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       【摘要】 
       目的研究五倍子提取物对活性氧自由基的清除作用。方法采用电子自旋共振（ESR）和自旋捕集技术直接测定不同浓度的五倍子两种方法提取物对DPPH自由基的清除作用。结果五倍子两种提取物具有良好的清除DPPH自由基的作用, 在实验条件下, 五倍子水提取物清除DPPH自由基的IC50为0.414 7 mg/L，五倍子醇提取物清除DPPH自由基的IC50为0.858 6 mg/L。结论 五倍子中多酚类物质具有较强的抗氧化活性。
       【关键词】  五倍子 电子自旋共振技术 DPPH自由基 抗氧化活性
       ESR Study on the DPPH Free Radicals Scavenging Effect of Polyphenols from Galla Chinensis
       YU Min,  YANG Chunrong，CHEN Shuai
       College of Chemistry & Pharmacy of Jiamusi University, Key Laboratory of Colleges and Universities in Heilongjiang Province, Jiamusi 154007, China
       Abstract：ObjectiveTo study the action of polyphenols from Galla Chinensis on scavenging DPPH radical. MethodsUsing electron spin resonance(ESR) and spin trapping technology, the scavenging effects of different concentrations of two extracts of Galla Chinensis on DPPH free radical were studied. ResultsThe results showed that two extracts of Galla Chinensis had strong scavenging effect on DPPH free radical. The IC50 of scavenging DPPH radical of the water extract and ethanol extract from Galla Chinensis were 0.414 7 mg/L and 0.858 6 mg/L respectively. ConclusionThe polyphenols from Galla Chinensis have strong antioxidant activity.
       Key words：Galla Chinensis;   Electron spin resonance (ESR);   DPPH free radical;   Antioxidant activity
       五倍子为漆树科漆树属盐肤木Rhus chinensis Mill等叶或叶柄因受五倍子蚜虫的刺伤而成的囊状虫瘿，具有敛肺降火、涩肠止泻、固精缩尿、止汗、止血、解毒、敛疮等多种临床功效［1］。五倍子中的主要有效成分为鞣质以及没食子酸等成分，具有较多邻位酚羟基的结构。
       
