逍遥软胶囊质量控制的研究
作者:邓伟哲, 杨志欣, 裴广杰, 陈治水, 常爽
作者单位:1.中国人民解放军第211医院,黑龙江 哈尔滨 150080;2.黑龙江中医药大学药学院, 黑龙江 哈尔滨 150040
《时珍国医国药》 2007年 第12期
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【摘要】
目的建立逍遥软胶囊的质量标准。方法采用薄层色谱( TLC) 法定性鉴别柴胡、白芍、当归、甘草;采用高效液相色谱(HPLC)法测定芍药苷、阿魏酸的含量。结果在TLC 色谱中均能检出柴胡、白芍、当归、甘草;芍药苷在51~340 μg·ml-1的范围内呈良好的线性关系,r= 0.999 9,平均回收率为98.2%, RSD=1.41% (n= 6) 。阿魏酸在41.6~208 μg·ml-1的范围内呈良好的线性关系,r= 0.999 9,平均回收率为100.5% ,RSD= 1.37% (n= 6) 。结论该法简便准确,可作为该制剂质量控制标准。
【关键词】 逍遥软胶囊 芍药苷 阿魏酸 高效液相色谱法
Study on the Quality Standard for Xiaoyao Capsula Mollis
DENG Weizhe, YANG Zhixin, PEI Guangjie, CHEN Zhishui,CHANG Shuang
1.Department of TCM, PLA No.211 Hospital, Harbin 150080, China;
2.College of Pharmacy,Heilongjiang University of TCM ,Harbin 150040,China
Abstract:ObjectiveTo establish the standard of Xiaoyao Capsula Mollis. MethodsRadix bupleuri, Radix Paeoniae Alba, Radix Angelicae Sinensis, Radix Glycyrrhizae in the preparation were identified by TLC; Paeoniflorin and ferulaic acid were determined by HPLC. ResultsRadix bupleuri, Radix Paeoniae Alba, Radix Angelicae Sinensis, Radix Glycyrrhizae could be identified by TLC. Paeoniflorin showed a good linear relationship at a range of 51~340 μg·ml-1,r = 0. 999 9,the average recovery of paeoniflorin was 98.2% , RSD was 1.41% (n= 6). Ferulaic acid showed a good linear relationship at a range of 41.6~208 μg·ml-1,r= 0.999 9,the average recovery of ferulaic acid was 100.5% , RSD was 1.37%(n=6). ConclusionThe methods are simple, accurate and reproducible.
Key words:Xiaoyao Capsula Mollis; Paeoniflorin; Ferulaic acid; HPLC
逍遥丸为汉·张仲景所著《伤寒论》中四逆散及《金匮要略》中当归芍药散之衍变方,可疏肝健脾、养血调经,临床多用于妇科疾病[1~2]。逍遥软胶囊是由逍遥丸剂型改革而来,本方由柴胡、白芍、当归、白术、茯苓、甘草、薄荷7味中药组成。为了控制本品的质量,本实验采用薄层色谱法对方中所含柴胡、白芍、当归、甘草等药味进行了薄层色谱鉴别,并采用高效液相色谱(HPLC)法测定了白芍、当归中的主要有效成分芍药苷、阿魏酸的含量。
1 仪器与试药
美国Waters公司2695型高效液相色谱仪,2996型紫外检测器,empower工作站。Milli-Q纯水器(密理博上海贸易有限公司)。硅胶G(青岛海洋化工厂)。逍遥软胶囊(自制)。柴胡等药材购自哈尔滨市药材公司,经黑龙江中医药大学生药教研室鉴定为《中国药典》正品。芍药苷对照品、阿魏酸对照品、甘草酸单铵盐对照品、柴胡皂苷a对照品、对照药材(购自中国药品生物制品检定所)。甲醇、乙腈(色谱纯);水(超纯水);其余为分析纯。
2 方法与结果
2.1 鉴别
2.1.1 柴胡的薄层鉴别取逍遥软胶囊适量,取出内容物,称取10 g于回流提取器内,加甲醇50 ml回流提取30 min,过滤,滤液挥干,加入2 %氢氧化钠水溶液15 ml超声溶解残渣。用20 ml水饱和正丁醇振摇萃取两次,分取正丁醇层,蒸干,残渣用甲醇溶解,定容至5 ml,作为供试品溶液。另取柴胡皂苷a对照品,加甲醇制成每毫升含1 mg 的溶液,作为对照品溶液。取对照药材、缺柴胡阴性对照品,同法分别制成对照药材、阴性对照溶液。取供试品溶液、对照品溶液、对照药材、阴性对照液各5 μl ,点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿甲醇水(30∶12∶1)为展开剂展开,两次展开后喷以对二甲氨基苯甲醛-95 %乙醇-浓硫酸(1∶100∶10)溶液,105℃烘5 min。供试品溶液、对照药材与对照品溶液相应位置上显相同颜色斑点,阴性对照液无此斑点,薄层色谱图见图1。
