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       【摘要】 
       目的研究中药灯盏花中总黄酮及微量元素的含量，为治疗心脑血管疾病的机理提供科学的依据。方法采用醇提法提取灯盏花中总黄酮，紫外分光光度法测定药物中总黄酮的含量，测定吸收波长为λ=510 nm；采用HNO3-HClO4湿法消化，原子吸收分光光度法测定钾、钙、钠、镁、铁、铜、锌、锰、镍9种微量元素的含量。结果测定结果显示，灯盏花中含有丰富的微量元素和黄酮类化合物，微量元素含量较高的是铁、铜、锰元素。结论 实验结果为研究中药灯盏花中黄酮类化合物与微量元素在治疗心脑血管疾病中的作用机制，为临床合理应用和开发中药灯盏花提供了有用的数据。
       【关键词】  灯盏花 总黄酮 微量元素
       Analysis of Flavone and Trace Element in Erigeron Breviscapus（Vant）Hand.Mazz and its Mechanism
       DONG Shunfu，HAN Liqin，LIU Jianhua，ZHAO Wenxiu，DONG Hongbo
       Jilin Medical College， Jilin 132013，China
       Abstract:ObjectiveClinical studies indicated that the flavone and trace elements play a beneficial role to maintaining the cardio-cerebral vascular system functions. The contents of flavone and trace elements in Erigeron Breviscapus（Vant）Hand.-Mazz  were determined to study the basis of the effect that the flavone and trace elements in Chinese herbal medicines with cardio-cerebral vascular diseases . MethodsThe flavone in Erigeron Breviscapus（Vant）Hand.-Mazz was extracted by alcohol and the content of flavone was determined at the wavelength of 510nm by ultraviolet spectrophotometry. The contents of nine trace elements and constant elements in Erigeron Breviscapus（Vant）Hand.-Mazz, including potassium, calcium,sodium, magnesium,iron,copper,zinc, manganese and nickel were determined by flame atomic absorption spectrophotometry, the sample was treated with HNO3-HClO4.ResultsThe results showed that there were comparatively rich trace elements and flavone, among which are comparatively high iron,copper and manganese in Erigeron Breviscapus（Vant）Hand.-Mazz . ConclusionIt provided useful data for discussing the basis of effect the content of flavone and the trace elements cure for cardio-cerebral vascular diseases in Erigeron Breviscapus（Vant）Hand.-Mazz and for using Erigeron Breviscapus（Vant）Hand.-Mazz in clinical studies.
       Key words:Erigeron Breviscapus（Vant）Hand.-Mazz；   Flavone；  Trace element
        
       灯盏花又名灯盏细辛，是菊科植物短葶飞蓬［Erigeron breviscapus（Vant）Hand.-Mazz］的植物，含有黄酮、吡喃酮、倍半萜等五十多种化学成分［1］，具有活血舒筋、止痛消积等功效，临床上广泛用于治疗脑梗塞、缺血性心脏病等心脑血管疾病，其有效成分之一为总黄酮［2］。现代研究表明，微量元素与人体的生物功能具有密切的关系［3］，为研究中药灯盏花中微量元素和总黄酮的含量与治疗心脑血管疾病的关系，本实验采用紫外分光光度法测定了中药灯盏花中总黄酮的含量，用原子吸收分光光度法测定了K，Ca，Na，Mg，Fe，Cu，Zn，Mn，Ni等9种微量元素的含量。对微量元素和总黄酮与治疗心脑血管疾病的关系进行了系统的分析研究。
       1  微量元素含量的测定
       1.1  材料与试剂
       药品：灯盏花（云南）。试剂：K，Ca，Na，Mg，Fe，Cu，Zn，Ni均为国家标准溶液（NCS），浓度为1.000 g·L-1（国家钢铁材料测试中心）；Mn标准储备液浓度为500 mg·L-1（中国环境检测总站）。使用液浓度：K，Na，Ca，Mg均为100 mg·L-1；Fe，Cu，Zn，Ni均为50 mg·L-1；Mn为20 mg·L-1。HNO3，HClO4均为优级纯。去离子高纯水，R>106Ω。仪器：HC-9006型原子吸收分光光度计，附80586计算机及FAAS软件处理系统；仪器工作条件见表1。表1  仪器工作条件（略）
       1.2  样品处理随机取干燥样品100 g，研碎，充分混匀，准确称取1.0000 g，平行称取3份，于50 ml锥形瓶中，加浓HNO310 ml，密封过夜，次日加浓HNO310 ml，HClO45 ml，置电热板上缓慢加热消化，至溶液呈无色透明，近干为止。冷却后，用4%HNO3稀释转移至25 ml容量瓶中，定容至刻度，混匀备用。
       1.3  含量测定选定仪器最佳工作条件，火焰原子分光光度法吸收法分别测定样品溶液中Cu，Zn，Mn，Ni的含量，测定K，Ca，Na，Mg，Fe时需将样品稀释10倍后再行测定。K，Na，Ca，Mg的测定，加10%的La(NO3)3抗干扰。表2  各元素回归方程和相关系数（略）
       
