紫荆花总黄酮提取工艺的优化研究
作者：徐美奕 韩雅莉 陈志红
《时珍国医国药》 2007年 第11期
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【摘要】
目的筛选紫荆花总黄酮的最佳提取工艺条件。方法通过水提、水提醇沉、醇提及酸醇提取4种工艺比较，确定采用醇提工艺；采用L9(34)正交试验来确定醇提优化提取工艺条件。结果紫荆花总黄酮的优化提取工艺条件为15倍量55%乙醇、100℃水浴、每次2 h回流提取3次，总黄酮平均得率为7.32%，RSD为1.44%～1.88%。结论优化提取工艺简单、稳定、可行。
【关键词】 紫荆花 总黄酮 提取 正交实验
Abstract：ObjectiveTo optimize the extraction conditions of total flavonoids in Cercis chinensis Bge.MethodsBased on comparison of 4 kinds of water extraction,water extraction and alcohol precipitation,ethyl alcohol extraction,acid and ethyl alcohol extraction, for total flavonoids were confirmed. The parameters of ethyl alcohol extraction were performed and confirmed by L9(34) orthogonal test. ResultsThe optimum extraction conditions of total flavonoids in Cercis chinensis Bge were 15 volume of 55% ethyl alcohol, 2 h hot water refluence at 100℃ for 3 times. Average extraction rate of total flavonoids was 7.32%, and their RSD was 1.44%～1.88%.ConclusionThis optimized process is simple, stable and efficient.
Key words：Cercis chinensis Bge; Total flavonoids; Extraction; Orthogonal test
黄酮类化合物广泛存在于许多植物中，具有多样生物活性，尤其在治疗心血管疾病方面有强心、抗心肌缺血、扩张血管、降压、抗心律失常、降血脂、抗动脉粥样硬化等多种作用，能有效抑制血小板聚集和防治血栓形成［1～3］。紫荆花Cercis chinensis Bge系豆科植物紫荆的花，具有清热、凉血、去风解毒的功效，可用于治疗风湿筋骨疼痛，外用治疗鼻中疳疮，民间应用紫荆花治疗血小板减少性紫癜［4，5］。紫荆花总黄酮的提取研究在国内外文献尚未见报道，本研究以总黄酮含量(得率)为考察指标，筛选其优化提取工艺，为进一步研究开发提供实验依据。
1 仪器与材料
1.1 仪器UV 23101PC型分光光度计(日本岛津公司)，FS862A 型药物粉碎仪(浙江)，R205B 型旋转蒸发仪(上海申生科技有限公司)；SUPERMODULYO型冷冻干燥机(英国EDWARDS公司)。
1.2 对照品芦丁对照品由Sigma公司提供。
1.3 药材紫荆花采集于广东医学院校园内，采集时间为200611～12。采摘干净的紫荆花置于阴凉通风处晾干，摘除花柄，用不锈钢剪刀将花瓣剪碎，粉碎，密封后置-20℃保存备用。
1.4 试剂 所有实验试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 不同提取工艺实验
2.1.1 水提
称取紫荆花粉10 g，加20倍量双蒸馏水，于100℃水浴回流2 h，纱布过滤，滤渣中再加双蒸馏水100 ml于100℃回流2 h，重复1次，合并滤液，抽滤。滤液用旋转蒸发仪减压浓缩，真空干燥。
2.1.2 水提醇沉
称取花粉10 g，加20倍量水100℃回流2 h，纱布过滤，滤渣中再加水100 ml于100℃回流2 h，重复1次，合并滤液，抽滤。滤液减压浓缩至原体积的1/6，加入3倍量无水乙醇，4℃放置24 h沉淀，抽滤，滤液减压浓缩，真空干燥。
2.1.3 醇提称取花粉10 g，加20倍量75%乙醇，100℃回流2 h，纱布过滤，滤渣中再加75%乙醇100 ml于100℃回流2 h，重复1次，合并滤液，抽滤。滤液减压浓缩，真空干燥。
2.1.4 酸醇提取称取花粉10 g，加20倍量75%乙醇，调pH为3～4，100℃回流2 h，纱布过滤，滤渣中再加75%乙醇(pH3～4)100 ml于100℃回流2 h，重复1次，合并滤液，抽滤。滤液减压浓缩，真空干燥。
