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       【摘要】 
       目的观察竹节参的有效成分竹节参总皂苷（total saponins of Panax japonicus，TSPJ）的免疫调节作用。方法灌胃给TSPJ 14 d，测定小鼠巨噬细胞碳清除率、血清溶血值，二硝基氟苯诱导的小鼠迟发性超敏反应（DTH），放射免疫法检测血中IL2，TNFα含量，观察TSPJ对小鼠免疫功能的影响。结果与空白组比较，TSPJ对胸腺指数及碳清除率无明显影响；降低血清溶血素水平及抗体生成细胞数；能降低血中IL2，TNFα含量；25 mg·kg-1TSPJ ig对DTH反应有一定的增强作用，100 mg·kg-1TSPJ ig则有抑制作用。结论 TSPJ能明显调节小鼠免疫功能,这可能是其治疗风湿类疾病的机制之一。
       【关键词】  竹节参总皂苷 免疫功能 迟发型超敏反应 血清溶血素 细胞因子
       Abstract：ObjectiveTo study the effect of the total saponins of Panax japonicus(TSPJ)on immunological function in mice．MethodsMice were administrated with TSPJ 25,50,100 mg·kg-1 for 14 days．The phagocytosis ability of macrophage，serum hemolysin  concentration，the weight of thymus and spleen of the mice, the level of IL-2，TNF-α products in serum were measured,and the delayed type hypersensitivity(DTH) was observed．ResultsCompared with control group, TSPJ had no obvious effect on phagocytosis ability of macrophage and the weight of thymus of the mice, TSPJ decreased the serum hemolysin concentration and hemocytolysis planque，and reduced the contents of IL-2，TNF-α in serum significantly．TSPJ(25 mg·kg-1) strengthened DTH，but TSPJ(100 mg·kg-1) inhibited DTH.ConclusionTSPJ can regulate immunological function of mice，which may be an important mechanism of treating rheumatic diseases．
       Key words：Total saponins of Panax japonicus；  Immunological function；  Serum hemolysin concentration;   Delayed type hypersensitivity；  Cytokine
        竹节参别名：竹根七、萝卜七、峨三七(四川)。Panax japonicum C.A.Mey.─五加科Araliaceae，以其根茎状如竹节而得名。有滋补强壮、散淤止痛、止血、祛痰功能。竹节参对动物机体的适应能力、抗炎、抗氧化能力都有一定的增强作用［1～3］。国内对竹节参具体成分的系统性研究还很少。笔者从药理学、生理生化、免疫学等多个角度系统研究竹节参皂苷对小鼠免疫功能的影响，为进一步了解竹节参的药理作用及分子作用机理奠定基础，为利用竹节参这一宝贵资源提供一定的科学依据。
       1  材料与方法
       1.1  仪器与材料
       723分光光度计(上海仪器厂)；CENTRIFUGE TDL-5型离心机；SN-695B型放射免疫γ计数器（上海原子核研究所,日环仪器厂）；竹节参为华中科技大学生命科学院天然产物实验室提供，通过标准品检测，TSPJ净含量33.32%；环磷酰胺（江苏恒瑞医药股份有限公司，批号06060321）；2，4-二硝基氟苯(DNFB，中国医药集团上海化学试剂公司)；香菇多糖片（浙江普洛康裕天然药物有限公司）；印度墨汁(欧瑞卡生物技术有限公司)；IL-2试剂盒、TNF-α试剂盒（北京福瑞生物工程有限公司，批号20061019，20061025）；葡萄糖及其它试剂均为分析纯。
       1.2  动物分组与处理
       实验用小鼠为昆明种小鼠，体重18～22 g，雌雄各半，湖北省动物实验中心，合格证号：SCXK(鄂)2003-0005；绵羊红细胞（SRBC）和豚鼠取自湖北省动物实验中心。
       1.3  方法
       1.3.1  分组  
       小鼠随机分为6组，每组12只。Ⅰ组为正常对照组给等量蒸馏水，Ⅱ组为环磷酰胺（CTX）组，隔天ip40 mg·kg-1，Ⅲ组为香菇多糖ig 200 mg·kg-1，Ⅳ，Ⅴ，Ⅵ组为竹节参总皂苷ig 25，50，100 mg·kg-1。
       1.3.2  碳廓清实验［5］
