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       【摘要】 
       目的建立芪术颗粒质量控制方法。方法用薄层色谱法对该药的黄芪、白术、丹参、柴胡、甘草进行定性鉴别；采用薄层色谱法测定该药黄芪中黄芪甲苷的含量。薄层色谱条件为：波长λs=530 nm，λR=650 nm。结果该药薄层层析斑点清晰集中，含量测定黄芪甲苷在1.01～5.03 μg范围内具有良好的线性关系，平均回收率为96.07%，RSD=0.89%（n=5）。结论该方法准确、重现性好、专属性强，可作为芪术颗粒的质量标准
       【关键词】  术颗粒 薄层色谱法
       Abstract:ObjectiveTo establish the method for quality control of Qizhu Granules.MethodsAstragalus membranaceus (Fisch.) Bge.var. mongholicus (Bge.) Hsiao，Atractylodes macrocephala Koidz.，Salvia miltiorrhiza Bge.，Bupleurum chinense DC.and Glycyrrhiza uralensis Fisch. were identified by TLC.The content of Astragaloside was determined by TLC.Conditions of TLC was: wavelength λs=530 nm，λR=650 nm. ResultsThe spots of TLC were clear and concentrative.The linear regression for Astragaloside was obtained over the range of 1.01～5.03μg.The arerage recovery was 96.07%，RSD=0.89%（n=5）.ConclusionThe method is sensitive，accurate，reproducible and exclusive.It can be used for quality control of Qizhu Granules.
       Key words:Qizhu Granules；  TLC
        芪术颗粒是由黄芪、白术、丹参、柴胡、甘草等中草药组成，具有益气健脾、化淤散结、解毒祛湿之功效，用于预防和治疗肝炎后肝纤维化、早期肝硬化。为控制该药品的质量，本研究对该药上述5味药材进行了薄层鉴别，并采用TLC法测定该药黄芪中黄芪甲苷的含量。
       1  仪器与试药
       1.1  仪器 
       岛津-930型双波长扫描仪,电子分析天平，超声波振荡器（功率 150 W，频率20 kHz）。
       1.2   试药
       芪术颗粒及各被检药材的阴性制剂由中国中医研究院中药研究所制剂室提供；黄芪甲苷对照品购于中国药品生物制品检定所；黄芪、白术、丹参、柴胡、甘草对照药材购于中国药品生物制品检定所；硅胶G板为化学纯（青岛海洋化工厂）；其他化学试剂均为分析纯。
       2  方法与结果
       2.1  薄层鉴别
       2.1.1  黄芪鉴别 
       取本品，研细，称5.0 g，置索氏提取器中，加2%氢氧化钾甲醇溶液50 ml，加热回流提取6 h，再冷浸过夜，提取液蒸干，残渣加15 ml水溶解，用三氯甲烷-正丁醇（2∶1）混合溶液萃取3次（40，30，30 ml），合并萃取液，用1%磷酸二氢钾水溶液60 ml洗涤，弃去水相，有机相蒸干，加入甲醇使溶解并转移至2 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。取黄芪空白制剂（按全方去黄芪配制）5.0 g，同法制成黄芪空白溶液。取黄芪对照药材0.5 g，同法制成对照药材溶液。另取黄芪甲苷对照品，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取供试品溶液、空白溶液、对照药材溶液、对照品溶液各2 μl，点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿甲醇水（75∶25∶5）常温下放置12 h后的下层为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸-乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品则不显示。见图1。
       2.1.2   白术鉴别 
       取本品，研细，称9.0 g，置圆底烧瓶中，加水250 ml加热至沸腾提取挥发油，约1～2 h后，收集挥发油，用少量石油醚洗涤挥发油提取器管壁，并加入到挥发油中，加2 ml石油醚溶解，作为供试品溶液。取白术空白制剂（按全方去白术配制）9.0 g，同法制成白术空白溶液。取白术对照药材5.0 g，同法制成对照药材溶液。吸取上述3种溶液各2 μl，点于同一硅胶G薄层板上，以石油醚-醋酸乙酯（5∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以1%香草醛-硫酸乙醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品则不显示。见图2。
       2.1.3   丹参鉴别 
       取本品，研细，称6.0 g，加入乙醚40 ml，振荡，静置1 h，过滤，蒸干，残渣加2 ml醋酸乙酯使溶解，作为供试品溶液备用。取丹参空白制剂（按全方去丹参配制）6.0 g，同法制成丹参空白溶液。取丹参对照药材1.0 g，同法制成对照药材溶液。另取丹参酮ⅡA对照品，加醋酸乙酯制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。吸取上述4种溶液各5 μl，点于同一硅胶G薄层板上，以苯-醋酸乙酯（9.5∶0.5）为展开剂，展开，取出，晾干。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品则不显示。见图3。
       2.1.4   柴胡鉴别 
       
