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       【摘要】 
       目的研究青天葵在体外抗甲、乙型流感病毒株作用。方法选用狗肾细胞培养法考察青天葵不同极性部位对甲型（FM1）、乙型（昆40B）流感病毒的作用。结果青天葵水溶性部位对甲型流感病毒FM1有抑制作用。结论青天葵具有体外抗甲型流感病毒作用。
       【关键词】  青天葵 甲型流感病毒 乙型流感病毒 抗病毒
       Study on the Antiviral action of Nervilia fordii against Influenza Virus
       WANG Zhenhua, DU Qin, ZHANG Fengxue
       (Guangzhou University of TCM, Guangzhou 510405, China)
       Abstract:ObjectiveAntiviral actions of Nervilia fordii against influenza virus in vitro were studied. MethodsCell culture technology was used in MDCK cells to observe antiviral action of abstracts of Nervilia fordii against influenza virus A（FM1 strain） and B （Kun 70B strain）.ResultsWater soluble part of Nervilia fordii can inhibit the proliferation of influenza virus A （FM1 strain）in MDCK cells.ConclusionNervilia fordii is effective against influenza virus A in vitro.
       Key words:Nervilia fordii;  Influenza virus FM1 strain;  Influenza virus 70B strain;  Antiviral action
       青天葵为兰科植物毛唇芋兰Nervilia fordii (Hance) Schitr.，以全草或块茎入药，性平，味苦、甘。有清肺止咳，健脾消积，镇静止痛，清热解毒、散结消疬之功效，主治肺痨、咳嗽咳血、瘰疬、肿毒、跌打损伤、小儿疳积、精神病、口腔炎、急性咽喉炎等［1］。
       目前青天葵的研究多集中在栽培、组织培养等方面，其药效学方面的研究报道较少。本实验对青天葵的抗流感病毒作用进行观察，现报告如下。
       1  材料
       1.1  药物青天葵药材购自广东致信药业有限公司，经谭树辉鉴定为兰科植物青天葵Nervilia fordii (Hance) Schitr.。药材用乙醇渗漉，渗漉液浓缩成浓稠浸膏，加蒸馏水转溶，水液加石油醚萃取至石油醚层无色，石油醚层弃去。水层用氯仿萃取，至氯仿层 无色，合并氯仿萃取液，浓缩得氯仿部位（1）；水层用醋酸乙酯萃取，至醋酸乙酯层无色，合并醋酸乙酯萃取液，浓缩得醋酸乙酯部位（2）；水层用正丁醇萃取，至正丁醇层无色，合并正丁醇萃取液，浓缩得正丁醇部位（3）；余下的水层部位（4）；采用水蒸汽蒸馏法提取得到挥发油部位（5）。
        阳性对照药病毒唑，批号0301006，由湖北医药工业研究院提供。
       1.2  毒种甲型流感病毒FM1株、乙型流感病毒昆40B株由中国医学科学院医药生物技术研究所提供，于MDCK狗肾细胞传代，以病变及鸡红血球血凝法判断滴度，在37℃，体积分数为5%CO2孵箱中培养。
       1.3  狗肾细胞（MDCK）由广东省防疫站赠送，广州中医药大学热带病研究所传代保存。
       1.4  细胞培养液和维持液细胞培养液和维持液各为含体积分数为10%、2%的小牛血清、100 kU/L青霉素、链霉素的DMEM（GIBCOBRL公司产品）。
       2  方法与结果
       按照《中药新药研制开发技术与方法》［2］上的要求进行。测定病毒的半数致细胞病变量（TCID50），抗病毒试验在96孔微量板上进行，每孔0.1 ml，细胞数为1×105个/ ml，长成单层后，将青天葵提取物用维持液稀释成4个不同浓度，弃去原培养液后将不同浓度样品加入细胞孔中，每孔0.1 ml，以细胞不出现病变的最小稀释度为该药液对细胞无毒界限。同时在MDCK细胞上测定攻击病毒TCID50。实验时设病毒对照组、正常对照组、药物毒性组及阳性对照组（病毒唑）。置37℃，体积分数5%CO2孵箱中培养。每天倒置显微镜下观察病变并记录，观察7 d终止。实验结果见表1。表1  青天葵不同极性部位对甲、乙型流感病毒的抑制作用（略）
       由表1可知，阳性对照药物病毒唑亚毒性浓度100 μg/ml可以抑制FM1病毒、昆40B病毒。青天葵水层部位浓度为50 mg/ml时，对甲型流感病毒FM1有抑制作用，其作用强度与病毒唑相同，其他部位对甲型流感病毒均无抑制作用，青天葵5种提取部位对乙型流感病毒昆40B均无抑制作用。
       3  讨论
       病毒是最小的生物病原体,不具有细胞结构,主要由核酸核心和蛋白质外壳构成(称为衣壳)构成。在临床感染疾病中,约85%是由病毒引起的。而且,很多病毒感染的致病率很高,并发症严重［3］。
       流行性感冒简称流感,是由流感病毒引起的一种急性呼吸道传染病,它具有高度的传染性, 呈周期性大流行,是危害人类健康的一种重要疾病。研究表明，在呼吸道疾病患者中，小儿的病毒检出率为58.5%，呼吸道合胞病毒占首位，其次是流感病毒；成人为39.74%，流感病毒占首位，可见病毒是上呼吸道感染的主要原因之一［4］。
       目前国内外用于抗甲型流感病毒的药物有金钢烷胺与甲基金刚烷胺、利巴韦林、病毒唑和干扰素等,但由于流感病毒血凝集素(HA)及神经氨酸酶(NA)经常发生变异以及病毒的耐药等问题,使流感病毒的防治问题仍很严峻。目前尚无疗效肯定的药物和疫苗，针对病因大多采用疫苗、干扰素等来防治。实践表明,传统中草药在预治流感病毒方面有一定的作用［5］。
       青天葵性味甘凉无毒，祛邪而不伤正，对体虚邪盛之咳喘患者，为首选良药，对小儿肺炎有特效。邱志楠等以青天葵、款冬花、法半夏、熟附子、五味子制成天龙喘咳灵胶囊，用于治疗哮喘和喘息型慢性支气管炎，效果优于西药组。另有报道，青天葵对治疗风温肺热型肺炎、急性前庭大腺炎、鼻炎有一定效果，对幽门螺杆菌有一定的抑制作用［6～11］。
       本实验考察青天葵不同极性部位对甲型（FM1）、乙型（昆40B）流感病毒的抑制作用，发现青天葵水溶性成分具有体外抗甲型流感病毒FM1作用，作用强度与病毒唑相当，这与临床上用青天葵水煎剂治疗小儿肺炎、急性咽喉炎、肺痨等呼吸道疾病的报道相一致，其作用机理及方式仍需进一步研究，本的研究工作为青天葵深入研究开发提供了实验依据。
       【参考文献】
         　　［1］江苏新医学院.中药大辞典，上册［M］.上海:上海科技出版社,1993：1231.
       
