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       【摘要】 
       目的拟定金防感冒颗粒的质量标准。方法采用高效液相色谱（HPLC）法测定金防感冒颗粒中对乙酰氨基酚和绿原酸的含量。结果流动相为乙腈水磷酸（50∶400∶0.2）；流速1.0 ml/min；对乙酰氨基酸检测波长为244 nm，绿原酸检测波长为325 nm。对乙酰氨基酚线性范围11.2～ 56.0 μg/ml，r=0.999 1，n=5；绿原酸线性范围2.42～21.78 μg/ml，r=0.99 8，n=5。对乙酰氨基酚平均回收率101.3%，RSD为1.7%，n=6；绿原酸平均回收率为99.0%，RSD为1.3%，n=6。结论 该法简便、灵敏、迅速、准确。
       【关键词】  金防感冒颗粒 对乙酰氨基酚 绿原酸 高效液相色谱法
       AbstractObjectiveTo establish the quality control standards for Jinfangganmao Granules.Methods The contents of Paracetamol and chlorogenic acid in Jinfangganmao Granules were determined by HPLC. ResultsMobile phase:acetonitrile-water-phosphoric acid (50∶400∶0.2); flow rate:1.0 ml/min:detection wavelength:325 nm. The linear range of chlorogenic acid was 11.2～56.0 μg/ml,r=0.999 1(n=5). The average recovery of the chlorogenic acid was 99.0%,RSD=1.3%,n=6.ConclusionThe method is simple, accurate with high sensitivity and good reproducibility.
       Key wordsJinfanggnmao Granules;  Paracetamol;  Chlorogenic Acid;  HPLC
         金防感冒颗粒是由金银花 、防风、 山楂 、 生姜 、对乙酰氨基酚等组成，具有发表解热、祛风散寒的功能。用于外感风寒、恶寒无汗、发热头痛等症。其中对乙酰氨基酚、金银花为方中君药，对乙酰氨基酚具有解热作用；金银花具有清热解毒、疏散风热的作用，含绿原酸、异绿原酸等成分。本实验对制剂中对乙酰氨基酚、金银花所含的绿原酸含量进行了研究。
       1  器材
        金防感冒颗粒，批号：020401，020402，020403，020501，020502，020503，020601，020602，020603，020604由三九黄石制药厂提供；020328，020329，020330由河北宏宝药业提供。
        美国贝克曼338型高效液相色谱仪，浙江大学upper色谱工作站，Kromasil C18(250 mm×4.6 mm,5 μm)色谱柱。
        对乙酰氨基酚、绿原酸对照品均为中国药品生物制品检定所提供，批号分别为0018-9206，0753-200111。
       2  方法与结果
       2.1  对照品溶液的制备
       2.1.1  对乙酰氨基酚对照品溶液的制备 精密称取对乙酰氨基酚14 mg，置于50 ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密吸取5 ml，置于50 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每毫升含对乙酰氨基酚 28 μg）。
       2.1.2  绿原酸对照品溶液的制备精密称取绿原酸对照品10 mg，置于50 ml量瓶中，加无水乙醇溶解并稀释至刻度，摇匀。精密量取5 ml，置于100 ml量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀，即得（每毫升含绿原酸10 μg）。
       2.2  色谱条件及测定波长的选择
       2.2.1  测定波长的选择取对乙酰氨基酚对照品溶液及绿原酸对照品溶液，分别于岛津UV-2100型分光光度计上在200-360 nm波长范围内进行光谱扫描，结果对乙酰氨基酚于244 nm波长处有最大吸收，绿原酸于325 nm波长处有最大吸收。因其在244 nm及325 nm处灵敏度高，可减少取样量，减少对柱污染，故本实验选择244 nm及325 nm作为测定波长分别测定对乙酰氨基酚及绿原酸。试验中曾采用波长变换的方法，在一次进样的情况下同时测定对乙酰氨基酚和绿原酸两种成分，亦有较好的实验效果，但考虑部分厂家仪器条件情况而未采用。
       2.2.2  色谱条件流动相为乙腈
       
