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       【摘要】 
       目的观察不同剂量的青皮煎剂对四氯化碳（CCl4）损伤大鼠肝的影响。方法将40只大鼠随机分为5组，即正常对照组、模型对照组及青皮煎剂高、中、低剂量治疗组，分别腹腔注射等容积的生理盐水，生理盐水及青皮煎剂（ 0.6g /ml，0.4g/ml, 0.2g /ml）。连续6d，1次/d。末次给药后，除正常对照组皮下注射生理盐水外，其他大鼠皮下注射CCl4原液1次，复制大鼠急性肝损伤模型，检测大鼠血清丙氨酸氨基转移酶（ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（AST）活性，并取肝组织作病理学检查。结果不同剂量的青皮煎剂均可明显降低CCl4致大鼠血清ALT和AST活性升高，并呈明显的量效关系。青皮煎剂组大鼠肝组织变性、坏死的程度与模型对照组比较明显减轻。结论青皮煎剂对CCl4所致大鼠急性肝损伤具有明显的保护作用和量效关系。
       【关键词】  青皮 急性肝损伤 保肝作用
       Dose-effect Relationship of Protection of Citri Reticulatae Viride against Acute Hepatic Injury of Rats Induced by CCl4
       JIN Jing1,ZHENG Cao ,LIN Li,LUO Desheng,LIU Quanzhi,LIU Qin
       1. Medical School, Xianning College, Xianning 437100, China;
       2. Post-graduate of  2005, Wuhan University, Wuhan, 430071, China;
       3.Department of Biochemistry, Huangshi College of Technology, Huangshi, 435000, China
       Abstract：ObjectiveTo observe the effcets of different doses of citri reticulatae viride decoction on CCl4-induced acute liver injury in rats.Methods40 wistar rats were randomly divided into four groups, namely the normal control group, the model control group, the high, media and low dose treating groups of citri reticulatae viride decoction. They were injected intraperitoneally with physiologic saline and citri reticulatae viride decoction (0.6g/ml . 0.4g/ml and 0.2g/ml) once daily for six days respectively. After the last injection, all groups except the normal group, which were injected with physiologic saline, were injected with CCl4 stock solution to induce acute hepatic injury model. The activity level of ALT and AST were detected, and the hepatic tissue were identified by pathology examination.ResultsDifferent doses of citri reticulatae viride decoction could decrease the contents of ALT and AST, and it had obvious dose-effect relationship. Degree of degeneration and necrosis of hepatic tissues of treatment group was obviously lessened compared with the model group.ConclusionCitri reticulatae viride decoction plays a very important role in protection against acute liver injury and the effect depends on its doses.
       Key words：Citri reticulatae viride;   Acute hepatic injury;   Liver protection
       青皮，亦称青桔皮或青柑皮，系芸香科植物橘citrus reticulate Blanco及其栽培变种的干燥幼果或未成熟果实的果皮。青皮药材包括个青皮、四花青皮［1］。性味苦、辛、温，归肝、胆、胃经。具有疏肝破气，消积人滞之功能，根据中医“肝与胆相表里”的理论，陈艳华等［2］的实验发现青皮可使CCl4肝损伤的大鼠胆汁流量增加，并初步观察到青皮对CCl4损伤大鼠肝功能有保护作用。本实验观察不同剂量的青皮煎剂对CCl4致大鼠急性肝损伤的影响。
