文章标题 全文   多个检索词，请用空格间隔。

       【摘要】 
       目的优化银杏提取物与磷脂形成复合物的制备工艺。方法以银杏提取物中黄酮复合率为评估标准，采用单因素（溶剂）和正交设计试验考察各因素对复合率的影响；并用高效液相色谱法测定银杏磷脂复合物中黄酮醇苷的含量。结果确定银杏磷脂复合物在室温下的最优制备条件，即以四氢呋喃为反应溶剂，银杏与磷脂的投料比为1∶2，反应时间为20 h。结论在室温下银杏磷脂复合物的形成受溶剂、反应物投料比、反应时间的影响较大。
       【关键词】  银杏提取物 磷脂复合物 正交设计 制备工艺
       AbstractObjectiveTo optimize the preparing condition of Ginkgo-phospholipid Complex.Methods The study was carried out through single factor experiment and orthogonal design  with the complex yield of flavone as the guide. In addition, the content of flavone in Ginkgo-phospholipid Complex was also determined by HPLC.Results Under room temperature, the optimal preparing conditions of Ginkgo-phospholipid complex was as follows: the ratio of Ginkgo biloba extract (EBG) and phospholipid was 1∶2, the solvent was THF and the reacted time was 20 h. The Ginkgo-phospholipid Complex prepared under the optimal conditions had the highest content of flavone. ConclusionUnder room temperature, solvent, reaction ration and reaction time have prominent effect on the preparation of Ginkgo-phospholipid Complex.
       Key wordsGinkgo biloba extrat (EBG);   Phospholipid complex;   Orthogonal design;   Preparation
        近年来有关天然活性成分磷脂复合物的研究报道逐渐增多，文献报道药物与磷脂形成复合物后，具有改善原药物溶解性能进而提高其体内吸收的特性［1］。其磷脂复合物通过改变原药物的理化性质，增强其药理作用，延长作用时间，降低毒副作用，提高生物利用度［2～3］；将复合物局部用药，可逐渐释放活性成分从真皮层进入血液循环，作用较慢可起长效作用［4］。其中透皮给药起全身治疗作用近年研究较多［5，6］。
        银杏叶提取物主要活性成分为黄酮［7］和内酯［8］，但其主要有效成分的结构特点决定了其生物利用度不高，而银杏叶提取物与磷脂形成复合物后可显著提高其生物利用度［9～11］。目前我们已经合成了银杏磷脂复合物，但有关银杏磷脂复合物的制备工艺尚需要进一步优化。本文主要以黄酮的复合率为评价指标，通过单因素（溶剂）影响试验和正交试验找到银杏磷脂复合物最佳制备条件。
       1  材料与方法
       1.1  仪器与试剂
       Waters Model510高效液相色谱仪（日本岛津株事会）；UV-240型紫外分光光度计（日本岛津株事会）；旋转蒸发仪（上海医械专机厂）；磁力搅拌器（上海南汇电讯器材厂）；恒温水浴锅（北京长风仪器仪表公司）。
        精制大豆磷脂（上海金伴食品厂）；银杏提取物（上海杏灵科技药业股份有限公司）；标准品均购于中国药品生物制品检定检验所；甲醇、二氯甲烷、四氢呋喃、乙醇均为分析纯，实验用水均为二次蒸馏水。
       1.2  银杏磷脂复合物制备工艺评价标准的建立
       1.2.1  制备工艺利用银杏提取物不溶于二氯甲烷，而磷脂与银杏磷脂复合物均易溶于二氯甲烷的特性，将一定量的银杏提取物与磷脂在一定条件下反应后，减压除去反应溶剂，然后再加入适量二氯甲烷，充分溶解其中的磷脂及复合物，过滤，收集滤液，减压蒸馏将二氯甲烷蒸干，收集固体，用以下方法测定黄酮的复合率。
       1.2.2  银杏磷脂复合物中黄酮复合率的测定对照品溶液的制备：精密称取在110℃干燥2 h的槲皮素对照品4.2 mg，山柰酚对照品6.0 mg及异鼠李素对照品1.2 mg，置于同一50 ml容量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，即得（每毫升中含槲皮素84 μg，山奈酚120    μg及异鼠李素24 μg）。
        供试品溶液的制备：取产品约200 mg，于50℃减压干燥2h，精密称定，加甲醇20 ml，25%（W/W）盐酸5 ml，置水浴（85～90℃）中加热回流2 h，取出，迅速冷却至室温，移至50ml量瓶中，用少量甲醇分次洗涤容器，洗液并入量瓶中，加甲醇稀释至刻度摇匀，即得。
        样品的测定：分别精密量取对照品溶液和供试品溶液各10μl，进样，用甲醇-0.5%磷酸溶液（体积比50∶50）为流动相，流速为1.0 ml/min；在368nm处测定。测得银杏磷脂复合物中总黄酮醇苷的质量分数，按下式计算黄酮复合率：
        黄酮复合率（%）=复合物中银杏总黄酮醇苷反应物中银杏总黄酮醇苷×100%
        按外标法以峰面积定量，计算出供试品中槲皮素、山奈酚及异鼠李素的量，代入下式，即得总黄酮醇苷含量。
        总黄酮醇苷含量=槲皮素×2.5+山奈酚×2.63+异鼠李素×2.38
       2   结果
       2.1  复合率分析方法的建立有文献报道用紫外分光光度法测量银杏中黄酮成分时加入AlCl3等作为位移试剂。但是磷脂与位移试剂作用，在银杏黄酮的最大吸收波长处也有显著的吸收，引起干扰。用药典所载HPLC方法，银杏黄酮醇苷在酸性条件下能水解断开苷键，而且磷脂经水解后在368 nm处没有吸收，无干扰，因而可依照此法测定复合物中黄酮醇苷的含量，分析结果见图1。
       2.2  制备工艺的优化
       2.2.1  单因素（溶剂）影响由于溶剂对复合率影响较大，故主要研究了不同溶剂对复合率的影响。设定EBG与大豆磷脂的投料比为1∶2（W/W），反应时间为20 h，以黄酮的复合率为评估标准，对多种溶剂进行考察。结果见表1。表1  溶剂对复合率的影响（略）
        由表1可看出，以四氢呋喃为溶剂时黄酮复合率最高，甲醇∶二氯甲烷＝1∶6优于单独使用二氯甲烷或甲醇。
       2.2.2  正交试验优化制备方法以银杏提取物与磷脂配比（A）、溶剂（B）、反应时间（C）为影响因子（不计交互影响），以黄酮复合率为主要评价指标，利用L9(34)正交表设计正交实验寻找最佳的反应条件。实验结果及数据处理结果见表2～4。表2  反应条件因素水平（略）表3  优化后L9(34) 正交实验设计、结果及数据处理结果（略）表4  黄酮复合率的方差分析（略）
        由表2～4可以看出，溶剂的影响较大，而银杏提取物与磷脂的配比、反应时间的影响相对较小。最佳反应条件为：银杏提取物与磷脂的配比为1∶2，以四氯呋喃为溶剂，反应时间12 h。
       3  结论
        本研究对银杏磷脂复合物制备工艺进行优化，找出最佳反应条件，在此条件下进行印证实验，黄酮复合率均高于98%，用外标法测定复合物中黄酮醇苷含量可达到8.18%。
       【参考文献】
         　　［1］Gatti G.Peruua E.Plasma concentrations of free and conjugated silybin after oral intake of a silybin-phosphatidylcholine complex in healthy volunteers［J］.Int J Clin Pharmacol Ther,1994,32(11)：614.
       