       水磷酸（50∶400∶0.2）；流速1.0 ml/min；柱温为室温；对乙酰氨基酚检测波长为244 nm，绿原酸检测波长为325 nm；AUFS 0.05，进样量10 μl。理论板数按对乙酰氨基酚计算，不低于3 000。
       2.3  线性实验
       2.3.1  对乙酰氨基酚 
       取对乙酰氨基酚对照品溶液（280 μg/ml）2，4，6，8，10 ml分别加水定容至50 ml，各进样10   μl，测定峰面积值，将各自的峰面积值与各自的含量进行线性回归，得回归方程：Y=3.575 9×109X－2 647.2，r=0.999 1，n=5。结果表明对乙酰氨基酚在11.2～56.0 μg/ml的范围内，线性关系良好。见表1。表1   对乙酰氨基酚标准曲线实验结果（了）
       2.3.2  绿原酸 
       取绿原酸对照品溶液（242 μg/ml）1，3，5，7，9 ml分别加水定容至100 ml，各进样10 μl，测定峰面积值，将各自的峰面积值与各自的含量进行线性回归，得回归方程：Y=3.075 07×109X－167.37，r=0.999 8，n=5。结果表明绿原酸在2.42 ～ 21.78 μg/ml的范围内，线性关系良好。见表2。表2  绿原酸标准曲线实验结果（略）
       2.4  空白实验
        取不含对乙酰氨基酚的空白样品，研细，精密称取适量（约为平均装量的1/20），置50 ml量瓶中，加无水乙醇40 ml，超声处理10 min，取出，放置至室温，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液5 ml加水稀释至50 ml，摇匀，作为空白样品溶液1。进样10 μl测定，结果空白样品色谱中，在与对乙酰氨基酚峰相同时间处，无色谱峰，即空白样品1无干扰。
        取不含绿原酸的空白样品，研细，精密称取适量（约为平均装量的1/20）,置25 ml量瓶中，加无水乙醇20 ml，超声处理10 min，取出，放置至室温，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，过滤，精密量取续滤液5 ml加水稀释至10 ml，摇匀，作为空白样品溶液2。进样10 μl测定，结果空白样品色谱中，在与绿原酸峰相同时间处，无色谱峰，即空白样品2无干扰。
       2.5  精密度实验及稳定性实验取供试品溶液，每隔1 h进样1次，连续进样6次，结果对乙酰氨基酚峰面积平均值为100 085.6，RSD为1.0%，绿原酸峰面积平均值为37 808.7，RSD为1.40%。表明供试品溶液在5 h内稳定，且精密度良好。结果见表3。表3  精密度及稳定性实验结果（略）
       2.6  重现性实验取批号为20020401的供试品，照含量测定方法测定5次，对乙酰氨基酚平均含量（标示量）为100.3%，RSD为1.2%，n=5；绿原酸平均含量为10.6 mg，RSD为1.4%，n=5。结果见表4。表4  重现性实验结果（略）
       2.7  加样回收率实验取已测定含量的供试品0.75 g（批号为020401，平均装量15.05 g，对乙酰氨基酚含量为0.018 59 g/g，绿原酸含量为0.730 mg/g），精密称定，精密加入对照品溶液适量（分别相当于样品含量的80%，100%，120%），照含量测定方法加无水乙醇溶解并依法测定。结果对乙酰氨基酚平均回收率为101.3%，RSD为1.7%，n=6；绿原酸平均回收率为99.0%，RSD为1.3%，n=6。结果见表5。表5  加样回收实验结果（略）
       2.8  样品测定结果及含量限度取金防感冒颗粒13批，照含量测定方法依法测定。结果（见表6）。13批样品对乙酰氨基酚含量均在其标示量的90.0%～110.0%的范围内，绿原酸含量均在每袋6 mg以上。但考虑金银花品种较复杂、南北方各企业原材料来源不尽相同，绿原酸含量暂定为每袋不低于7.0 mg，对乙酰氨基酚含量暂定为标示量的90.0%～110.0%。表6  样品测定结果（略）
       3  讨论
        取绿原酸对照品溶液，于岛津UV-2100型分光光度计上在200～360 nm波长范围内进行光谱扫描，结果绿原酸于325 nm波长处有最大吸收，因其在325 nm处灵敏度高，可减少取样量，减少对柱污染，故本实验选择325 nm作为测定波长测定绿原酸。
        《中国药典》［1］2000年版Ⅰ部金银花的含量测定采用乙腈0.4%磷酸(40∶400)作为流动相［2］，经测定其pH值低于2，在色谱柱耐受下限，经改进后其pH值约为3，较好地保护了色谱柱，并能达到高柱效。
       
       本实验方法具有专属性强、准确、快速等特点，可用于金防感冒颗粒的质量控制。
       【参考文献】
         　　［1］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：177，206.
       
       ［2］卫生部药品标准WS3-B-3717-98，Z19-231.