2.2 含量测定
2.2.1 标准曲线的制备［6］
精确称取干燥至恒重的芦丁对照品5.0 mg于25 ml容量瓶中，用乙醇溶解、定容。分别取1.0，2.0，3.0，4.0，5.0，6.0，7.0 ml标准品溶液于25 ml容量瓶中，加入5%亚硝酸钠溶液1 ml，摇匀，放置6 min，加入10%硝酸铝溶液1 ml，摇匀，放置6 min，加入10%氢氧化钠10 ml，加水至刻度，摇匀，放置15 min。在510 nm波长测定吸光度，以芦丁标准品溶液浓度(C)为横坐标，吸光度(A)为纵坐标，得回归方程为A=14.163C-0.004 5，相关系数r=0.999 2。
2.2.2 样品总黄酮含量的测定精确称取不同方法提取的浸膏粉末，用70%乙醇溶解并定容至25 ml，分别吸取3 ml于25 ml容量瓶中，按标准曲线制备各项处理，在510 nm波长测定吸光度，代入回归方程，计算总黄酮含量。总黄酮含量见表1，单因素方差分析见表2。表1 不同提取工艺实验结果（略）表2 单因素方差分析表（略）
从表1结果可见，以生药总黄酮得率为评价指标，较佳的提取工艺为酸醇提取法和醇提法，考虑到实际操作上酸碱对仪器的腐蚀，优选乙醇提取工艺。从表2结果可见，各提取工艺间有显著性差异(P<0.01)。
2.3 醇提优化工艺研究
2.3.1 正交实验
根据黄酮提取条件，选取提取温度(A)、乙醇浓度(B)、提取时间(C)、溶剂用量(D) 4个因素，各取3个水平，进行L9(34)正交实验，回流次数3次，因素水平见表3，以生药总黄酮得率为考察指标。结果见表4，方差分析见表5。表3 因素水平（略）表4 L9(34)正交实验设计方案与实验结果（略）表5 方差分析结果（略）
表4结果表明，由极差R可知温度(A)、乙醇浓度(B)、提取时间(C)、溶剂用量(D) 4个因素对紫荆花总黄酮的影响程度不同，各因素的影响程度依次为：乙醇浓度(B)>温度(A)>提取时间(C)>溶剂用量(D)；实验优方案为A3B1C2D2，即紫荆花总黄酮的优化提取工艺为：采用55%乙醇，提取温度为100℃，回流2 h提取3次，溶剂用量为15倍。
从表5结果可见，乙醇浓度(B)对总黄酮提取有显著影响(P<0.05)，而温度(A)、提取时间(C)、溶剂用量(D) 3个因素则无显著性影响。
2.3.2 优化工艺验证实验为了考察优化提取工艺的稳定性，按A3B1C2D2的工艺条件进行3次重复性实验。结果见表6。表6 工艺验证实验结果（略）
从表6结果可见，采用优化工艺提取的紫荆花总黄酮得率均高于正交试验表中的任何一组，说明优选工艺稳定可行。
3 讨论
3.1 提取工艺的筛选紫荆花分别采用水提、水提醇沉、醇提及酸醇提取4种工艺提取总黄酮，实验发现酸醇提取法和醇提法的提取效果较高，考虑到酸碱的腐蚀性，选取醇提工艺。
3.2 醇提优化工艺条件的确定 通过选取提取温度、乙醇浓度、提取时间、溶剂用量4个因素，各取3个水平，进行L9(34)正交试验来确定紫荆花总黄酮的优化提取工艺条件为：采用15倍量55%乙醇、100℃水浴、每次2h回流提取3次；4个因素对提取效果的影响程度依次为：乙醇浓度>温度>提取时间>溶剂用量；按优化工艺进行重复性实验，紫荆花总黄酮得率为7.28%～7.35%，平均得率为7.32%，RSD为1.44%～1.88%，结果提示优选工艺稳定可行，研究结果表明紫荆花中总黄酮的含量较高，具有一定的开发与应用前景。
【参考文献】
［1］Landolfi R., Mower R L, Steiner M. Modification of platelet function and arachidonic acid metabolism by bioflavonoids［J］.Structure-activity relations［J］. Biochem Pharmacol, 2000, 33 (9): 1525.
［2］Vermylen J, Badenhorst P N, Deckmyn H, et al. Normal mechanisms of platelet function［J］.Clin Haematol, 1993, 12(1): 107.
［3］Macfarlane S R, Seatter M J, Kanke T, et al. Proteinase-activated receptors［J］. Pharmacol Rev, 2001, 53 (2): 245.
［4］钱正清. 最新中药大辞典［M］.北京：中国中医药出版社，2005：2365.
［5］李尚德，关雄泰. 紫荆花红色素的提取及性能测试［J］.化学世界，1996，8：416.
［6］元晓梅，蒋明蔚. 聚酰胺吸附-硝酸铝显色法测定山楂及山楂制品中的总黄酮含量［J］.食品与发酵工业，1996，4：27.