       各元素标准系列工作液：
       K 0.00，1.00，5.00，10.00，15.00，20.00 mg·L-1；Ca  0.00，1.00，2.00，4.00，6.00，8.00 mg·L-1；Na  0.00，1.00，2.00，3.00，4.00，5.00 mg·L-1；Mg  0.00，0.50，1.00，2.00，3.00，4.00 mg·L-1；Fe  0.00，0.50，1.00，2.00，4.00，6.00 mg·L-1；Cu 0.00，0.10，0.20，0.30，0.40，0.50 mg·L-1；Zn  0.00，0.50，1.00，2.00，4.00，6.00 mg·L-1；Mn  0.00，0.10，0.20，0.40，0.80，1.60 mg·L-1；Ni  0.00，0.10，0.20，0.30，0.40，0.50 mg·L-1。    
       
       在本工作范围内，各元素线形关系良好。表2显示各元素回归方程和相关系数。
       中药灯盏花中K，Ca，Na，Mg，Fe，Cu，Zn，Mn，Ni 9种元素含量测定结果见表3 。表3  样品中K，Ca，Na，Mg，Fe，Cu，Zn，Mn，Ni 9种元素含量测定结果(略)
       2  总黄酮含量的测定
       2.1   乙醇提取灯盏花中总黄酮准确称取中草药灯盏花10.0 g于索氏提取器中，120 ml乙醚回流4h，至无色，换成70%乙醇提取10 h，过滤，减压浓缩至20 ml左右，等体积石油醚萃取，用70%乙醇定容至100 ml，在200～400 nm波长范围内紫外扫描，最大吸收波长为262.50 nm。
       2.2  标准曲线绘制准确称取干燥至恒重的芦丁标准品（F20060930，国药集团化学试剂有限公司）0.076 0 g，用30%乙醇溶解后，转移至250 ml容量瓶中，30%乙醇定容，摇匀备用。溶液浓度为0.3040 mg·ml-1。准确转移上述芦丁溶液 0.00，0.40，0.80，1.20，1.60，2.00 ml于25 ml锥形瓶中，加30%乙醇至12.5 ml，加入0.8 ml 5%NaNO2溶液，放置5 min，加0.8 ml 5%Al(NO3)3溶液，放置6 min，加5 ml 4%NaOH溶液，30%乙醇稀释至刻线，放置10 min，紫外分光光度计于510 nm处测定吸收度，绘制标准曲线。
       回归方程：A=9.250C+0.001
       相关系数：r=1.000
       2.3   灯盏花中总黄酮的测定准确量取提取液0.4 ml于25 ml锥形瓶中，加30%乙醇至12.5 ml，加入0.8 ml 5% NaNO2溶液，放置5 min，加0.8 ml 5%Al(NO3)3溶液，放置6 min，加5 ml 4%NaOH溶液，30%乙醇稀释至刻线，放置10 min，于波长510 nm处测定吸收度A=0.841。总黄酮的含量测定结果为(56.870 7±3.765 1)mg/g 。
       3  讨论
       测定结果显示，中药灯盏花中总黄酮含量较高（5.69%），微量元素含量丰富，微量元素含量较高的是铁、铜、锰元素，尤其是铁元素的含量高过一般中草药十多倍。
       中药灯盏花通常生长在海拔1 200～3 500 m的中山、亚高山开阔山坡草地上，适合光照充足、气温不高、空气湿度大的环境，其自然生长环境有利于其对微量元素的吸收及总黄酮的合成。临床研究表明，灯盏花有利于心脑血管疾病的治疗，是现代中药开发的重要的中草药。灯盏花中总黄酮被认为是中药灯盏花的有效成分，能使SOD活性升高，提高机体抗氧化能力及对NO的降解，明显扩张微细血管，降低血管阻力，增加脑血流量，改善微循环，清除自由基，对减轻和防止继发性脑损伤，促进脑神经细胞功能恢复有明显的作用。灯盏花对抑制血小板聚集活性和纤溶性方面作用均明显，其扩张血管、降低血管阻力、减轻心肌耗氧量作用确切，对冠心病，心绞痛患者的疗效明显，同时对血黏度、血浆黏度、血小板聚集率都有一定的改善作用。灯盏花对多种疾病的治疗具有明显的作用，其药物中含有较高的总黄酮和丰富的微量元素与治疗相关疾病具有一定的功效关系。中药是一个包括有机成分、微量元素成分的复杂体系，具有多效性和平衡调节性，中医治疗疾病是从整体的机体平衡、环境影响和药物的整体作用出发，调整机体的动态平衡来实现治疗的，中药的微量元素是中药生长和治疗的重要物质基础。研究表明，元素钾有利于中药灯盏花根部的生长［3，4］，实验结果分析灯盏花中钾的含量是很高的，达到27.351 mg/g，这和药物的生长规律是一致的。微量元素作为药物中有机成分的中心原子，有利于药物有效成分的合成和作用，微量元素的研究有助于研究中草药的生长规律、药物的鉴别和质量控制。
       
