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       【摘要】 
       目的观察中科特泰胶囊对小鼠免疫力的影响。方法将120只健康雌性小鼠分为3个实验组，每组分高、中、低和对照4个剂量组，连续灌胃给药30d后，分别进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、淋巴细胞转化、NK细胞活性试验以及小鼠抗体生成实验，测定相关的免疫学指标。结果高、中剂量组对小鼠巨噬细胞吞噬能力、淋巴细胞转化、NK细胞活性以及抗体生产均有明显的提高，与对照组比较有显著性差异（P<0.05，P<0.01）。结论中科特泰胶囊对小鼠的免疫力具有一定的增强作用。
       【关键词】  特泰胶囊 淋巴细胞转化 NK细胞 抗体生成
       Study of the Immunemodulation Effect of Ganoderma Spore Polysaccharide（II）
       FENG Peng， SHEN Jian ，LIU Cheng，WU Dong，SUN Yuhan
       1.Institute of Coal Chemistry，Chinese Academy of Sciences，Taiyuan 030001，China；
       2.Graduate School of the Chinese Academy of Sciences，Beijing 100039，China；
       3. Nanjing Zhongke Group Co.,Ltd，Nanjing，210008，China
       Abstract:ObjectiveTo observe the immunemodulation effect of Zhongke Tetai Capsule on rats.Methods120 SD rats were divided into 3 groups,each group was administered with high,medium,low and control dose respectively. After gastric injection for 30 days, test of rats celiac macrophage phagocytosing chicken red blood cell，lymphocyte transformation test,NK cell activity test,rats antibody forming test were carried to test the relative immune indexes.ResultsHigh,medium group enhanced rats phagocyting ability , lymphocyte transformation ability,NK cell activity and antibody forming ability which showed obvious difference from model group（P<0.05）.ConclusionZhongke Tetai capsule can improve rats immunity.
       Key words:Tetai Capsule；  Lymphocyte transformation；  NK cell；  Antibody forming
       
       自20世纪70年代日本学者率先报道了灵芝具有抗肿瘤作用后，国内学者在研究灵芝“扶正固本”的中医药理过程中，发现灵芝多糖具有多种免疫增强作用，并提出灵芝多糖的抗肿瘤作用也是通过提高动物的免疫功能介导的。中科特泰胶囊主要成分为灵芝多糖和多肽，在前期免疫学实验中，其对小鼠炭粒廓清能力，血红素生成能力等方面都有一定的提高，提示对小鼠免疫力有一定的改善作用。本实验拟考察特泰胶囊对淋巴细胞转化、NK细胞活性以及小鼠抗体生成方面的影响。
       1  材料与方法
       1.1  材料
       1.1.1 样品中科牌特泰胶囊由南京中科药业有限公司提供，为瓶装胶囊，内容物为褐色粉末，人体推荐量为内容物净重每人800 mg/d。置于密闭、阴凉干燥处保存，供试验用。
       1.1.2  试剂SRBC，RPMI1640，ConA，MTT，异丙醇，SA缓冲液，YAC-1细胞，LDH基质液。
       1.2  动物选用上海西普尔-必凯实验动物有限公司繁殖的18.0～20.9 g F1健康雌性小鼠120只，合格证号：SCXK（沪）2003-0002，随机分为3个实验组，分别进行小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验、淋巴细胞转化、NK细胞活性试验以及小鼠抗体生成实验。
       1.3  剂量每个实验组分别分为67 mg/kg（低剂量组）、133 mg/kg（中剂量组）、400 mg/kg（高剂量组）和空白对照组。经口每日一次给于小鼠相应剂量的受试物，空白组给于等剂量的生理盐水。连续给药30d后测量各项增强免疫力功能指标。
       1.4  仪器T1000型电子动物称、722型分光光度计、超净工作台、酶标仪、二氧化碳培养箱。
       1.5  方法
       1.5.1  小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞实验（半体内法）各剂量组连续灌胃30 d，制备20%（V/V）的鸡红细胞悬液，每只鼠腹腔注射1 ml，间隔30 min，颈椎脱臼处死小鼠，正中剪开腹壁皮肤，经腹腔注入生理盐水2   ml，转动鼠板1 min，然后吸出腹腔洗液1 ml，平均滴到2片载玻片上，移置37℃温箱孵育30 min，然后于生理盐水中漂洗，晾干，以1∶1丙酮甲醛溶液固定，4%（V/V）Giemsa-磷酸缓冲液染色3 min，再用蒸馏水漂洗晾干，光镜下观察。
       1.5.2  ConA诱导小鼠淋巴细胞转化实验（MTT法）［1］各剂量组连续灌胃30 d，颈椎脱臼处死小鼠，无菌取脾，研磨制成单个细胞悬液， 调整细胞浓度为3×106个/ml悬浮于1640培养液中， 种植于24孔培养板，加75 μl ConA液作为诱导组，不加为对照组。5%CO237℃孵箱培养72 h后，MTT法测定淋巴细胞。
       1.5.3  NK细胞活性测定实验（LDH测定法）［2］ 各剂量组连续灌胃30 d，颈椎脱臼处死小鼠，无菌取脾，研磨制成单个细胞悬液，离心，弃上清，将细胞加入0.5 ml灭菌水20 s，裂解红细胞后加入0.5 ml的2倍Hank"s液及8 ml Hank"s液，离心后悬浮于1640培养液中，1%冰醋酸稀释后计数，调整细胞浓度2×107个/ml。实验前24 h将靶细胞（YAC-1细胞）传代培养，调整细胞浓度4×105个/ml。取YAC-1细胞和培养液各100 μl加入96孔培养板，YAC-1细胞自然释放孔加YAC-1细胞和培养液各100 μl，YAC-1细胞最大释放孔加YAC-1细胞和1%NP40各100 μl，上述各项均设3个复孔。5%CO237℃孵箱培养4 h，离心，取上清100 μl置于96孔培养板，同时加入LDH基质液100 μl，反应5 min，每孔加入1 mol/l的HCL30 μl，酶标仪490 nm处检测光密度值。
       1.5.4  小鼠抗体生成实验（Lerne改良玻片法）［3，4］各剂量组连续灌胃30 d，每只鼠腹腔注射2%SRBC 0.2 ml进行免疫，4 d后脱颈椎处死，取脾脏，制成单个细胞悬液，调整细胞浓度5×106个/ml置于1640培养液中。Lerne改良玻片法计数溶血空斑数。
       1.6  数据统计方法
       用SPSS10.0软件对原始数据进行方差齐性检验，满足“方差齐”要求的数据资料用单因素方差分析和多个试验组和一个对照组间均数的两两比较方法进行统计处理；对非正态分布或方差不齐的数据资料进行适当的变量转换，待满足“正态方差齐”要求后，用转换所得的数据进行统计处理。
       2  结果
       2.1  中科特泰胶囊对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力的影响由表1的结果可见，高剂量组显著升高了小鼠的吞噬率和吞噬指数，与对照组比较有显著性差异（P＜0.05），表明其具有增加巨噬细胞吞噬能力的作用。表1  中科特泰胶囊对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的吞噬率及吞噬指数的影响(略)
       2.2  中科特泰胶囊对ConA诱导小鼠淋巴细胞转化的影响由表2的结果可见，高剂量组对小鼠加ConA孔与不加ConA孔吸光度的差值，与对照组比较均有明显增高，且具有显著性差异（P<0.05）,说明其对小鼠淋巴细胞的转化具有促进作用。表2  中科特泰胶囊对ConA诱导小鼠淋巴细胞转化的影响(略)
       2.3  中科特泰胶囊对小鼠NK细胞活性的影响由表3的结果可见，高、中剂量组小鼠NK细胞活性明显提高，与对照组相比较差异性显著（P<0.05或P<0.01）。表3  中科特泰胶囊对小鼠NK细胞活性的影响(略)
       2.4  中科特泰胶囊对小鼠抗体生成细胞的影响由表4的结果可见，高、中剂量组的溶血空斑数与对照组比较有明显增多，且有显著性差异（P<0.05或P<0.01）。说明其能促进小鼠的抗体生成。表4  中科特泰胶囊对溶血空斑数的影响(略)
       
