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       【摘要】 
       目的考察肝脂平胶囊中芍药苷的最佳提取工艺。方法通过正交实验，以芍药苷的含量和干膏收率为指标，考察加水量、煎煮时间、煎煮次数对提取效果的影响。结果肝脂平胶囊中芍药苷的最佳提取工艺为加水10倍，煎煮3次，1 h/次。结论最佳工艺稳定，提取率高。
       【关键词】  芍药苷 高效液相色谱 提取工艺 正交设计
       Abstract:ObjectiveTo optimize the preparation process of peoniflorin in Ganzhiping Capsules. MethodsThe optimum preparation process was investigated by L9（34）orthogonal design with the peoniflorin and the extraction rate of dry ointment as indexes. The chief factors influencing the extraction efficiency sach as the content of the times of added water，the time of extraction and times of boiling were investigated.ResultsThe optimum technical condition was to add 10 times amount of water，extracting 3 times and boiling 1h each time. ConclusionPeoniflorin content was high. The method is reliable，accurate and easy to operate.
       Key words:Peoniflorin；  HPLC；  Extraction process；  Orthogonal design
        肝脂平胶囊是由姜黄、赤芍等组成的复方制剂，具有疏肝理气、活血化淤、软坚散结、健脾渗湿的功效。方中君药姜黄主要含挥发油和姜黄素类化合物，姜黄素类不溶于水及乙醚，溶于乙醇及冰醋酸；臣药赤芍主要有效成分为芍药苷（C23H28O11），具有较好的抗炎、活血化淤通脉［1］等功效，具有一定的代表性。海藻的主要有效成分海藻酸钠及海藻多糖也为水溶性成分。所以，赤芍、海藻采取传统的水提工艺。《中国药典》2005年版Ⅰ部［2］对芍药苷的含量规定不得少于1.8%，经含量测定符合《中国药典》标准。本研究通过正交实验法确定其最佳提取工艺。
       1  器材
        Agilent 1100高效液相色谱仪，G1311A泵，G1316紫外检测器；色谱柱Zorbax SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；Mettler十万分之一电子分析天平；RE-52AA旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂）；超声波清洗器（华南超声设备厂）；DZF-6020型真空干燥箱（上海精宏实验设备有限公司）；芍药苷对照品均购自中国药品生物制品检定所；试剂均为分析纯。赤芍等购自武昌区药材公司，姜黄购自广西，经鉴定均为正品。
       2  方法与结果
       2.1  方法赤芍、海藻采取传统的水提工艺，以芍药苷为考察指标，影响提取率较大的因素可能有：加水量、提取次数、提取时间、浸泡时间等。将浸泡时间和吸水量单独考虑，把加水量、提取次数、提取时间设置到正交水平表中，共有3个因素。各设3个水平，其因素水平设置见表1。表1  赤芍、海藻水提因素水平（略）
       考虑各因素的交互作用，选用L9（34）进行正交实验。
       
       按处方比例，取赤芍饮片和海藻9份，每份50 g，置1 000 ml圆底烧瓶中用可调温电热套加热回流提取，按表1中各实验号因素水平的要求进行处理，以干膏量和总干膏中芍药苷的含量为考察指标，结果见表2～4。
       2.2  色谱条件色谱柱为Zorbax SB-C18（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为甲醇-0.05 mol/L磷酸二氢钾溶液（40∶65）；流速1  ml/min；检测波长230 nm；柱温35℃；灵敏度0.08AUFS。