       ［2］王北婴，李仪奎.中药新药研制开发技术与方法［M］.上海：上海科学技术出版社，2001：481.
       
       ［3］唐广辉.国内抗病毒中药的实验研究进展［J］.广东药学，2006，15（6）：69.
       
       ［4］陈沙力，傅文永，郑永晨，等.1017例急性呼吸道病毒感染病原学研究［J］.临床儿科杂志，1993，11（6）：365.
       
       ［5］胡万福,邱德文,张永萍.中药复方抗流感病毒的研究进展［J］.贵阳中医学院学报，2006，28（2）：54.
       
       ［6］邱志楠，潘俊辉，喻清和.天龙喘咳灵胶囊治疗喘息型慢性支气管炎368例［J］.天津中医,2000,17(1)：16.
       
       ［7］邱志楠，潘俊辉.天龙喘咳灵治疗哮喘186例疗效观察［J］.新中医，1996，28(6)：28.
       
       ［8］谢峥伟.中药治疗风温肺热型肺炎50例［J］.中华实用中西医杂志，1999，2（6）：42.
       
       ［9］李宏东.五味消毒饮加味治疗急性前庭大腺炎48例临床小结［J］.江西中医药，1995，26（2）：16.
       
       ［10］邱志楠，潘俊辉.以天龙茶为主治疗鼻炎88例的临床观察［J］.广州医学院学报，1994，22（2）：73.
       
       ［11］缴稳苓.中药对幽门螺杆菌抑制作用的研究［J］.天津医药，1997，25（12）：740.