       3  讨论
       灵芝除含有三萜类、多糖类、甾醇类、生物碱类、呋喃类和脂肪酸等化合物外，还含有氨基酸、维生素等。全世界灵芝种类很多，分布广泛。其药理活性主要表现为抗肿瘤作用，免疫调节作用，抗氧化自由基作用，降血糖作用，降血压作用，调节血脂作用，抗过敏、平喘作用，保肝作用，抗缺氧作用，抗衰老作用和抗放射作用等。临床应用在治疗慢性气管炎、冠心病、肝炎、高血脂症、神经衰弱，白细胞减少症，肌营养不良，肌强直等，以及肿瘤的辅助治疗。陆正武［5］认为灵芝多糖系灵芝的主要有效成分之一，可促进正常小鼠免疫功能，对应激和免疫抑制药及抗肿瘤药所致的免疫抑制具有拮抗效应。粱渊等［6］对中老年人进行了口服灵芝的临床试验，测量了NK细胞自然杀伤率和T淋巴细胞亚群(CD3+，CD4+，CD7+，CD8+)百分率，证明灵芝还具有免疫调节、维持机体免疫自稳状态的作用。梁中琴等［7］观察了灵芝水提取物对人免疫细胞及细胞因子的调节作用。MTT法及流式细胞仪技术检测表明，对T细胞增值有一定的促进作用。中科特泰胶囊主要成分为灵芝多糖以及多肽，由实验结果可看出，连续给药30d后，高、中剂量组对小鼠巨噬细胞吞噬能力、淋巴细胞转化、NK细胞活性以及抗体生产均有明显的提高，与对照组比较有显著性差异（P<0.05），说明中科特泰胶囊对小鼠的免疫能力具有一定程度的改善与提高。（全文完）
       【参考文献】
         　　［1］毛俊浩，吕志良，曾群力，等.白术多糖对小鼠淋巴细胞功能的调节作用［J］.免疫学杂志，1996，12（4）：233.
       
       ［2］陈丙莺，马建吟，黄钦田，等.简易自然杀伤实验-LDH释放改变法［J］.上海免疫学杂志，1989，9（4）：218.
       
       ［3］Xia D,Lin ZB.Effects of tremella polysaccharide on immune function in mice［J］. Acta Pharmacologica Sinica, 1989，10(5)：453.
       
       ［4］Cunningham AJ, Smith JB, Mercer EH. Antibody formation by single cells from lymph nodes and efferent lymph of sheep［J］. J Exp Med，1966，124(4):701.
       
       ［5］陆正武.吗啡的精神神经免疫学作用及灵芝多糖肋对吗啡依赖小鼠的免疫保护效应［J］.生理科学进展,1995，26(1)： 45.
       
       ［6］粱渊，丁克祥，徐顺清.灵芝胶囊对免疫系统的影响［J］.中国老年学杂志，2003，23(1)，61.
       
       ［7］梁中琴，盛伟华，顾振纶，等.灵芝水提取物对人免疫细胞及IL-6的调节作用［J］.中成药，2000， 22(12)，847.