2.1.2 白芍的薄层鉴别取逍遥软胶囊适量,取出内容物,称取10 g,至回流提取器内,加甲醇50 ml回流提取30 min,过滤,滤液挥干,残渣溶于15 ml正丁醇液中,移入分液漏斗,加入20 ml正丁醇饱和水振摇萃取2次,分取正丁醇层,蒸干,残渣用甲醇溶解,定容至5 ml,作为供试品溶液。另取芍药苷对照品,加甲醇制成每毫升含1 mg 的溶液,作为对照品溶液。取对照药材、缺白芍阴性对照品,同法分别制成对照药材、阴性对照溶液。取供试品溶液、对照品溶液、对照药材、阴性对照液各5 μl ,点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿甲醇醋酸乙酯(10∶5∶1)为展开剂,在氨蒸气饱和下展开。取出晾干后喷以10% H2SO4乙醇液,100℃烘5 min。供试品溶液、对照药材与对照品溶液相应位置上显相同颜色斑点,阴性对照液无此斑点,薄层色谱图见图2。
2.1.3 当归的薄层鉴别供试品处理方法同“2.1.2”项。另取阿魏酸对照品,加甲醇制成每毫升含1 mg 的溶液,作为对照品溶液。取对照药材、缺当归阴性对照品,同法分别制成对照药材、阴性对照溶液。取供试品溶液、对照品溶液、对照药材、阴性对照液各5 μl,点于同一硅胶G薄层板上,以乙醇丙酮氯仿冰醋酸(1∶4∶10∶1)为展开剂展开,取出晾干,喷以2%三氯化铁的50%乙醇溶液-2%铁氰化钾的50%乙醇液(1∶1)进行显色。供试品溶液与对照品溶液相应位置上显相同颜色斑点,阴性对照液无此斑点,薄层色谱图见图3。
2.1.4 甘草的薄层鉴别取逍遥软胶囊适量,取出内容物,取5 g于回流提取器内,加乙醚40 ml回流提取30 min,过滤,药渣加甲醇30 ml置水浴上加热回流1 h,滤过,滤液蒸干,残渣加水40 ml,使溶解,用水饱和正丁醇萃取3次,每次20 ml,合并正丁醇萃取液,加入20 ml正丁醇饱和水振摇萃取2次,分取正丁醇层,蒸干,残渣用甲醇溶解,定容至5 ml,作为供试品溶液。另取甘草酸单铵盐对照品,加甲醇制成每毫升含1 mg 的溶液,作为对照品溶液。取对照药材、缺甘草阴性对照品,同法分别制成对照药材、阴性对照溶液。取供试品溶液、对照品溶液、对照药材、阴性对照液各5 μl ,点于同一硅胶G薄层板上,以氯仿甲醇水(30∶12∶1)为展开剂展开,两次展开后喷以对二甲氨基苯甲醛95 %乙醇浓硫酸(1∶100∶10)溶液,105℃烘5 min。供试品溶液、对照药材与对照品溶液相应位置上显相同颜色斑点,阴性对照液无此斑点,薄层色谱图见图4。
2.2 含量测定
2.2.1 色谱条件C18色谱柱(220 mm×4.6 mm,5 μm)(大连物理化学研究所),流速1 ml·min-1,柱温30℃,芍药苷、阿魏酸的流动相均为甲醇水(1﹪HAC)(25∶75),芍药苷检测波长232 nm,阿魏酸检测波长323 nm。
2.2.2 标准曲线考察精密称取芍药苷对照品6.8 mg,置10 ml容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度。分别用微量移液管精密移取150,400,600,800,1 000 μl的对照溶液,置2 ml量瓶中,定容。精密称取阿魏酸对照品5.2 mg,置25 ml容量瓶中,加甲醇溶解并定容至刻度。分别用微量移液管精密移取阿魏酸对照品溶液400,800,1 200,1 600,2 000 μl置2 ml容量瓶,定容,备用。HPLC进样10 μl,按含量测定方法测定峰面积,并以峰面积的积分值为纵坐标,对照品进样量为横坐标建立标准曲线,计算回归方程,芍药苷回归方程为:Y=2.37×106X-6.08×104(r=0.999 9),在51~340 μg·ml-1范围内呈良好的线性关系。阿魏酸回归方程为:Y=1.01×107X-7.1×104(r=0.999 9),在41.6~208 μg·ml-1范围内呈良好的线性关系。
2.2.3 样品的含量测定取本品10粒,剪开,倾出内容物,加入甲醇50 ml超声3 h后取续滤液10 ml,经0.45 μm滤膜过滤,滤液作为供试品溶液。分别精密注入芍药苷对照品溶液、阿魏酸对照品溶液、供试品溶液各10 μl,进行HPLC 测定。结果表明:供试品芍药苷峰、阿魏酸峰与对照品峰保持一致,且与其他组分可以很好地分离。用外标法计算芍药苷、阿魏酸的含量,色谱图见图5~8。表1 指标成分标准曲线方程(略)
2.2.4 精密度及重现性实验精密度实验:精密吸取对照品溶液10 μl,连续进样5 次,测定峰面积积分值,结果芍药苷、阿魏酸RSD值分别为1.41%,1.37%。重现性实验:取样品,按测定法进行5 次测定,结果芍药苷、阿魏酸RSD值分别为1.01%,1.33%。
2.2.5 回收率实验取供试品适量,精密称定,定量加入芍药苷、阿魏酸对照品溶液,按样品测定项下,测定峰面积,计算回收率。结果芍药苷的平均回收率为98.2%,RSD=1.41% (n= 6) 。阿魏酸的平均回收率为100.5%,RSD= 1.37% (n= 6) 。
2.2.6 样品测定用本实验测定方法对3 批逍遥软胶囊进行测定,结果见表2。表2 样品含量测定结果(略)
3 讨论
逍遥丸中白芍的TLC 鉴别,一般采用中性氧化铝柱或聚酰胺柱处理[3],研究中发现不经此步骤处理也可以排除干扰。
关于逍遥软胶囊制剂质量控制的研究较多,然而通常只是对白芍、当归、甘草定性的较多[4,5],本实验同时研究了柴胡的定性分析条件,并同时对芍药苷、阿魏酸定量分析,能更好地控制制剂质量。
【参考文献】
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[3]张兰珍,王晓强,陈 丹,等.人参、黄连、白芍在中成药中质量控制方法的研究[J].中成药,1999,21(3) :121.
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[5]陈洪燕,万 明,廖蔚珍,等.逍遥丸质量控制的研究[J].中国医院药学杂志,2006,26(6):743.