       印度墨汁以生理盐水10倍稀释备用。末次给药后24 h，各鼠尾静脉注射墨汁0.1 ml/10 g体重；注射后第5 min，第25 min用毛细吸管分别从眶后静脉丛取血25 μl；溶于2 ml 0.1%Na2CO3溶液中摇匀，置于721分光光度计在600 nm下比色，测光密度（OD值）；颈椎脱臼致死，并取肝、脾、胸腺进行各项指标测定。K=logOD1-logOD2/t2-t1a=3K ×体重/（肝重+脾重）
       1.3.3  血清血溶素实验［5］ 连续给药14 d后取保存的绵羊红细胞，按每只鼠20%SRBC 0.2 ml腹腔注射致敏。免疫4 d后摘除小鼠眼球取血约1 ml。测定IgM时，上层血清用生理盐水稀释600倍后，取1ml，进行溶血值测定。检测IgG时，需用同量的SRBC再次免疫动物，7 d后摘除小鼠眼球取血，加等量2-巯基乙醇，其它同IgM。
       1.3.4  抗体生成细胞测定参照QHS法［4］  连续给药14 d后，每只鼠腹腔注射5%SRBC 0.2 ml致敏，免疫后5 d，放血致死，取脾脏制成脾细胞悬液；取试管依次加入脾细胞悬液、0.2%SRBC、1∶10豚鼠血清各0.5 ml，充分混匀，温浴，离心取上清，于413 nm处测光密度。
       1.3.5  2，4-二硝基氟苯（DNFB）诱导迟发性变态反应（DTH）［4］  药后第8天每鼠腹部剪毛(3 cm×3 cm)．均匀涂抹1%DNFB 50 μl致敏，药后第5天再用1%DNFB 10 μl攻击右耳，24 h后处死动物，用打孔器取下直径8 mm的耳片，称重，以左右耳的重量之差（肿胀度）来表示DTH的程度。肿胀度=右耳片重量-左耳片重量
       1.3.6  细胞因子测定末次给药后1 h，摘眼球取血，分离血清，RIA法，按放免试剂盒说明书测定IL-2，TNF-α含量。
       1.4  统计学处理数据均以±s表示，应用SPSS12.0统计软件包进行分析。
       2  结果
       2.1  TSPJ对小鼠体重、脾脏、胸腺重量的影响见表1。免疫器官是动物执行免疫功能的组织机构，它们的发育状况直接影响到机体免疫力的高低。其中胸腺、脾脏在影响免疫因素中起重要作用。从表1可以看出TSPJ对胸腺的重量指数影响不太明显，只有TSPJ 100 mg·kg-1组对脾脏有抑制作用。表1  TSPJ对小鼠脾脏、胸腺重量的影响(略) 
       2.2  TSPJ对巨噬细胞吞噬碳粒的影响（碳廓清实验）TSPJ 3个剂量组的K和a值与正常对照组比较无明显差异，对巨噬细胞吞噬功能无明显影响。结果见表2。表2  TSPJ对小鼠巨噬碳粒的影响(略)
       2.3  TSPJ对血清溶血素、抗体生成细胞影响
       与正常对照组比较TSPJ 3个剂量组能明显降低血清溶血素水平及抗体生成细胞，尤其100 mg·kg-1组非常明显。结果见表3。表3  TSPJ对小鼠血清溶血素水平的影响(略)
       2.4  TSPJ对小鼠DTH影响与正常对照组比较，TSPJ 25 mg·kg-1组使小鼠耳肿胀度增大，TSPJ 50 mg·kg-1不明显，TSPJ 100 mg·kg-1组使小鼠耳肿胀度下降。结果见表4。表4  TSPJ对DNFB诱导小鼠迟发性超敏反应的影响(略)
       2.5  TSPJ对细胞因子水平的影响IL-2主要由辅助T淋巴细胞（Th）分泌，能在一定程度上反应Th细胞功能状态，TNF-α主要由巨噬细胞分泌，在介导免疫反应及炎症反应中起重要作用；与正常对照组比较，TSPJ能降低血中IL-2，TNF-α水平，尤其是100 mg·kg-1组。结果见表5。表5  TSPJ对小鼠血清IL-2，TNF-含量的影响(略)
       3  讨论
        竹节参的主要成分为竹节参皂苷，其结构与人参皂苷相似，因而本品具有人参、三七样药理作用，日本曾在20世纪80年代将该药作为人参的代用品，广泛应用于治疗风湿性关节炎、类风湿性关节炎和损伤性关节疾病，尤其是类风湿性关节炎。机体内T细胞亚群中Th细胞(CD4)和Ts细胞(CD8)不仅对细胞免疫而且对体液免疫进行调控,还和吞噬细胞通过独特型抗体网络来控制自身抗体的产生，达到对自身免疫病理损伤的修复和维持自身的免疫稳定,形成严密的免疫调控网络以发挥正常的识别异己、保护机体的免疫调节作用［6］。风湿性疾病的发生由免疫倡导［7］：在病程中T细胞库的不同T细胞克隆发生变化，活化Th细胞，抑制Ts细胞，活化的Th细胞分泌细胞因子（IL-2，TNF-α）及各种介质，不仅B细胞激活，分泌大量免疫球蛋白，同时也使关节出现炎症反应和破坏。从实验中可以看出，TSPJ使抗体产生减少，Th细胞活性下降，IL-2，TNF-α减少，对免疫功能的调节作用,可能是该药抗炎、镇痛、抗风湿作用的重要机理之一。
       【参考文献】
         　　［1］袁德培，陈龙权.复方竹节参片抗炎和镇痛作用［J］.时珍国医国药，1999，10（2）：86.
       
       ［2］左 锐，袁 丁.竹节参化学成分和药理活性研究进展［J］.时珍国医国药，2005，16（9）：838.
       
       ［3］陈龙全，陈朝俊，复方竹节参片抗风湿作用的免疫调节机制研究［J］.中国医药学报，2003，18（4）：247.
       
       ［4］徐叔云，卞如濂，陈 修．药理实验方法学，第3版［M］.北京：人民卫生出版社，2002：1420.
       
       ［5］陈 奇.中药药理实验方法学，第1版［M］.北京：人民卫生出版社，1993：317.
       
       ［6］陈慰峰.医学免疫学，第4版［M］.北京：人民卫生出版社，2005：95.
       
       ［7］叶任高.内科学，第6版［M］.北京：人民卫生出版社，2005：885.