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       【摘要】 
       目的考察微粉化对淫羊藿叶中淫羊藿苷提取率的影响。方法以淫羊藿叶为原料，传统的锤式粉碎为对照，通过正交设计，考察QMISP12行星式球磨微粉机的磨球配置、时间和转速对其中有效成分淫羊藿苷提取率的影响。其中淫羊藿苷的含量采用高效液相色谱法测定。结果锤式对照中淫羊藿苷的提取率为0.78%，而正交实验微粉碎技术中最高的提取率为1.12%。通过分析正交设计得出，磨球配置为φ6 mm的钢珠800个，φ10 mm的钢珠100个，φ20 mm的钢珠6个，时间为1 h，转速为350 r/min为最佳工艺，实际提取率为1.25%，高于锤式对照。结论 通过行星式球磨机微粉化后可以提高淫羊藿叶中淫羊藿苷的提取率。
       【关键词】  淫羊藿叶 淫羊藿苷 微粉技术 正交设计 高效液相色谱法
       微粉化是提高药物溶解度和生物利用度的有效手段之一，中药微粉化是中药现代化新技术的研究热点。目前研究主要集中于微粉化对药物有效成分或部位的体外溶出及药效的影响［1］。蔡萍等［2，3］研究了普通粉和微粉对丹参指标成分隐丹参酮、丹参酮ⅡA及原儿茶醛提取率，发现丹参微粉化既能提高脂溶性成分隐丹参酮和丹参酮ⅡA的提取率，又能提高水溶性成分原儿茶醛的提取率。徐月红等［4］研究表明微粉化能促进制何首乌中水溶性物质的浸出及脂溶性指标成分的溶出。但粉碎过细，吸附作用加强，因而扩散速度受到影响，而且黏液质等多糖类用水提取时，由于药粉过细易产生更大的胶冻现象，会使大量细胞破裂，溶质间更易形成糊状，不仅影响有效成分的浸出，而且不易过滤。本文以淫羊藿叶中有效成分淫羊藿苷含量为指标，通过正交设计，考察了QM-ISP12行星式球磨微粉机的磨球配置、时间和转速对中药有效成分提取率的影响。
       1  器材
       锤式粉碎机，QM-ISP12型行星式球磨机，电子天平，Agilent 1100 series高效液相色谱仪（美国安捷伦公司）。
       箭叶淫羊藿叶购于安国市卫康中药材有限公司；淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定所)；乙腈(色谱级)，超纯水，其它试剂均为分析纯。
       2  方法与结果
       2.1   淫羊藿苷含量测定方法的建立
       2.1.1  色谱分离条件Diamonsil C18色谱柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动相为乙腈∶水（30∶70）；柱温25℃；检测波长272 nm；流速1.00 ml/min。
       2.1.2  对照品溶液的配制精密称取2.50 mg淫羊藿苷对照品于100 ml量瓶中，加乙腈溶解，并稀释至刻度，摇匀后即得25 μg/ml的淫羊藿苷对照品溶液(见图1)。另取2.2.3项下的淫羊藿叶提取物溶液，按照2.1.1色谱条件进样(见图1)，表明淫羊藿苷峰与其它峰分离良好。
       2.1.3  标准曲线的绘制按2.1.1色谱条件分别取2，4，6，8，10，12，14，16，18，20 μl进样，以进样量（μg）与峰面积进行线性回归，得回归方程为Y = 0.003 5X + 0.001  9，r=0.999 7。在0.05～0.5 μg之间呈良好线性关系。
       2.1.4  精密度实验精密吸取0.05 mg/ml淫羊藿苷对照品溶液2 μl 连续进样6次，测定峰面积，计算RSD为0.97%，表明精密度良好。
       2.1.5  稳定性实验精密吸取同一供试液（3号样品）4 μl ，分别于0，1，2，3，4，5 h进行分析，测定色谱峰面积，计算RSD为0.18%。供试液在5 h内稳定。
       2.1.6  重复性实验按上述供试液制备方法，制备6份超声波法提取的第3号样品制备供试液。按2.1.1色谱条件测定，计算RSD为1.83%。
       2.2   淫羊藿苷提取工艺的优化
       2.2.1   微粉化方法的考察因素与水平本实验采用正交设计法 L9(34 )表（表1），以淫羊藿苷含量为考察指标进行实验。考察磨球配置、球磨时间和转速对淫羊藿有效成分提取率的影响。表1  正交设计（略）
       2.2.2  淫羊藿叶提取物制备取淫羊藿叶粉各10 g，加入乙醇浸泡24 h，超声提取3次，30 min/次，加入95%乙醇100 ml/次。过滤，合并提取液，残渣用适量的乙醇冲洗，并与提取液合并。滤液放入旋转蒸发仪中蒸发，得到淫羊藿叶提取物。
       2.2.3  样品中淫羊藿苷含量测定分别称取浸膏10.00 mg，用乙腈完全溶解后转移至10 ml容量瓶中，加乙腈至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜过滤备用。用2.1.1条件进行测定，按照2.1.3回归方程计算淫羊藿苷含量。锤式对照提取率为0.78%，微粉化提取结果见表2。表2  正交实验结果（略）
       实验结果表明，因素A对淫羊藿苷的提取有显著影响，其次为因素C，因素B对淫羊藿苷的提取没有明显影响。考虑到生产中的经济成本问题，选择最佳方案A1B3C3，即球磨配置为φ6=800，φ10=100，φ20=6，转动时间为2 h，转速为350 r/min时，为最佳工艺。按照此最佳工艺进行提取，测得淫羊藿苷含量为1.25%。
       3  讨论
       由以上实验可看出，微粉化后淫羊藿苷的提取率相对锤式对照要高（>0.47%），因此确定微粉技术能够较好地提取淫羊藿叶中的有效成分淫羊藿苷。
       本文把微粉碎技术应用于淫羊藿叶中有效成分的提取，并证实了这一方法的可靠性和可行性，为今后淫羊藿叶相关产品的开发利用以及微粉化在中药有效成分提取中的应用提供了理论依据。
       【参考文献】
         　　［1］张兰英, 王法平, 杜小敏, 等. 原生药材微粉化制剂对药效作用的影响［J］.中国粉体技术, 2001, 7(1)：38.
       
       ［2］蔡 萍, 徐月红, 王宁生. 微粉化对丹参质量影响的研究［J］.中药材, 2006, 29(8):841.
       
       ［3］蔡 萍, 徐月红, 王宁生. 微粉化对制何首乌质量的影响［J］.中药新药与临床药理, 2004, 15(4):27.
       
       ［4］徐月红, 王宁生. 中药微粉化的现状与分析［J］.中国中药杂志, 2004, 29(6)：497.