used as the hepatitis B animal model. DHBV DNA was detected by dot-blot hybridization test. ResultsAfter medicated with TTF for 5 days and 10 days, optical density value(OD value) of DHBV-DNA in ducklings sera was obviously lower than that before treatment, there were different influences in different groups and rebound phenomenon didn`t appear in both TTF-groups 3 days after stopping medication.ConclusionTTF is efficient in treating DHBV,which indicates that TTF has an anti-HBV effect.
       Key words:Teng cha;  Duck hepatitis B virus;  Duck hepatitis Model
        藤茶系葡萄科蛇葡萄属植物显齿蛇葡萄Ampelopsis grossedentata （Hand-Mazz）W.T.Wang的嫩茎叶，在广西、广东、云南、贵州、福建等均有分布，亦称甜藤茶、田婆茶、乌蔹、红五爪金龙、大齿蛇葡萄。其味甘、淡，性凉，具有清热解毒、祛风湿、强筋骨、消肿止痛之功效。藤茶在民间流传应用已有数百年历史，是瑶族群众的家常备用药。民间用于治疗黄疸型肝炎，感冒发热，咽喉肿痛，急性结膜炎或水煎外洗治疗痈疮湿毒等［1～3］。藤茶主要成分是黄酮类化合物，含量约为45.52%［4］。郑氏［5］研究结果表明藤茶总黄酮对2215细胞分泌的HBsAg抑制率为43.14%,半数有效剂量(IC50)为40.21  μg/ml, 治疗指数(SI)为3.11；对2215细胞分泌的HBeAg抑制率为33.76%；对HBV-DNA有一定抑制作用。为此，笔者对TTF进行体内抗鸭乙型肝炎病毒的实验研究。现报道如下。
       1  材料
       1.1  受试药物TTF为浅黄色粉末结晶，由本校中药化学教研室提供，含量90%以上。
       1.2  病毒鸭乙型肝炎病毒DNA(DHBV-DNA)强阳性血清, 采自上海麻鸭, -70℃保存。
       1.3  试剂DMSO（AR，广州市新港化工有限公司）；α-32P-Dctp（北京福瑞生物技术工程公司）；缺口翻译药盒（普洛麦格公司(Promega Co.)； Sephadex G-50（Ficoll）； PVP（瑞典Pharmacia公司）；SDS（西德Merck公司）；鱼精DNA，牛血清白蛋白均购自中国科学院生物物理所；硝酸纤维素膜0.45 μm（Amersham 公司）。
       1.4  仪器BP211D万分之一克电子天平（德国赛多利斯）；酶标仪（奥地利SUNRISE）；微量加样器（法国Gilson）；Biofuge Stratos高速低温离心机（德国Heraeus）；座式自动电热压力蒸汽灭菌器（上海申安医疗器械厂）。
       1.5  阳性对照药拉米夫定（3TC），葛兰素威康制药公司，B008923。
       1.6  动物1日龄北京鸭, 购自北京前进种鸭动物饲养场。
       2  方法及结果
       2.1  TTF抗鸭乙肝病毒实验
       2.1.1  鸭乙型肝炎病毒感染1日龄北京鸭, 经腿胫静脉注射上海麻鸭DHBV-DNA 阳性鸭血清, 0.2 ml/只, 在感染后7 d取血, 分离血清, -70℃保存待检。
       2.1.2  药物治疗实验DHBV感染雏鸭7 d后随机分组进行药物治疗试验，每组6只,给药组分3个剂量组，分别为75，150，300mg/kg组，口服，2次/d，连续给药10 d。设病毒对照组(DHBV)，以生理盐水代替药物。阳性药用3TC，口服给药50 mg/kg，2次/d，连续给药10 d。在感染后第7天即用药前(T0)，用药第5天(T5)，用药第10天(T10)和停药后第3天(P3)，自鸭腿胫静脉取血，分离血清，-70℃保存待检。
       2.1.3  检测方法