       电子自旋共振(electron spin resonance ,ESR)又称电子顺磁共振 (electron paramagnetic resonance ,EPR)是研究自由基的最直接和最有效的方法。所谓电子自旋捕集技术［2］就是为了检测和辨认短寿命自由基（如氧自由基），需将一不饱和的抗磁性物质（自由基捕集剂）加入反应体系，捕捉瞬时自由基，生成寿命较长的自由基，通过电子自旋共振仪来检测。
       目前，关于五倍子清除自由基的研究尚无报道。故本实验采用电子自旋共振法（ESR）和自旋捕集技术对五倍子的抗氧化作用进行研究［3］，探讨了五倍子两种提取物清除1,1-二苯基苦基苯肼(DPPH)自由基的能力，旨在为利用五倍子开发天然的、高效低毒的抗氧化功效因子提供依据。
       1  仪器与材料
       1.1  仪器
       JEX-RE3X ESR spectro-photometer (日本JEOL公司)，KQ5200超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司），RE-52AA旋转蒸发器（上海亚荣生化仪器厂），  FA2004电子分析天平（上海恒平科学仪器有限公司）。
       1.2  材料
       五倍子购自佳木斯市金天药店，由本院生药学教研室刘娟教授鉴定为漆树科植物盐肤木Rhus  chinesensis  Mill五倍子正品。
       DPPH(1,1-diphenyl-2-picryllhydrazyl)为色谱纯，ESR检测无杂质信号，标准品购自日本东京化成工业株式会社。其余试剂均为分析纯。
       2  方法
       2.1  供试样品溶液的配制取五倍子干燥粉末50 g，加水进行超声提取；取五倍子干燥粉末50 g，加95% 乙醇超声提取。各样品提取液减压挥干溶剂，干燥后待用。取各样品提取物适量，精密称定，加甲醇溶解后，配成浓度为0.01，0.1，1.0，10.0 mg/L的溶液。
       2.2   测试参数条件X波段，磁场范围：（336.0±10.0）mT，微波功率，5 mW，频率，9.45 GHz，调制幅度，100 kHz，响应时间，0.03 s，扫描时间：1 min，室温检测。
       2.3   DPPH自由基的检测方法
       2.3.1  空白对照组的测定取甲醇溶液200 μl，加入DPPH 100 μl 剧烈混合后，吸入石英毛细管，放入谐振腔，1 min后在上述测定参数条件下测定DPPH 自由基，记录谱图。
       2.3.2  样品溶液的测定取五倍子水提物不同浓度的样品溶液200 μl，分别加入DPPH 100 μl 剧烈混合后，按照上述方法进行测定DPPH自由基ESR信号； 五倍子醇提物不同浓度的样品溶液亦按照同样方法测定DPPH自由基ESR信号；记录谱图。
       3  结果
       3.1  ESR指标的测定DPPH是一个相对稳定的自由基，甲醇中测得的DPPH自由基的ESR图谱中，以第三峰高表示DPPH自由基的浓度。抗氧化剂的加入只会使峰的高度降低，不会改变形状，而且随着五倍子水提物和醇提物的浓度增加,其ESR信号强度递减。见图1。
       清除率=［(HDPPH /HMn)control - (HDPPH /HMn)sample ］ (HDPPH /HMn)control ×100%
       3.2  五倍子多酚类物质对DPPH的清除作用通过记录的谱图，测量出DPPH和Mn的峰高, 处理数据后，可以看出当加入一定浓度范围的五倍子水提物和醇提物后，DPPH自由基信号明显减弱，清除率随着浓度的增加而提高，说明五倍子多酚类物质对DPPH自由基有显著的清除作用，且呈明显的量-效关系。见图2。
       从图1中还可以看出五倍子两种提取物对DPPH具有不同的清除效果。五倍子醇提物的清除能力相对较弱，表现为在低浓度范围内清除率上升得比较快，而在高浓度范围内清除率上升得较为缓慢，10.0 mg/L清除率可达94.24%；五倍子水提物清除能力相对较强，特别是在低浓度时表现明显，在浓度为1.0 mg/L时清除率就已达到70.82%，在10.0 mg/L清除率已达到100%。经计算五倍子水提取物清除DPPH自由基的IC50（清除率达到50%时的样品浓度）为0.414 7 mg/L，五倍子醇提取物清除DPPH自由基的IC50为0.858 6 mg/L。
       4  讨论
       自由基学说认为，人体内虽不断产生自由基，但又不断被自身的一套有效机制所清除，而一旦体内自由基产生过多或清除能力下降时,就会导致各种炎症、脏器损伤、肿瘤、衰老等一系列病变，因此，抗氧化剂的研究越来越受到高度的重视。但由于使用的合成抗氧化剂多有不良反应，筛选能防御自由基损害的天然来源的抗氧化剂是目前研究的热点。本实验结果表明，五倍子水提取物和醇提取物对活性氧自由基均有很好的清除作用，而且五倍子水提取物的效果明显优于醇提取物，因抗氧化活性与其构造有关。
       
       五倍子中的主要有效成分为鞣质，我国药典上收载的五倍子鞣质，称为鞣酸（tannic acid），又叫单宁。它是倍酰葡萄糖的混合物，属水解鞣质。五倍子中鞣质以及没食子酸等成分具有较多邻位酚羟基的结构，通过作为氢供体释放出氢与环境中的自由基结合，终止自由基引发的链锁反应，从而阻止氧化过程的继续传递和进行，因此在生物体内具有较强的清除氧自由基的作用，从而产生了抗氧化的作用。五倍子是一种前景非常看好的抗衰老中药。关于五倍子的抗氧化作用还有许多方面有待于进一步深入研究。
       【参考文献】
         　　［1］徐勤.鞣质的研究进展［J］.华夏医学，2004.17（1）：113.
       
       ［2］E. G. Janzen, Acc, Chem. Res［J］.1971, 4：31.
       
       ［3］王传现，钟进义. 葡多酚对活性氧自由基的清除作用研究［J］.营养学报, 2001, 23(2)：170.