       取本品，研细，称9.0 g，加入95%甲醇50 ml，超声处理40 min，冷却后，过滤，取续滤液30 ml蒸干，残渣加蒸馏水15 ml微热使溶解，用水饱和正丁醇萃取3次（20，20，10 ml），合并萃取液，再用1%氢氧化钾洗涤正丁醇萃取液两次（20，20 ml），弃去碱液，有机相用正丁醇饱和水溶液洗至中性，弃去水层，有机相蒸干，残渣加95%乙醇1 ml溶解，作为供试品溶液。取柴胡空白制剂（按全方去柴胡配制）9.0g，同法制成柴胡空白溶液。取柴胡对照药材5.0 g，同法制成对照药材溶液。吸取上述3种溶液各6 μl，点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶甲醇∶水（7∶3∶1）下层溶液为展开剂，展开，取出，晾干，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品则不显示。见图4。
       2.1.5  甘草鉴别
        
       取本品，研细，称5.0 g，加入乙醚40 ml，振荡，静置1 h，过滤，弃去醚层，残渣加入甲醇30 ml，80℃加热回流1 h，过滤，蒸干，残渣加水40 ml使溶解，用水饱和正丁醇萃取3次（20 ml/次），合并有机相，用水洗涤3次（20 ml/次），有机相蒸干，残渣加甲醇1 ml溶解，作为样品供试品溶液。取甘草空白制剂（按全方去甘草配制）5.0 g，同法制成甘草空白溶液。取甘草对照药材3.0 g，同法制成对照药材溶液。吸取上述3种溶液各3 μl，点于同一硅胶G薄层板上，以氯仿∶甲醇∶甲酸（5∶1∶0.1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷以50%硫酸-甲醇溶液，105℃加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的斑点。阴性样品则不显示。见图5。
       2.2   含量测定
       2.2.1  对照品溶液的制备精密称取干燥至恒重的黄芪甲苷对照品适量，加甲醇制成每毫升含1 mg的溶液，即得。
       2.2.2  供试品溶液的制备 
       取本品5.0 g，研细，精密称定，置索氏提取器中，加入2%氢氧化钾-甲醇溶液50 ml，加热回流提取6 h，再冷浸过夜，提取液蒸干，残渣加15 ml水使溶解，用氯仿-正丁醇（2∶1）混合溶液，萃取3次（40，30，30 ml），合并萃取液，用1%磷酸二氢钾水溶液60 ml洗涤，弃去水相，有机相蒸干，残渣加入甲醇使溶解并转移置2 ml量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
       2.2.3  阴性对照品溶液的制备 
       取缺黄芪的阴性制剂5.0 g，按上述“2.2.2”项方法制备，即得。
       2.2.4   薄层色谱条件的选择及系统适应性试验 
       测定波长λs=530 nm，参比波长λR=650 nm。反射法锯齿扫描，扫描速度20 mm/min，纸速20 mm/min，线性矫正CH=1，线性参数SX=3，狭缝1.25 mm×1.25 mm，灵敏度X1。
       2.2.5   线性关系的考察 
       分别精密吸取对照品溶液1，2，3，4，5 μl分别点于同一薄层板上，按上述“2.2.2”项方法展开，显色，并按“2.2.4”项色谱条件扫描。以点样量为横坐标（X），峰面积为纵坐标（Y），绘制标准曲线。回归方程Y=2 203.2X+1 362 085，r=0.996 3，黄芪甲苷在1.01～5.03 μg范围内，与峰面积呈良好的线性关系。