       1  器材与方法
       1.1   动物  
       健康的Wistar大鼠，雌雄不拘，体重（230±25）g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供。
       1.2   药材与试剂  
       青皮购自咸宁市药材公司，经本院中医学教研室专家鉴定为四花青皮，按中药煎剂法制备煎剂，浓缩为1 g/ml生药，灭菌4℃存放，用时微温，并用灭菌生理盐水配成所需含量。ALT试剂盒及AST试剂盒（中生北控生物科技股份有限公司，批号分别为060231，060415），CCl4（上海长江化工厂，AR）。
       1.3   仪器 
       AEL-200电子分析天平、TP5000A电子秤均为湘仪天平仪器厂产品，BT815A型半自动生化分析仪为上海三科仪器有限公司产品。
       1.4   动物分组与处理  
       大鼠40只，随机分为5组，即正常对照组（简称对照组）、模型对照组（简称模型组）和青皮煎剂高、中、低剂量组（简称高剂量组、中剂量组、低剂量组），每组8只。对照组和模型组大鼠每日腹腔注射生理盐水4ml/kg，高、中、低组大鼠腹腔注射青皮煎剂4ml/kg（生药含量分别为 0.6 ， 0.4，0.2 g/ml），1次/d，连续6d。于第6天，除对照组皮下注射生理盐水2ml/kg外，其余大鼠按文献［3］给予CCl4，建立急性化学性肝损伤模型。24h后，用3%戊巴比妥钠按1ml/kg腹腔注射麻醉大鼠，腹主动脉取血，及时分离出血清，备用。取血后迅速处死动物，取肝组织作病理学检查。肝组织用10%甲醛溶液固定，常规石腊包埋，HE染色，光镜下观察组织损伤程度。
       1.5   统计学处理  
       实验数据经Spss统计软件包处理。实验数据均采用均数±标准差（±S）表示，各组间均数比较采用单因素方差分析，组间比较采用t检验，p<0.05表示有显著性差异。
       2  结果
       2.1   不同剂量青皮煎剂对CCl4致大鼠急性肝损伤血清酶活性的影响如表1所见，模型组与对照组相比血清ALT，AST活性均有非常显著差异（P＜0.001），青皮煎剂高、中、低3个剂量组均能显著降低CCl4所致大鼠血清ALT，AST活性的升高，并呈现明显的量效关系，与模型组相比均有非常显著差异（P＜0.001）。表1  不同剂量青皮煎剂对ccl4致大鼠急性肝损伤血清ALT，AST活性的影响（略）
       2.2   动物肝组织病理学检查镜下可见正常组大鼠的肝小叶结构完整，肝细胞索结构清晰可辨，核膜清晰、核大而圆。模型组动物肝小叶正常结构被破坏，肝细胞气泡样变，细胞境界不清，细胞索解离，细胞肿胀、混浊，可见较多的点状、片状坏死灶，肝组织充血，伴有淋巴细胞、单核细胞广泛浸润。青皮煎剂高、中剂量组的肝细胞肿胀、坏死、肝组织充血明显减轻，有少量的肝细胞脂肪变性和较少的炎症细胞浸润，肝小叶结构较清晰，而小剂量组大鼠的肝组织充血、肝细胞坏死及炎症细胞浸润较明显，亦可见点状或带状坏死。
       3  讨论
       CCl4是目前常用的复制动物急性肝损伤模型的经典方法，为化学性肝损伤。该法能准确反映肝细胞的功能、代谢及形态学变化，重复性好，肝细胞受损的最佳基本表现是细胞质膜的损伤［4］。自由基及自由基引发的脂质过氧化是导致CCl4肝损伤的重要因素［5］。动物体内的CCl4经细胞色素P450代谢系统反应生成自由基·CCl3，后者攻击肝细胞膜上的磷脂分子引起脂质过氧化，或与肝微粒体脂质和蛋白质发生共价结合，破坏肝细胞膜系统的结构与功能的完整性，导致糖原，蛋白质合成障碍，从而使ALT、AST释放入血，造成血清中ALT、AST活性显著升高［6］。本实验模型大鼠血清ALT、AST活性非常显著高于对照组，表明本实验复制CCl4急性肝损伤模型成功，同时肝组织病理学检查进一步证实CCl4导致肝细胞的严重损伤。青皮煎剂高、中、低剂量组动物血清AST、ALT活性均显著低于模型组，且剂量越大血清酶活性降低越显著，显现明显的量效关系。肝组织病理学变化，也发现CCl4所致大鼠肝细胞的变性，坏死的严重程度随青皮煎剂的剂量增大而减轻。血清酶学变化和组织学改变的实验结果均说明青皮煎剂对CCl4致肝组织损伤有明显的保护作用，并呈明显的量效关系。
       【参考文献】
         　　［1］陈红,刘传玉,李承晏.青皮的化学及药理作用研究进展［J］.中草药,2001,32(11):1050
       
       ［2］隋艳华,赵加泉,崔世奎,等.香附、青皮、剌梨、茵陈、西南、獐牙菜对大鼠胆汁分泌作用的比较［J］.河南中医,1993,13(1):19
       
       ［3］罗德生,郑红花,罗丽丹,等.黄芩煎剂对四氯化碳致大鼠急性肝损伤的保护作用［J］.陕西中医,2004,25(2):184
       
       ［4］贾俊倩,贾俊英.复方益肝灵片对小鼠急性肝损伤保护作用的量效关系［J］.齐齐哈尔医学院学报，2006,27(7):784
       
       ［5］陈桂枝,罗德生,王梅娟,等.茵陈煎剂对大鼠急性化学性肝损伤的保护作用［J］.时珍国医国药，2005,16(7):617
       
       ［6］柴胡-黄芩合煎与分煎液的保肝作用比较［J］.中成药,2004,26(11):942