       2.3  测试溶液的制备
       2.3.1  对照品溶液的配制精密称取经P2O5减压干燥器中干燥36 h的芍药苷对照品12.66 mg于25 ml容量瓶内，加甲醇20 ml后超声处理20 min使溶解，放至室温，加甲醇定容至刻度。
       2.3.2  药材溶液的制备称取赤芍粗粉0.5 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇25 ml，称定重量。浸泡4 h，超声处理20 min，放至室温，再称定重量，用甲醇补足损失的重量，摇匀，滤过，即得。
       2.3.3  供试品溶液的制备取赤芍和海藻提取的干膏适量，精密称定，置25 ml容量瓶内，精密加入甲醇20 ml后超声20 min使溶解，放至室温，加甲醇定容至刻度。
        进样前均用0.45 μm微孔滤膜过滤。
       2.4  标准曲线的制备用微量进样器分别取已配好的对照品溶液3，4，5，6，7，8 μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积，根据进样量和测得的峰面积计算标准曲线（附HPLC图1～3）。经计算得回归方程：Y=1 990.2X－698.1（r=0.999 99，n=6）。这一结果显示芍药苷的进样量与峰面积在1.519～4.051 μg范围内具有良好的线性关系。
       2.5  稳定性实验吸取供试品溶液，用20 μl定量环间隔一定时间（2 h）进样，连续测定5次。实验结果表明，芍药苷在8 h内基本稳定，记录各峰面积，RSD=2.04%。
       2.6  精密度实验用20 μl定量环进芍药苷对照品溶液，按上述色谱条件，重复进样5次，测定峰面积并计算其相对标准偏差，RSD=0.97%，结果表明精密度较好。
       2.7  回收率实验采用加样回收法，取适量样品，加入芍药苷适量，按上述色谱条件测定，计算回收率。平均回收率为99.15%，RSD=2.53%。结果表明，本方法具有良好的回收率。
       2.8  结果统计与分析结果统计见表2～4。从方差分析表和正交试验结果可以看到，三因素中，对干膏量的影响大小依次为C > B > A，且C3 > C2 > C1；B3 > B2> B1；A3 > A2 > A1，其中仅C因素对干膏量有显著影响（F=72.105 5）。三因素对干膏中芍药苷总量的影响大小依次为C > B > A，且C3 > C2 > C1；B2 > B3 > B1；A3 > A2 > A1，其中仅C因素对芍药苷总量有显著影响（F=104.67）。故选定A 、C因素的水平为A3、C3，对于B因素，在给定的水平条件下，虽无显著影响，但从节省能源、有效成分尽量提取充分的角度考虑，拟选定B因素的水平为B2。因此，从实际出发，综合考虑，选择的最佳提取工艺为A3B2C3。即10倍水，煎煮3次，1 h/次。表2  赤芍、海藻水提正交实验安排及结果（略）表3  干膏量的方差分析（略）表4  芍药苷含量的方差分析（略）
       2.9  验证实验按最佳工艺验证4批，所得药液同前法处理，测定，取4批的平均值，得干膏量12.790 1 g，芍药苷总量为0.693 0 g，有效成分的转移率为80.10%。其干膏收率、干浸膏中芍药苷的含量基本稳定，说明工艺较稳定。
       3  讨论
       3.1  赤芍、海藻药材的吸水量实验按处方比例，称取赤芍和海藻混合生药10 g加水浸泡过夜，倒出水液，药渣放于滤纸上至滤纸不出现明显水迹时称重，得22.4 g，即10 g赤芍和海藻生药吸水12.4   g，吸水率为124%。
       3.2  赤芍、海藻生药浸泡时间实验取10 g生药浸泡30 min后，赤芍药材饮片外周已润但中心未透，继续观察1 h左右润透。
       3.3  加水量、煎煮次数的验证因为正交结果加水量、煎煮次数均为最大值，为了考察正交设计的严密性，将药渣再行提取1次，第4次的转移率为1.42%。结果可知，按最佳工艺提取赤芍、海藻4份，其干膏量、干膏中芍药苷的总含量基本稳定，多提1次对其结果影响不大，说明工艺较稳定。
       【参考文献】
         　　［1］《中华本草》编委会.中华本草，第3册［M］.上海：上海科技出版社，1999：521.
       
       ［2］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2005：109.