       2.2.6   精密度考察 
       在同一薄层板上，分别精密吸取对照品溶液4 μl，点5个等量斑点，经上述条件展开，显色后扫描测定，测得黄芪甲苷峰面积积分值，计算RSD。结果5次峰面积积分值相差不大，RSD=2.07%。
       2.2.7   重现性实验 
       取同一批号制剂制备的5个供试品，分别精密吸取1 μl，点于同一硅胶G薄层板上，经上述条件展开，显色后扫描测定，测得峰面积积分值，计算百分含量和RSD。结果同一批号的5个平行供试品溶液百分含量相差不大，RSD=3.67%。
       2.2.8  稳定性实验 
       分别精密吸取供试品溶液0.5 μl，点于同一硅胶G薄层板上，经上述条件展开，显色后扫描测定，每隔1 h扫描测定一次峰面积积分值，共测定4次。结果表明峰面积积分值在4 h内基本稳定，RSD=0.86%。
       2.2.9   回收率实验采用加样回收法分别取已测得含量的同一批号3.0 g共5份，分别添加黄芪甲苷对照品适量，按前述方法和条件进行供试品溶液制备和含量测定，计算回收率。平均回收率=96.07%，RSD=0.89%。结果见表1。表1    回收率实验结果（略）
       2.2.10  样品测定 
       分别精密称取3批样品各3份，照上述“2.2.2”项方法制备供试品溶液。分别吸取黄芪甲苷对照品溶液2，4 μl与供试品溶液2 μl，点于同一硅胶G薄层板上，照上述“2.2.4”项色谱条件展开，显色后扫描测定，测得峰面积积分值，计算样品中黄芪甲苷的含量。3批样品黄芪甲苷含量在0.14～0.15 mg/g之间。结果见表2。表2  3批样品黄芪甲苷含量测定结果（略）
       3  讨论
        芪术颗粒所含黄芪为方中君药，黄芪甲苷为黄芪主要有效成分之一。根据文献报道［1～5］，我们对黄芪进行了鉴别研究。由于本处方药味多，因此我们采用加氢氧化钾-甲醇的提取方法，使乙酰基均转化为羟基，即环黄芪醇类皂苷均转化为黄芪甲苷，从而使含量增高，减少了干扰，得到了很好的鉴别效果。
        曾用甲醇进行提取，但由于处方药味多，干扰大，没能得到满意的分离效果；还考察了超声提取、加热回流提取以及冷浸的不同提取方法以及不同提取时间，结果以加热提取6 h，再冷浸过夜提取最完全，故选用此法为该制剂中黄芪甲苷的提取方法。
        本法准确，重现性好、专属性强，可有效的控制该药品地质量。
       【参考文献】
         　　［1］姜维东，车晓彦，贺亚玲，等.益气通脉口服液的薄层鉴别和黄芪甲甙的含量测定［J］.华西药学杂志，2002，17（1）：63.
       
       ［2］范红梅，李凌云，甄汉深.黄芪丸中黄芪甲甙含量测定［J］.广西中医药，2002，26（3）：57.
       
       ［3］李 宏，谢 丹， 薄层扫描法测定血栓康胶囊中黄芪甲甙的含量［J］.黑龙江医药科学，2002，25（17）：32.
       
       ［4］王宝琴.黄芪药材及其制剂中黄芪甲甙的含量测定方法研究综述［J］.中国药品标准，2000，1（3）：132.
       
       ［5］国家药典委员会.中国药典，Ⅰ部［S］.北京：化学工业出版社，2000：57，65，77，232，249.