       ［2］Bombardelli E，Cristoni A, Morazzoni P. PHYTOSOMEs in functional cosmetics［J］. Fitoterapia,1994,65(5):378.
       
       ［3］Pietta P.Simanetti P.Gardana C ，etal.Relationship between rate and extent of catechin absorption and plasma antioxidant status［J］. Biochem Mol Biol Int，1998,46(5):895.
       
       ［4］Bombardelli E，Spelta M. Aging skin:protective effct of silymarin-phytosome［J］. Fitoterapia,1991,62(2):115.
       
       ［5］马云淑，赵浩如，林以宁.丹皮酚及其磷脂复合物的体外透皮初步研究［J］. 云南中医中药杂志，1992，20（4）：36.
       
       ［6］马云淑，赵浩如，林以宁.葛根素及其磷脂复合物的体外透皮实验研究［J］ . 中国中药杂志，2000，25（5）：274.
       
       ［7］吴惠勤，程诘青，张桂英，等.南雄银杏叶中银杏黄酮含量的HPLC测定［J］.分析测试学报，2001，20（6）：53.
       
       ［8］程诘青，吴惠勤，张桂英，等. 南雄银杏叶中内酯的高效液相色谱法测定［J］.分析测试学报，2002，21（4）：17.
       
       ［9］Bombard elli E，Magistretti M J. Pharmaceutical compositions containing flavanoligans and phospholipids as active principles［P］.Europe Patent 209037 ，1987-01-21.
       
       ［10］Pierluigi M，Paolo S，Claudio G，et al. Liquid chromatography/atmospheric pressure chemical ionization mass spectrometry of terpene lactones in plasma of volunteer dosed with Ginkgo biloba L. extracts［J］.Rapid Commun Mass Spectrum .2001，15（12）：929.
       
       ［11］Loggia R D，Sosa A， Tubaro A，et al. Anti-inflammatory activity of some Ginkgo biloba constituents and of their phospholipid-complexes［J］. Fitoterapia, 1996, 67(3)：257.