       临床微量元素学研究证明，钾、钠、钙在体内维持细胞的内外渗透平衡，维持神经细胞膜的生物兴奋性，传递信息。镁具有抗心率失常作用，对急性缺血缺氧引起的严重室性快速心律失常有明显的效果［5］；锰参与人体氧化还原、磷酸化过程，是碱性磷酸酶等多种酶的激活剂，可以改善动脉硬化患者的脂类代谢，是超氧化物歧化酶（SOD）的重要组成部分，在清除超氧化物，增强机体免疫功能方面具有重要的影响，可以有效清除体内自由基，具有传导信息、调控脑、中枢神经、保护细胞膜的结构与功能,与有机药效成分具有很好的协同作用［6］；镍对冠状动脉和冠脉血流量有一定的影响。冠状动脉在心肌缺血、缺氧条件下对镍敏感性增加，镍扩张冠状动脉收缩，减少心肌缺氧反应；铜是血红蛋白的活化剂，体内铜缺乏会引起心肌细胞氧化代谢紊乱，诱发动脉硬化，铜元素可以防止动脉壁的弹力纤维胶原降解，保护血管壁内膜的完整性，阻止动脉粥样硬化的发生和发展。研究表明，心脑血管疾病的患者体内元素铜、镁元素的含量较正常人低，且多伴有铜/锌比值降低，药物中丰富的铜元素，可以有效提高患者体内铜/锌比值，缓解心脑血管疾病患者发病的危险，这与临床微量元素学相一致；铁协同作用可以促进铜的吸收，与机体能量代谢密切相关。本实验采用原子吸收分光光度法测定了中药灯盏花中K，Ca，Na，Mg，Fe，Cu，Zn，Mn，Ni 9种元素的含量，方法快速、准确、灵敏度高，是测定植物类中药金属元素的有效方法。
       中药总黄酮的提取方法可采用水提法和不同浓度的甲醇、乙醇溶剂提取法。研究表明醇法的效果较水提法效果好。本实验选用乙醚回流，去除药物中脂溶性色素，用70%乙醇作溶剂，可将药物中黄酮类化合物有效提出，用石油醚进一步萃取后，可以除去溶解于乙醇中的杂质，避免和减少了水溶性成分的溶出。
       在显色反应中，碱性条件下黄酮与铝离子形成稳定的化合物，设定扫描范围为400～600 nm［7］，确定测定总黄酮的波长为510nm，测定结果准确可靠。
       【参考文献】
         　　［1］邱璐，瞿礼嘉. 灯盏花研究进展［J］. 中草药，2005，36（10）：11.
       
       ［2］张卫东，陈万生，王永红. 灯盏花黄酮成分研究［J］. 中国药学杂志，2000，25（9）：536.
       
       ［3］陈惠坚. 微量元素与中药功效［J］. 中国医院药学杂志，1991，11（6）：269.
       
       ［4］赵峥，龚 苏，段承俐. 氮、磷、钾对灯盏花生长发育及光和色素含量的影响［J］.云南农业大学学报，2005，25（5）：676.
       
       ［5］刘金香. 生命元素镁保护心脏的功能及其机理［J］.微量元素与健康研究，2001,18（4）：75.
       
       ［6］郭丹，陈娜娜，杨西晓，等. 原子吸收分光光度法测定常通口服液中微量元素锰的含量［J］.中国药房，2005，16（18）：1414.
       
       ［7］孔繁臣，罗佳波，刘 莉. 云南红豆衫中总黄酮含量的测定［J］.中国药房，2006，17（17）：1343.