       取上述待检鸭血清，每批同时点膜，测定鸭血清中DHBV-DNA水平的动态。按缺口翻译试剂盒说明书方法，用32P标记DHBV-DNA探针，并作鸭血清斑点杂交，放射自显影膜片斑点，在酶标检测仪测定OD值(滤光片为490 nm)，计算血清DHBV-DNA密度，以杂交斑点OD值作为标本DHBV-DNA水平值。将每组鸭用药后不同时间(T5、T10)和停药后第3天(P3)血清DHBV-DNA水平与同组给药前(T0)OD值比较，采用配对t检验，分析差异的显著性，判断药物对病毒感染的抑制效果。按公式计算每组鸭用药后不同时间(T5，T10)和停药第3天(P3)血清DHBV-DNA的抑制率%,并作图,比较各组鸭血清DHBV-DNA抑制率的动态。
        DNA抑制率（%）＝ 给药前（T0）OD值-给药后（T5，T10，P3）OD值给药前（T0）OD值× 100%
        将给药治疗组不同时间DHBV-DNA抑制率分别与病毒对照组相同时间DHBV-DNA抑制率比较，采用成组t检验，作统计学处理，计算t、P值，分析差异的显著性，判断药效。
       2.2  结果
       2.2.1  1日龄北京鸭感染DHBV后，血清DHBV-DNA动态DHBV-DNA感染鸭口服生理盐水后DHBV-DNA斑点杂交结果见图1。实验感染鸭30只血清DHBV-DNA全部阳性。病毒对照组6只雏鸭感染后第7天血清DHBV-DNA全部阳性,实验全程21 d内血清DHBV-DNA水平感染后基本平稳。全程不同时间血清DHBV-DNA有所波动, 感染后和给予生理盐水治疗10 d血清DHBA-DNA水平无显著差别。
       2.2.2  对DHBV感染鸭血清DHBV-DNA的影响结果表明，TTF低剂量组在给药第10天和停药后3 d与给药前(T0)比较计算抑制率， 配对分析比较，有显著性和非常显著性意义（P<0.05～0.01）。成组对比,无统计学意义；中剂量组在给药后第5，10天及停药后3 d(P3)，配对分析，都有显著性意义(P<0.05)。成组分析，无统计学意义；高剂量组在给药后第10天(T10)与给药前(T0)比较计算抑制率，配对分析，有非常显著性意义(P<0.01)。鸭血清DHBV-DNA水平与病毒对照组比较，在给药第10天（T10），成组分析，有显著性意义(P<0.05)；3组均未见反跳现象。口服阳性药3TC 50 mg/kg，结果表明给药第5，10天(T5，T10)鸭血清DHBV-DNA水平OD值与给药前(T0)作配对分析比较，及给药后血清DHBV－DNA抑制率与病毒对照组作成组分析，均有非常显著性差异（P<0.01）。但停药后3 d（P3）给药组鸭血清DHBV－DNA水平OD值与给药前(T0)比较，有反跳现象。结果见表1～2和图2。表1  TTF对鸭血清DHBV-DNA水平的影响（略）表2  TTF鸭血清DHBV-DN水平抑制率的影响（略）
       3  讨论
        国内外学者目前普遍采用DHBV 感染1～3 日龄雏鸭建立乙型肝炎动物模型, 其病毒血症持续时间较长且较稳定, 无明显的自然转阴现象, 是研究人类乙型肝炎发病机制, 病毒复制过程及筛选有效治疗药物的理想动物模型。
        郑氏［5］研究了藤茶总黄酮体外抗乙型肝炎病毒（HBV）作用，结果表明体外对HBsAg、HBeAg和HBV-DNA有明显的抑制效果。笔者应用1日龄北京雏鸭经腿胫静脉注射DHBV-DNA 阳性血清的方法来建立乙型肝炎动物模型, 观察从藤茶中提取出TTF的抗病毒作用,结果显示TTF低、中、高剂量组给药后均有一定的抑制鸭血清DHBV-DNA水平的作用（P<0.05～0.01），且停药后3 d检测结果表明TTF没有反跳现象。为开发TTF为治疗乙型肝炎的新药提供实验依据。
        致谢:本实验承蒙中国医学科学院生物技术研究所李壮老师指导，谨致谢意！
       【参考文献】
         　　［1］中国科学院植物研究所．中国高等植物图谱补编，第2册［M］.北京:科学出版社,1983:342.
       
       ［2］广西壮族自治区中医药研究所．广西药用植物名录［M］.南宁:广西人民出版社,1986:300.
       
       ［3］全国中草药汇编编写班.全国中草药汇编，下册［M］.北京:人民卫生出版社,1978:789.
       
       ［4］周桂霞，何 群，等．瑶族藤茶中总黄酮类成分的含量测定［J］.湖南中医药学报，1999，5（12）：30.
       
       ［5］郑作文. 藤茶总黄酮在2215细胞培养中对乙型肝炎病毒HBsAg、HBeAg和HBV-DNA的抑制作用［J］.山东中医杂志，2003，22（9）：561.